人膀胱平滑肌細胞提取物說明書

人膀胱平滑肌細胞提取物【Human Bladder : Normal Bladder Smooth Muscle Cell Derivatives】

人膀胱平滑肌細胞提取物是從人膀胱平滑肌細胞提取的，人膀胱平滑肌細胞從正常人膀胱組織制備。正常人膀胱組織采集自各地方醫(yī)院，采集工作根據(jù)IRB 和 HIPAA批準的方案進行。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過嚴格的QA/QC流程以確保其質(zhì)量。這些產(chǎn)品可以直接用于基因克隆，表達圖譜分析以及各種分子生物學實驗的研究。

總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進行純化。生物科技提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結(jié)果等。
cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA第一鏈，以50ul總反應體系進行逆轉(zhuǎn)錄，體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機引物以及10mg總RNA。68℃反應10min 后終止RT反應。利用1x RT Buffer 運輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴格的QA/QC分析，保證了產(chǎn)品的質(zhì)量。
蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人關節(jié)軟骨組織裂解液，離心去除組織碎片，通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。 

 實驗要點及說明：

1．本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細胞培養(yǎng)，懸浮細胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕；
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率；
5．如果細胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

 運輸和保存：

視天氣狀況和運輸距離遠近，公司與客戶協(xié)商后選擇下述方式中的一種進行。
1)1mL凍存細胞懸液裝于1.8ml的凍存管中，置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進行運輸；收到細胞后請盡快解凍復蘇細胞進行培養(yǎng)，如無法立刻進行復蘇操作，凍存細胞可在-80℃的條件下保存1個月。
2)T-25培養(yǎng)瓶充滿*培養(yǎng)基后進行常溫運輸；收到細胞后請鏡下觀察細胞生長狀態(tài)，如鋪瓶率超過85%請立即進行傳代操作，如懸浮的細胞較多，請將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細胞能夠再次貼壁。
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。

操作要點：

1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細胞能盡快通過易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi)，將管內(nèi)細胞轉(zhuǎn)移至準備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細胞懸液。
5）將細胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細胞瓶內(nèi)，補加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經(jīng)過2~3次傳代，細胞活力恢復后才能進行后續(xù)的實驗。

新霉素殘留酶聯(lián)免疫檢測試劑盒Cleroindicin F1892647

莫能菌素殘留酶聯(lián)免疫檢測試劑盒Cleroindicin E1651971

慶大霉素殘留酶聯(lián)免疫檢測試劑盒Cleroindicin D1892645

林可霉素殘留酶聯(lián)免疫檢測試劑盒Cleroindicin C1836268

玉米赤霉烯酮殘留酶聯(lián)免疫檢測試劑盒Cleroindicin B73891
Nifuroxazide  中文名：硝呋酚  分子式：C12H9N3O5    小鼠P選擇素(P-Selectin/CD62P)ELISAKit              

Nifedipine  中文名：硝苯地平  分子式：C17H18N2O6    中性蛋白酶測試盒   可見分光光度法   50管/24樣

Nicorandil  中文名：尼可地爾  分子式：C8H9N3O4    堿性蛋白酶測試盒   可見分光光度法   50管/24樣

Nicarbazin  中文名：尼卡巴嗪  分子式：C19H18N6O6    胰蛋白酶測試盒   紫外分光光度法   50管/48樣

Nevirapine  中文名：奈偉拉平  分子式：C15H14N4O    胃蛋白酶測試盒   可見分光光度法   50管/24樣
抑霉唑（標準品）   Imazalil  質(zhì)量規(guī)格：分析標準品 牛(EPI)試劑盒 Bovine Epinephrine/Adrenaline,EPI ELISA Kit

春雷霉素鹽酸鹽（標準品）  Kasugamycin hydrochloride  質(zhì)量規(guī)格：分析標準品,≥90% (HPLC) 牛(NO)試劑盒 Bovine Niic Oxide,NO ELISA Kit

標準溶液（10μg/ml,u=4%）  Kitazine solution  質(zhì)量規(guī)格：10μg/ml,u=4% 牛0酸甘油酸酯激酶2(PGK2)試劑盒 Bovine Phosphoglycerate kinase 2,PGK2 ELISA kit

利谷隆（標準品）   Linuron  質(zhì)量規(guī)格：分析標準品 牛0酸果糖激酶(PFK)ELISA檢測試劑盒BovinePhosphofructokinase,PFKELISAKit 96T/48T

苯噻草胺（標準品）  Mefenacet  質(zhì)量規(guī)格：分析標準品,98.5% 牛0酸果糖激酶(PFK)試劑盒 Bovine Phosphofructokinase,PFK ELISA Kit

甲磺隆標準溶液（10μg/ml,u=4%）  Metsulfuron-methyl solution  質(zhì)量規(guī)格：10μg/ml,u=4% 牛0酸化腺苷酸活化蛋白激酶(pAMPK)試劑盒 Bovine pAMPK ELISA Kit

甲霜靈（標準品）  Metalaxyl  質(zhì)量規(guī)格：分析標準品,98% 牛0酸烯醇式酸羧激酶(PCK)ELISA檢測試劑盒Bovinephosphoenolpyruvatecarboxykinase,PCKELISAKit 96T/48T

甲氧隆（標準品）  Metoxuron  質(zhì)量規(guī)格：分析標準品 牛0酸烯醇式酸羧激酶(PCK)試劑盒 Bovine phosphoenolpyruvate carboxykinase,PCK ELISA Kit

滅草隆（標準品）  Monuron  質(zhì)量規(guī)格：分析標準品 牛1試劑盒 Bovine Coisone ELISA Kit

煙嘧磺隆（標準品）  Nicosulfuron  質(zhì)量規(guī)格：分析標準品 牛ELISA試劑盒
人膀胱平滑肌細胞提取物說明書Tenuifoliside A  中文名：遠志蔗糖酯A  分子式：C31H38O17  度：95.0%  兔子內(nèi)皮型合成酶3(eNOS-3)ELISAKit  

3,3-Dimethylacrylic acid  中文名：千里光酸  分子式：C5H8O2  度：98.0%  兔子膽固醇酯轉(zhuǎn)移蛋白(CETP)ELISAKit              

Campsiketalin  中文名：  分子式：C10H20O4  度：95.0%  兔子內(nèi)皮抑素elisa試劑盒   兔子內(nèi)皮抑素試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   兔子內(nèi)皮抑素試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：兔子內(nèi)皮抑素試劑盒、兔子內(nèi)皮抑素elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。

Macranthoin G  中文名：灰氈毛忍冬素G  分子式：C26H26O12  度：97.0%  兔子甲狀腺素elisa試劑盒   兔子甲狀腺素試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   兔子甲狀腺素試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：兔子甲狀腺素試劑盒、兔子甲狀腺素elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。

5-O-Ethylcleroindicin D  中文名：  分子式：C10H16O4  度：%  兔子凝血因子Ⅱelisa試劑盒   兔子凝血因子Ⅱ試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   兔子凝血因子Ⅱ試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：兔子凝血因子Ⅱ試劑盒、兔子凝血因子Ⅱ elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。