PrimaCell™大鼠肺大動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞試劑盒

PrimaCell™大鼠肺大動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞試劑盒

總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進(jìn)行純化。生物科技提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測(cè)定結(jié)果等。
cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA第一鏈，以50ul總反應(yīng)體系進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機(jī)引物以及10mg總RNA。68℃反應(yīng)10min 后終止RT反應(yīng)。利用1x RT Buffer 運(yùn)輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng)。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴(yán)格的QA/QC分析，保證了產(chǎn)品的質(zhì)量。
蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人關(guān)節(jié)軟骨組織裂解液，離心去除組織碎片，通過Bio-Rad蛋白檢測(cè)試劑盒測(cè)定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。 

實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說明；

1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕；
4．如果需要更多生長(zhǎng)狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率；
5．如果細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

運(yùn)輸和保存；

視天氣狀況和運(yùn)輸距離遠(yuǎn)近，公司與客戶協(xié)商后選擇下述方式中的一種進(jìn)行。
1)1mL凍存細(xì)胞懸液裝于1.8ml的凍存管中，置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進(jìn)行運(yùn)輸；收到細(xì)胞后請(qǐng)盡快解凍復(fù)蘇細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，如無法立刻進(jìn)行復(fù)蘇操作，凍存細(xì)胞可在-80℃的條件下保存1個(gè)月。
2)T-25培養(yǎng)瓶充滿*培養(yǎng)基后進(jìn)行常溫運(yùn)輸；收到細(xì)胞后請(qǐng)鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)，如鋪瓶率超過85%請(qǐng)立即進(jìn)行傳代操作，如懸浮的細(xì)胞較多，請(qǐng)將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細(xì)胞能夠再次貼壁。
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號(hào)21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。

操作要點(diǎn)；

1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個(gè)15mL無菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動(dòng)凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細(xì)胞能盡快通過易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細(xì)胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺(tái)內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時(shí)避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。
5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動(dòng)細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長(zhǎng)至80~90%匯合時(shí)正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。

小鼠整合素α-IIb(Itga2b/CD41)ELISA試劑盒 ，英文名： Itga2b/CD41 ELISA Kit  24697-74-3鹽酸益母草堿說明書  Leonurine

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Ratalpha-granularmembraneprotein,GMP-140ELISAKit大鼠血漿α顆粒膜蛋白(GMP-140)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  529-44-2楊梅素  Myricetin

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29838-67-3落新婦苷  Astilbin  英文名稱Ratβ-ThromboglobulinELISAKit大鼠β血小板球蛋白(β-TG)規(guī)格：96T/48T

29782-68-1水飛薊寧說明書  Silydianin    英文名稱Ratβ-ThromboglobulinELISAKit大鼠β血小板球蛋白(β-TG)規(guī)格：96T/48T

29782-68-1水飛薊寧說明書  Silydianin   英文名稱Ratβ-HCGELISAKit大鼠絨毛膜促性腺激素β(β-HCG)規(guī)格：96T/48T
小鼠游離(F-TESTO)ELISA試劑盒 ，英文名： F-TESTO ELISA Kit  140147-77-9朝藿定A1規(guī)格  Epimedin A1

小鼠克拉拉細(xì)胞蛋白(CC16)ELISA檢測(cè)試劑盒MouseClaracellprotein,CC16ELISAKit 96T/48T  二氫姜黃素  Dihydrocurcumin

人睫狀神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(CF)試劑盒 Human CF ELISA Kit  2385-63-9蓮心堿高氯酸鹽說明書  Liensinine Perchlorate

Ratai-EndomysialAibodyIgA,EMAIgAELISAKit大鼠抗肌內(nèi)膜抗體IgA(EMAIgA)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  122021-74-3丹參酚酸B甲酯品牌  Monomethyl lithospermate B

組蛋白H2B-K5乙酰化檢測(cè)試劑盒10/20等  88182-33-6歐當(dāng)歸內(nèi)酯A規(guī)格  Levistilide A
PrimaCell™大鼠肺大動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞試劑盒說明書552-66-9大豆苷品牌  Daidzin   豬血管內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子1(VCAM-1)試劑盒 Porcine Vascular cell adhesion molecule 1,VCAM-1 ELISA Kit

552-59-0櫻黃素說明書  Prunetin  豬血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子(VEGF)試劑盒 Pig Vascular Endothelial cell Growth Factor,VEGF ELISA KIT

552-59-0櫻黃素  Prunetin  豬血管內(nèi)皮鈣粘著蛋白復(fù)合體(VE-cad)試劑盒 Pig Vascular Endothelial-Cadherin Complex,VE-cad ELISA Kit

552-58-9圣草酚說明書  Eriodictyol   豬血管內(nèi)皮鈣粘著蛋白復(fù)合體(VE-cad)ELISA檢測(cè)試劑盒PorcineVascularEndothelial-CadherinComplex,VE-cadELISAKit 96T/48T

552-58-9圣草酚說明書  Eriodictyol  豬血管緊張素轉(zhuǎn)化酶2(ACE2)試劑盒 Pig Angiotensin conveing enzyme 2,ACE2 ELISA Kit