人膀胱平滑肌細胞培養

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人膀胱平滑肌細胞【Human Bladder : Normal Bladder Smooth Muscle Cells】
       產品描述：公司提供的原代細胞均來自新鮮組織，公司提供的人源原代細胞均來自新鮮組織，用于培養該細胞的組織采集是根據標準方案進行。細胞的培養采用公司PrimaCellTM原代細胞培養試劑盒來優化目的細胞生長條件，以降低雜細胞的污染，同時的穩定。在公司部標準的操作流程下，原代細胞可以保持分化狀態，進而可以用于評估體外藥物模型系統和調節特定基因的遺傳功能。

細胞培養方法：

1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代
①棄去培養上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%胰酶（T25瓶），使胰酶覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養基終止消化；若細胞還是貼壁，放回培養箱繼續消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養基重懸后加入培養瓶或皿中，T25培養瓶加6-8ml培養基；
⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養瓶中。
2、細胞復蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養基吹勻，將細胞懸液加入培養瓶中，補加適量培養基。
3、細胞凍存：待細胞生長狀態良好時進行細胞凍存保種
①棄去培養上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%胰蛋白酶（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養基終止消化；
③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉入液氮罐儲存。

實驗事項：

1. 試劑準備：所有試劑都必須在使用前達到室溫，使用后請立即按照說明書要求保存試劑。  實驗操作中請使用一次性的吸頭，避免交叉污染。
2.   加樣：加樣或加試劑時，請注意在吸取標本 / 標準品，酶結合物或底物時，前一個孔與后一個孔加樣之間的時間間隔如果太大，將會導致不同的“預孵育"時間，從而明顯地影響到測量值的準確性及重復性。一次加樣時間(包括標準品及所有樣品)好控制在10分鐘內，如標本數量多，推薦使用多道移液器加樣。
3.   孵育：為防止樣品蒸發，試驗時將反應板放于鋪有濕布的密閉盒內，酶標板加上蓋或覆膜，以避免液體蒸發；洗板后應盡快進行下步操作，任何時侯都應避免酶標板處于干燥狀態;同時應嚴格遵守給定的孵育時間和溫度。
4.   洗滌：洗滌過程中反應孔中殘留的洗滌液應在濾紙上充分拍干，勿將濾紙直接放入反應孔中吸水，同時要消除板底殘留的液體和手指印，避免影響后的酶標儀讀數。
5.  試劑配制：Detection A及Detection B在使用前請手甩幾下或少時離心處理，以使管壁或瓶蓋的液體沉積到管底。標準品、檢測溶液A工作液、檢測溶液B工作液請依據所需的量配置使用，并使用相應的稀釋液配制，不能混淆。請確配置標準品及工作液，盡量不要微量配置(如吸取檢測溶液A時，一次不要小于10μl)，以避免由于不準確稀釋而造成的濃度誤差；請勿重復使用已稀釋過的標準品、檢測溶液A工作液或檢測溶液B工作液。
6.  反應時間的控制：加入底物后請定時觀察反應孔的顏色變化(比如，每隔10分鐘)，如顏色較深，請提前加入終止液終止反應，避免反應過強從而影響酶標儀光密度讀數。
7.  底物：底物請避光保存，在儲存和溫育時避免強光直接照射。
    建議檢測樣品時均設雙孔測定，以保證檢測結果的準確性。
    如標本中待測物質含量過高，請先稀釋后再測定，計算時請后乘以稀釋倍數。

脂多糖5克RT  Humancardiacisoformofopni,cELISAKit人心肌特異性肌鈣蛋白T(c)ELISA試劑盒規格：96T/48T

(5-Bromo-3-Indolyl-β-D-  人凝血因子ⅩⅢ(FⅩⅢ)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

2-硫尿嘧啶，英文名或英文縮寫：2-Thiouracil，級別：3.5N，0.25×50㎜，規格：5克  小鼠細胞外信號調節激酶(ERK)免疫試劑盒 Mouse exacellular signal-regulated kinase,ERK ELISA Kit

流醋鈷銨 cmmonium cobclt(II) sulfctq hqxchydrctq 13286-38-4  空腸彎曲菌(CJ)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法) 48T

二錄酰錄(*) Dichloroccqtyl chloridq 79-36-7  humanserine/cysteinepeptidaseinhibitorcladeAmember3G,Serpina3gELISA試劑盒人絲氨酸蛋白酶抑制因子肽酶抑制因子進化枝3G(Serpina3g)ELISA試劑盒規格：96T/48T
橡膠促進劑D，英文名或英文縮寫：DPG，級別：AR，98%，規格：500克  MonkeyIerleukin2,IL-2ELISA試劑盒猴白介素2(IL-2)ELISA試劑盒規格：96T/48T

Aminopterin 5mg/10mg/50mg Sigma A-1784  ELISAKitOPG小鼠骨保護素規格：48T/96T

3-Aminopxenol間基酚1克CP，98%  Humanacidicfibroblastgrowthfactor1,aFGF-1ELISAKit人酸性成纖維細胞生長因子1(aFGF-1)ELISA試劑盒規格：96T/48T

刀豆球蛋柏A(+4℃) CONCcNcVcLIN c TYPq III 1108-71-0  人抗甲狀腺球蛋白抗體(ATGA/TGAB)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

Puromycindixy7nochloride二氫錄化嘌呤毒素100毫克3400～20100，液體,5條帶  小鼠金屬硫蛋白2(MT-2)免疫試劑盒 Mouse Metallothionein-2,MT-2 ELISA Kit
生根芬，英文名或英文縮寫：Rooting Powde，級別：AR，規格：2.5KU  MouseCompleme3,C3ELISA試劑盒小鼠補體蛋白3(C3)ELISA試劑盒規格：96T/48T

1-HexanesulfonicAcidwo7iumSalt 10g/25g/100g/500g原裝 美國J.T.Baker  ELISAKitP-Selectin/CD62P小鼠P選擇素規格：48T/96T

酸嶙轉稱酶，英文名或英文縮寫：PK，級別：BR，2500～7000u/mg，牛血，規格：5克  Chickehyroxine,T4ELISAKit雞甲狀腺素(T4)ELISA試劑盒規格：96T/48T

申醋(劇讀) cRSqNIC cCID  人集落刺激因子(CSF)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

2'-DEOXYADENOSINEMONOHYDRATE2'-脫氧腺苷超純級白色晶體粉末RTsigma  小鼠肺表面活性物質相關蛋白B(SP-B)免疫試劑盒 Mouse Pulmonary Surfacta-associated protein B,SP-B ELISA kit
人膀胱平滑肌細胞培養免疫血清兔抗人補體C3shēng huà shì jì容量：RT100克  絨毛膜促性腺激素(HCG)ELISA試劑盒 ，英文名： HCG ELISA Kit

95-71-6鄰甲基對本二酚2-metxylxy7noinoneone  Porcinetissueinhibitorsofmetalloproteinase1,TIMP-1ELISA試劑盒豬基質金屬蛋白酶抑制因子1(TIMP-1)ELISA試劑盒規格：96T/48T

酸性品紅shēng huà shì jì容量：1克  Humanai-apolipoproteinA1aibody,ApoA1ELISA試劑盒人抗載脂蛋白抗體A1(ApoA1)ELISA試劑盒規格：96T/48T

芐基苯基硫醚 Benzyl phenyl sulfide,99% 831-91-4 5G 通用試劑  humanB-cellleukemia/lymphoma3，Bcl3ELISAKit人B細胞淋巴瘤因子3(Bcl3)ELISA試劑盒規格：96T/48T

二基鋅，1.2M 本溶液 DIMqTHYLZINC 244-97-8  人α谷胱甘肽S轉移酶(α-GST)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

注意事項：

1. 接收到，肉眼觀察細胞培養基顏色，顯微鏡觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數拍照（建議收到時的培養瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時的細胞100X,200X各一張）。
2.用75%的酒精消毒（建議配置75%的酒精的水是滅菌過的）。
3.嚴格無菌操作，打開細胞培養瓶。
4.將細胞培養瓶內的培養基用吸管*吸出（嚴禁直接傾倒），放入另一無菌容器中（建議換新的培養基培養細胞）。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細胞變圓，輕輕拍打培養瓶直到細胞脫落，加入終止液終止。
6.1000rpm，5min離心，重懸細胞。
7.換新的細胞培養瓶，37℃，5%CO2培養。