Primarker™人淋巴成纖維細(xì)胞鑒定試劑盒

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Primarker™人淋巴成纖維細(xì)胞鑒定試劑盒

總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進行純化。生物科技提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結(jié)果等。
cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA鏈，以50ul總反應(yīng)體系進行逆轉(zhuǎn)錄，體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機引物以及10mg總RNA。68℃反應(yīng)10min 后終止RT反應(yīng)。利用1x RT Buffer 運輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng)。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴(yán)格的QA/QC分析，保證了產(chǎn)品的質(zhì)量。
蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人關(guān)節(jié)軟骨組織裂解液，離心去除組織碎片，通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。

細(xì)胞培養(yǎng)方法；

1、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%胰酶（T25瓶），使胰酶覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細(xì)胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補加適量培養(yǎng)基。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時進行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%胰蛋白酶（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。

實驗事項；

1. 試劑準(zhǔn)備：所有試劑都必須在使用前達(dá)到室溫，使用后請立即按照說明書要求保存試劑。  實驗操作中請使用一次性的吸頭，避免交叉污染。
2.   加樣：加樣或加試劑時，請注意在吸取標(biāo)本 / 標(biāo)準(zhǔn)品，酶結(jié)合物或底物時，前一個孔與后一個孔加樣之間的時間間隔如果太大，將會導(dǎo)致不同的“預(yù)孵育"時間，從而明顯地影響到測量值的準(zhǔn)確性及重復(fù)性。一次加樣時間(包括標(biāo)準(zhǔn)品及所有樣品)好控制在10分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用多道移液器加樣。
3.   孵育：為防止樣品蒸發(fā)，試驗時將反應(yīng)板放于鋪有濕布的密閉盒內(nèi)，酶標(biāo)板加上蓋或覆膜，以避免液體蒸發(fā)；洗板后應(yīng)盡快進行下步操作，任何時侯都應(yīng)避免酶標(biāo)板處于干燥狀態(tài);同時應(yīng)嚴(yán)格遵守給定的孵育時間和溫度。
4.   洗滌：洗滌過程中反應(yīng)孔中殘留的洗滌液應(yīng)在濾紙上充分拍干，勿將濾紙直接放入反應(yīng)孔中吸水，同時要消除板底殘留的液體和手指印，避免影響后的酶標(biāo)儀讀數(shù)。
5.  試劑配制：Detection A及Detection B在使用前請手甩幾下或少時離心處理，以使管壁或瓶蓋的液體沉積到管底。標(biāo)準(zhǔn)品、檢測溶液A工作液、檢測溶液B工作液請依據(jù)所需的量配置使用，并使用相應(yīng)的稀釋液配制，不能混淆。請確配置標(biāo)準(zhǔn)品及工作液，盡量不要微量配置(如吸取檢測溶液A時，一次不要小于10μl)，以避免由于不準(zhǔn)確稀釋而造成的濃度誤差；請勿重復(fù)使用已稀釋過的標(biāo)準(zhǔn)品、檢測溶液A工作液或檢測溶液B工作液。
6.  反應(yīng)時間的控制：加入底物后請定時觀察反應(yīng)孔的顏色變化(比如，每隔10分鐘)，如顏色較深，請?zhí)崆凹尤虢K止液終止反應(yīng)，避免反應(yīng)過強從而影響酶標(biāo)儀光密度讀數(shù)。
7.  底物：底物請避光保存，在儲存和溫育時避免強光直接照射。
    建議檢測樣品時均設(shè)雙孔測定，以保證檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。
    如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高，請先稀釋后再測定，計算時請后乘以稀釋倍數(shù)。

粘膠質(zhì)，英文名或英文縮寫：Pectin，級別：試劑級，98%，規(guī)格：5克  脈沖凝膠電泳DNA產(chǎn)物酶切試劑盒20次

36431-72-8茶香螺烷 ≥90% (GC)2,6,10,10-Tetrametxyl-1-oxaspiro[4.5]dec-6-ene  ELISAKitMVIgG人麻疹病毒IgG規(guī)格：48T/96T

D-lsoleucineD-異白酸25克BR，98%  小鼠GATA結(jié)合蛋白4(GATA4)ELISA試劑盒 ，英文名： GATA4 ELISA Kit

3-安 3-(cminomqthyl)pyridinq 3731-2-0  大鼠6酮前列腺素(6-K-PG)ELISA檢測試劑盒Rat6-keto-prostaglandin,6-K-PGELISAKit 96T/48T

Diallyisophthalate間酞酸二烯丙酯10毫克AR，98%  人D-乳酸脫氫酶(D-LDH)免疫試劑盒 Human D-Lactate Dehydrogenase,D-LDH ELISA Kit
溴綠10克  豚鼠免疫球蛋白G(IgG)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

(腦浸粉)  Human cytotoxin (CTX) ELISA Kit 人細(xì)胞毒素(CTX)ELISA試劑盒

5-基戊酸，英文名或英文縮寫：5-Aminovaleric acid，級別：CP，規(guī)格：50克  Humanai-cardiolipinaibodyIgG,ACA-IgGELISAKit 人抗心1脂抗體IgG(ACA-IgG)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝

檸檬醋鉍銨;枸櫞醋鉍銨 cMMoniuM bisMuth citrctq 31886-41-6  humanC-typelectindomainfamily4membere,CLEC4EELISA試劑盒人C型凝集素結(jié)構(gòu)域家族4成員E(CLEC4E)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

癸二醋二丁酯 Dibutyl Sqbccctq (cS) 109-43-3  組織EPHB2激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C)20次
蘇丹50毫克  冰凍切片蘇木素染色試劑盒50次

(土豆葡萄糖瓊脂)  RatBeta-HydroxybyricAcid,β-OHBELISA試劑盒大鼠β(βOHB)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

3,4,5-三羥基本酸十二烷基酯，英文名或英文縮寫：Dithiooxamide，級別：3.5N，規(guī)格：5克  小鼠Ⅲ型膠原交聯(lián)羧基端肽(CTXⅢ)ELISA試劑盒 ，英文名： CTXⅢ ELISA Kit

6,6-二基富烯 ≥97.0%(-20°C) 6,6-DIMqTHYLFULVqNq 172-91-9  人孕酮受體(PGR)ELISA檢測試劑盒Humanprogesteronereceptor,PGRELISAKit 96T/48T

氧化鎢水合物，英文名或英文縮寫：Ammonium tungsten oxide hydrate，級別：AR，97%，規(guī)格：100克  大鼠防御素5 免疫試劑盒 Rat defensin-5 ELISA kit
Primarker™人淋巴成纖維細(xì)胞鑒定試劑盒價格葡糖酸內(nèi)酯shēng huà shì jì容量：100克  人抗紡錘體抗體(MSA)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

CollagenaseV 100mg Sigma分裝  小鼠基質(zhì)金屬蛋白酶8/中性粒細(xì)胞膠原酶(MMP-8)免疫試劑盒 Mouse maix metalloproteinase 8/Neuophil collagenase,MMP-8 ELISA kit

5-胞苷二嶙酸單鈉鹽100克  乙酰輔酶A羧化酶合成酶(ACC)ELISA試劑盒 ，英文名： ACC ELISA Kit

cLLTqC-1000  MouseAmylinELISA試劑盒小鼠胰淀素(Amylin)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

松胞速B(-20℃) CYTOCHcLcSIN B 14930-96-  ELISAKitCETP小鼠膽固醇酯轉(zhuǎn)移蛋白規(guī)格：48T/96T

注意事項；

1. 接收到，肉眼觀察細(xì)胞培養(yǎng)基顏色，顯微鏡觀察細(xì)胞生長情況，并對細(xì)胞進行不同倍數(shù)拍照（建議收到時的培養(yǎng)瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時的細(xì)胞100X,200X各一張）。
2.用75%的酒精消毒（建議配置75%的酒精的水是滅菌過的）。
3.嚴(yán)格無菌操作，打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶。
4.將細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)基用吸管*吸出（嚴(yán)禁直接傾倒），放入另一無菌容器中（建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞）。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細(xì)胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細(xì)胞變圓，輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細(xì)胞脫落，加入終止液終止。
6.1000rpm，5min離心，重懸細(xì)胞。
7.換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶，37℃，5%CO2培養(yǎng)。