PrimaCell™大鼠關(guān)節(jié)軟骨細胞試劑盒價格

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PrimaCell™大鼠關(guān)節(jié)軟骨細胞試劑盒

總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進行純化。生物科技提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結(jié)果等。
cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA第一鏈，以50ul總反應(yīng)體系進行逆轉(zhuǎn)錄，體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機引物以及10mg總RNA。68℃反應(yīng)10min 后終止RT反應(yīng)。利用1x RT Buffer 運輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng)。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴格的QA/QC分析，保證了產(chǎn)品的質(zhì)量。
蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人關(guān)節(jié)軟骨組織裂解液，離心去除組織碎片，通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。

細胞培養(yǎng)方法；

1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%胰酶（T25瓶），使胰酶覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；若細胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補加適量培養(yǎng)基。
3、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%胰蛋白酶（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；
③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。

實驗事項；

1. 試劑準備：所有試劑都必須在使用前達到室溫，使用后請立即按照說明書要求保存試劑。  實驗操作中請使用一次性的吸頭，避免交叉污染。
2.   加樣：加樣或加試劑時，請注意在吸取標本 / 標準品，酶結(jié)合物或底物時，前一個孔與后一個孔加樣之間的時間間隔如果太大，將會導(dǎo)致不同的“預(yù)孵育"時間，從而明顯地影響到測量值的準確性及重復(fù)性。一次加樣時間(包括標準品及所有樣品)好控制在10分鐘內(nèi)，如標本數(shù)量多，推薦使用多道移液器加樣。
3.   孵育：為防止樣品蒸發(fā)，試驗時將反應(yīng)板放于鋪有濕布的密閉盒內(nèi)，酶標板加上蓋或覆膜，以避免液體蒸發(fā)；洗板后應(yīng)盡快進行下步操作，任何時侯都應(yīng)避免酶標板處于干燥狀態(tài);同時應(yīng)嚴格遵守給定的孵育時間和溫度。
4.   洗滌：洗滌過程中反應(yīng)孔中殘留的洗滌液應(yīng)在濾紙上充分拍干，勿將濾紙直接放入反應(yīng)孔中吸水，同時要消除板底殘留的液體和手指印，避免影響后的酶標儀讀數(shù)。
5.  試劑配制：Detection A及Detection B在使用前請手甩幾下或少時離心處理，以使管壁或瓶蓋的液體沉積到管底。標準品、檢測溶液A工作液、檢測溶液B工作液請依據(jù)所需的量配置使用，并使用相應(yīng)的稀釋液配制，不能混淆。請確配置標準品及工作液，盡量不要微量配置(如吸取檢測溶液A時，一次不要小于10μl)，以避免由于不準確稀釋而造成的濃度誤差；請勿重復(fù)使用已稀釋過的標準品、檢測溶液A工作液或檢測溶液B工作液。
6.  反應(yīng)時間的控制：加入底物后請定時觀察反應(yīng)孔的顏色變化(比如，每隔10分鐘)，如顏色較深，請?zhí)崆凹尤虢K止液終止反應(yīng)，避免反應(yīng)過強從而影響酶標儀光密度讀數(shù)。
7.  底物：底物請避光保存，在儲存和溫育時避免強光直接照射。
    建議檢測樣品時均設(shè)雙孔測定，以保證檢測結(jié)果的準確性。
    如標本中待測物質(zhì)含量過高，請先稀釋后再測定，計算時請后乘以稀釋倍數(shù)。

犬內(nèi)皮型合成酶(eNOS)試劑盒 Dog Endothelial niic oxide syhase,eNOS ELISA Kit  97747-88-1鹽酸川芎嗪規(guī)格  Ligustrazine

英文名稱HumanInsulin-likegrowthfactor2,IGF-IIELISAKit人胰島素樣生長因子2(IGF-2)規(guī)格：96T/48T  104112-82-5鹽酸黃柏堿  Phellodendrine chloride

化人體RUNX3基因重組表達載體(pGEFP-RUNX3)10微克  6020-18-4鹽酸黃連堿說明書  Coptisine chloride

Rathydroxyproline,HypELISA試劑盒大鼠羥脯氨酸(Hyp)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  6080-33-7鹽酸青藤堿品牌  Sinomenine

小鼠整合素αM(Itgam/CD11b)ELISA試劑盒 ，英文名： Itgam/CD11b ELISA Kit  2188-68-3鹽酸石蒜堿規(guī)格  Lycorine chloride
30220-46-3巨大戟醇  Ingenol   熒光定量PCR分析20樣本

30197-14-9去氧土大黃苷  Deoxyrhapontin   熒光標記法細胞端粒酶活性AP電泳分析試劑盒10

30045-16-0脫氫紫堇堿品牌  Dehydrocorydaline   英文名稱抗胰島細胞抗體規(guī)格：96T/48T

30045-16-0脫氫紫堇堿  Dehydrocorydaline   英文名稱抗胰島素自體抗體規(guī)格：96T/48T

3，6-二芥子酰基蔗糖說明書  3,6’－Disinapoyl sucrose   英文名稱核糖體、P抗體、IgG/M/A規(guī)格：96T/48T
小鼠抑制素βE(INHβE)ELISA試劑盒 ，英文名： INHβE ELISA Kit  2009-24-7花椒毒酚規(guī)格  Xanthotoxol

抗中性粒細胞顆粒抗體(ANGA)ELISA檢測試劑盒Rabbitai-neuophilgranulesaibody,ANGAELISAKit 96T/48T  471-66-9α-乳香酸  α-Boswellic acid

犬環(huán)1酸鳥苷(cGMP)試劑盒 Canine cyclic Guanosine monophosphate,cGMP ELISA Kit  97-59-6尿囊素說明書  Allantoin

英文名稱HumanGATA4ELISAKit人心肌轉(zhuǎn)錄因子(GATA4)規(guī)格：96T/48T  10597-60-1羥基酪醇品牌  Hydroxytyrosol

化線粒體氧化應(yīng)激活性氧(ROS)光澤精化學(xué)發(fā)光法定量檢測試劑盒50  52659-56-0奇任醇規(guī)格  Kirenol
PrimaCell™大鼠關(guān)節(jié)軟骨細胞試劑盒價格55056-80-9原薯蕷皂苷品牌   Protodioscin  豬心型脂肪酸結(jié)合蛋白(FABP3/FABP11/MDGI)試劑盒 Pig Fatty acid-binding protein, hea,FABP3 ELISA kit

55033-90-4異鼠李素-3-O-新橙皮苷  Isorhamnetin-3-O-neohespeidoside  豬心肽(ANP)試劑盒 Pig Aial Naiuretic Peptide,ANP ELISA Kit

548-83-4高良姜素說明書  Galangin   豬心肌特異性肌鈣蛋白T(c)試劑盒 Pig cardiac isoform of opnin T,c ELISA Kit

548-83-4高良姜素規(guī)格  Galangin   豬心肌肌鈣蛋白Ⅰ(cTn-Ⅰ)試劑盒 Pig cardiac oponin Ⅰ,cTn-ⅠELISA Kit

548-77-6鳶尾黃素  Tectorigenin  豬酰基輔酶A去飽和酶(SCD)試劑盒 Pig Acyl-CoA desaturase,SCD ELISA kit

注意事項；

1. 接收到，肉眼觀察細胞培養(yǎng)基顏色，顯微鏡觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數(shù)拍照（建議收到時的培養(yǎng)瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時的細胞100X,200X各一張）。
2.用75%的酒精消毒（建議配置75%的酒精的水是滅菌過的）。
3.嚴格無菌操作，打開細胞培養(yǎng)瓶。
4.將細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)基用吸管*吸出（嚴禁直接傾倒），放入另一無菌容器中（建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細胞）。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細胞變圓，輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細胞脫落，加入終止液終止。
6.1000rpm，5min離心，重懸細胞。
7.換新的細胞培養(yǎng)瓶，37℃，5%CO2培養(yǎng)。