實時熒光定量PCR: 實時熒光定量PCR技術(shù)有效地解決了傳統(tǒng)定量只能終點檢測的局限,實現(xiàn)了每一輪循環(huán)均檢測一次熒光信號的強度,并記錄在電腦軟件之中,通過對每個樣品Ct值的計算,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線獲得定量結(jié)果。因此,實時熒光定量PCR無需內(nèi)標(biāo)是建立在兩個基礎(chǔ)之上的: 1)Ct值的重現(xiàn)性PCR循環(huán)在到達Ct值所在的循環(huán)數(shù)時,剛剛進入真正的指數(shù)擴增期(對數(shù)期),此時微小誤差尚未放大,因此Ct值的重現(xiàn)性*,即同一模板不同時間擴增或同一時間不同管內(nèi)擴增,得到的Ct值是恒定的。 2)Ct值與起始模板的線性關(guān)系由于Ct值與起始模板的對數(shù)存在線性關(guān)系,可利用標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知樣品進行定量測定,因此,實時熒光定量PCR是一種采用外標(biāo)準(zhǔn)曲線定量的方法。 外標(biāo)準(zhǔn)曲線的定量方法相比內(nèi)標(biāo)法是一種準(zhǔn)確的、值得信賴的科學(xué)方法。利用外標(biāo)準(zhǔn)曲線的實時熒光定量PCR是迄今為止定量準(zhǔn)確,重現(xiàn)性的定量方法,已得到*的*,廣泛用于基因表達研究、轉(zhuǎn)基因研究,藥物療效考核、病原體檢測等諸多領(lǐng)域。 產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 貨號 | 牦牛源性成分探針法熒光定量PCR試劑盒價格 | | EY-P7418 |
熒光化學(xué)物質(zhì): 實時熒光定量PCR所使用的熒光物質(zhì)可分為兩種:熒光探針和熒光染料。現(xiàn)將其原理簡述如下: 1. TaqMan熒光探針:PCR擴增時在加入一對引物的同時加入一個特異性的熒光探針,該探針為一寡核苷酸,兩端分別標(biāo)記一個報告熒光基團和一個淬滅熒光基團。探針完整時,報告基團發(fā)射的熒光信號被淬滅基團吸收;PCR擴增時,Taq酶的5'-3'外切酶活性將探針酶切降解,使報告熒光基團和淬滅熒光基團分離,從而熒光監(jiān)測系統(tǒng)可接收到熒光信號,即每擴增一條DNA鏈,就有一個熒光分子形成,實現(xiàn)了熒光信號的累積與PCR產(chǎn)物形成*同步。而新型TaqMan-MGB探針使該技術(shù)既可進行基因定量分析,又可分析基因突變(SNP),有望成為基因診斷和個體化用藥分析的技術(shù)平臺。 2. SYBR熒光染料:在PCR反應(yīng)體系中,加入過量SYBR熒光染料,SYBR熒光染料非特異性地?fù)饺隓NA雙鏈后,發(fā)射熒光信號,而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會發(fā)射任何熒光信號,從而保證熒光信號的增加與PCR產(chǎn)物的增加*同步。SYBR僅與雙鏈DNA進行結(jié)合,因此可以通過溶解曲線,確定PCR反應(yīng)是否特異。 3. 分子信標(biāo):是一種在5和3末端自身形成一個8個堿基左右的發(fā)夾結(jié)構(gòu)的莖環(huán)雙標(biāo)記寡核苷酸探針,兩端的核酸序列互補配對,導(dǎo)致熒光基團與淬滅基團緊緊靠近,不會產(chǎn)生熒光。PCR產(chǎn)物生成后,退火過程中,分子信標(biāo)中間部分與特定DNA序列配對,熒光基因與淬滅基因分離產(chǎn)生熒光 。
熒光定量PCR服務(wù): 公司推出,該技術(shù)不僅實現(xiàn)了PCR從定性到定量的飛躍,而且與常規(guī)PCR相比,它具有特異性更強、有效解決PCR污染問題、自動化程度高等特點,目前該技術(shù)已被廣泛用于檢測細(xì)胞mRNA表達量的變化;比較不同組織的mRNA表達差異;驗證基因芯片,siRNA干擾的實驗結(jié)果等。我公司為您提供全套實時熒光定量PCR技術(shù)服務(wù),全部實驗皆使用進口試劑完成,主要定量PCR儀器。 1、熒光定量PCR服務(wù)要求: (01)請您提供新鮮的且盡量多的材料;或直接提供純化好的總RNA(大于 5 ug/樣品);或直接提供純化好的DNA(大于 5 ug/樣品)。 (02)請?zhí)峁┮阎娜L基因序列。 (03)請?zhí)峁┍M可能詳細(xì)的背景資料:DNA/RNA 來源等 2、熒光定量PCR操作程序 (01)引物(探針)設(shè)計與合成。 (02)提取DNA/RNA,樣本逆轉(zhuǎn)錄成cDNA。 (03)進行Real Time PCR實驗,進行實驗結(jié)果分析。 (04)實驗完成后,提供完整的實驗報告(含軟件分析結(jié)果)及引物等實驗材料。 3、熒光定量PCR的收費標(biāo)準(zhǔn): 我公司根據(jù)客戶的樣品數(shù)量進行不同的收費標(biāo)準(zhǔn)。 幾種傳統(tǒng)熒光定量PCR方法簡介: 1)內(nèi)參照法: 在不同的PCR反應(yīng)管中加入已定量的內(nèi)標(biāo)和引物,內(nèi)標(biāo)用基因工程方法合成。上游引物用熒光標(biāo)記,下游引物不標(biāo)記。在模板擴增的同時,內(nèi)標(biāo)也被擴增。在PCR產(chǎn)物中,由于內(nèi)標(biāo)與靶模板的長度不同,二者的擴增產(chǎn)物可用電泳或高效液相分離開來,分別測定其熒光強度,以內(nèi)標(biāo)為對照定量待檢測模板。 2)競爭法: 選擇由突變克隆產(chǎn)生的含有一個新內(nèi)切位點的外源競爭性模板。在同一反應(yīng)管中,待測樣品與競爭模板用同一對引物同時擴增(其中一個引物為熒光標(biāo)記)。擴增后用內(nèi)切酶消化PCR產(chǎn)物,競爭性模板的產(chǎn)物被酶解為兩個片段,而待測模板不被酶切,可通過電泳或高效液相將兩種產(chǎn)物分開,分別測定熒光強度,根據(jù)已知模板推測未知模板的起始拷貝數(shù)。 3)PCR-ELISA法: 利用或生物素等標(biāo)記引物,擴增產(chǎn)物被固相板上特異的探針?biāo)Y(jié)合,再加入抗或生物素酶標(biāo)抗體-辣根過氧化物酶結(jié)合物,終酶使底物顯色。常規(guī)的PCR-ELISA法只是定性實驗,若加入內(nèi)標(biāo),作出標(biāo)準(zhǔn)曲線,也可實現(xiàn)定量檢測目的。 鋅100克 Humanα1-microglobulin,α1-MGELISA試劑盒人α1微球蛋白(α1-MG)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 羥基磺酸) ELISAKitAFP小鼠甲種胎兒球蛋白/甲胎蛋白規(guī)格:48T/96T 平板計數(shù)瓊脂shēng huà shì jì容量:100克 Humananapasticlymphomakinase,ALKELISAKit人間變性淋巴瘤激酶(ALK)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 4-基傘形同基-N-酰-β-D-安基葡糖苷;4-基傘形同基-2-酰安基-2-脫;4-基傘形同酰-N-酰-β-D- 4-MqthyluMbqllifqryl-N-ccqtyl-β-D-glucoscMinidq;4-MqthyluMbqllifqryl-2-ccqtcMido-2-dqoxy-β-D-glucopyrcnosidq 37067-30-4 人抗腎小球基底膜抗體(GBM)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝 奈酚AS-TR乙酸酯shēng huà shì jì容量:保存:-20℃100毫克 小鼠可溶性CD30配體(sCD30L)免疫試劑盒 Mouse Soluble Cluster of differeiation 30 ligand,sCD30L ELISA Kit 明膠蛋白胨25克RT,避光 人肌細(xì)胞生成素(MYOG)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝 Deoxycholicacid 10g /100g原裝 Sigma D2510 小鼠單核細(xì)胞趨化蛋白2(MCP-2/CCL8)免疫試劑盒 Mouse monocyte chemotactic protein 2,MCP-2 ELISA kit 堿嶙酶標(biāo)記山羊抗兔IgGshēng huà shì jì容量:100條 血管生成抑制因子(Arresten)ELISA試劑盒 ,英文名: Arresten ELISA Kit 西司他丁銨 (cilastatin) Cilcstctin cMMoniuM Sclt 8009-34-2 Mousedopamine,DAELISA試劑盒小鼠多巴胺(DA)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 啊托伐他汀相關(guān)物質(zhì)D ctorvcstctin Rqlctqd CoMpound D;qpoxidq iMpurity, or 3-(4-Fluorobqnzoyl)-2-isobutyryl-3-phqnyl-oxircnq-2-ccrboxylic ccid phqnylcMidq 148146-21-4 ELISAKit17-OHCS小鼠17羥皮質(zhì)類固醇規(guī)格:48T/96T 分散酶,英文名或英文縮寫:Dispase,級別:BR,99%,規(guī)格:5克 humaneosinophil-associatedribonucleaseAfamilymember12,EAR12ELISAKit人嗜酸性白血球相關(guān)之RNA水解酵素家族成員12(EAR12)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 544-92-3清化亞銅COPPER(I) CYANIDE 牛乳酸(Lactate)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝 ACETICACID,GLACIALACS級透明無色液體RT不sigma 人足細(xì)胞標(biāo)記蛋白/足盂蛋白(PCX)免疫試劑盒 Human Podocalyxin,PCX ELISA Kit 2-溴二乙縮醛 2-Bromo Diethyl Acetal,98% 35822-58-3 5G 通用試劑 卵泡抑素(FS)ELISA試劑盒 ,英文名: FS ELISA Kit 鋁銨/銨明礬/十二水合鋁銨/鋁銨礬/銨鋁十二水合物/Aluminum ammonium sulfate AR,99.5% 500克 國產(chǎn)/進口 Ratai-Thyroid-Peroxidaseaibody,TPO-AbELISA試劑盒大鼠抗甲狀腺過氧化物酶抗體(TPO-Ab)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 牦牛源性成分探針法熒光定量PCR試劑盒價格TotalBLOTSOUTHERNKITWITHMEMBRANESOUTHERN 試劑盒(含膜)生物技術(shù)級RTsigma HumanEndocrineglandvascularendothelialgrowthfactor,EG-VEGFELISA試劑盒人內(nèi)分泌腺來源的血管內(nèi)皮生長因子(EG-VEGF)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 4號瓊脂NA 組織PIM2激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C)20次 VAZO88偶氮二環(huán)己基甲500毫克AR humanPepsinogenA,PG-AELISAKit人胃蛋白酶原A(PG-A)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 十六醇 1-Hqxcdqccnol 36623-8-4 兔子抗中性粒細(xì)胞顆粒抗體(ANGA)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝 PUC18shēng huà shì jì容量:RT1克 Human signal ansduction molecule (Smad1) ELISA Kit 人信號轉(zhuǎn)導(dǎo)分子(Smad1)ELISA試劑盒 |