小腦顆粒細(xì)胞和腫瘤原代細(xì)胞提取物培養(yǎng)

小腦顆粒細(xì)胞和腫瘤原代細(xì)胞提取物【Human Cerebellum MatchPair: Normal Cerebellar Granule Cell Derivatives and Primary Tumor Cell Derivatives】

人小腦顆粒細(xì)胞和腫瘤原代細(xì)胞提取物是從人原代小腦顆粒細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞中提取的，人原代小腦顆粒細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞分別從正常人小腦組織和腫瘤組織中制備。正常人小腦組織和腫瘤組織采集自各地方醫(yī)院，采集工作根據(jù)IRB 和 HIPAA批準(zhǔn)的方案進(jìn)行。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過嚴(yán)

總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進(jìn)行純化。生物科技提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結(jié)果等。
cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA第一鏈，以50ul總反應(yīng)體系進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機(jī)引物以及10mg總RNA。68℃反應(yīng)10min 后終止RT反應(yīng)。利用1x RT Buffer 運(yùn)輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng)。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴(yán)格的QA/QC分析，保證了產(chǎn)品的質(zhì)量。
蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人關(guān)節(jié)軟骨組織裂解液，離心去除組織碎片，通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。

 實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說明：

1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕；
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率；
5．如果細(xì)胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

操作要點(diǎn)：

1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個(gè)15mL無菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動(dòng)凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細(xì)胞能盡快通過易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細(xì)胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺(tái)內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時(shí)避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。
5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶內(nèi)，補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動(dòng)細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長至80~90%匯合時(shí)正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。

布魯氏桿菌抗體檢測試紙條卡/包，包/盒Fenbendazole4327芬苯達(dá)唑

小反芻獸疫病毒抗體檢測試紙條卡/包，包/盒Fenazox616187氨芬酸鈉

小反芻獸疫抗體ELISA檢測試劑盒96TFelodipine7296非洛地平

牛口蹄疫抗體ELISA檢測試劑盒96TFebuxostat143非布索坦

牛羊布病抗體ELISA檢測試劑盒96TFalcarinol2185
Febuxostat  144060-53-7  中文名：非布索坦  分子式：C16H16N2O3S  度：98.0%  關(guān)鍵詞：    小鼠嗜酸粒細(xì)胞趨化蛋白Eotaxin2(Eotaxin2/CCL24)ELISA試劑盒  

Falcarinol  21852-80-2  中文名：  分子式：C17H24O  度：%  關(guān)鍵詞：    小鼠嗜酸粒細(xì)胞趨化蛋白Eotaxin1(Eotaxin1/CCL11)ELISA試劑盒           

Falcarindiol  55297-87-5  中文名：  分子式：C17H24O2  度：97.0%  關(guān)鍵詞：  抗真菌; 抗生素; 鎮(zhèn)痛; DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制劑; 當(dāng)歸; 聚乙炔; 中藥對(duì)照品; 中藥標(biāo)準(zhǔn)品; 植物提取物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫  小鼠嗜環(huán)蛋白/親環(huán)素A(CyPA)ELISAKit  

Ezetimibe  BBP80298  中文名：依澤替米貝  分子式：C24H21F2NO3  度：98.0%  關(guān)鍵詞：    小鼠骨形成蛋白6(BMP-6)ELISAKit  

Exemestane  107868-30-4  中文名：依西美坦  分子式：C20H24O2  度：98.0%  關(guān)鍵詞：    小鼠細(xì)胞因子ELISAKit
石英砂(AR,6-10目或2-3mm)  Sand  質(zhì)量規(guī)格：AR,6-10目或2-3mm 犬胰腺甘油三酯脂酶(PNLIP)試劑盒 Dog Pancreatic iacylglycerol lipase,PNLIP ELISA kit

石英砂(AR,8-16目或1-2mm)  Sand  質(zhì)量規(guī)格：AR,8-16目或1-2mm 犬乙酰膽堿受體抗體(AChRab)ELISA檢測試劑盒Canineacetylcholinereceptoraibody,AChRabELISAKit 96T/48T

二氫銨(SP)  Ammonium phosphate monobasic  質(zhì)量規(guī)格：SP 犬乙酰膽堿受體抗體(AChRab)試劑盒 Canine acetylcholine receptor aibody,AChRab ELISA Kit

二甲基亞砜(光譜級(jí)，>99.9% (GC))  Dimethyl sulfoxide  質(zhì)量規(guī)格：光譜級(jí)，>99.9% (GC) 犬乙型肝炎表面抗原(HBsAg)ELISA檢測試劑盒CaninehepatitisBvirussurfaceaigen,HBsAgELISAKit 96T/48T

N,N-二甲基乙酰胺(光譜級(jí),≥99.8%(GC))  N-N-Dimethylacetamide  質(zhì)量規(guī)格：光譜級(jí),≥99.8%(GC) 犬乙型肝炎表面抗原(HBsAg)試劑盒 Canine hepatitis B virus surface aigen,HBsAg ELISA Kit

二甲基亞砜(ACS,光譜級(jí))  Dimethyl sulfoxide  質(zhì)量規(guī)格：ACS,光譜級(jí) 犬抑制素β-B(Inhbb)試劑盒 Canine inhibin beta-B,Inhbb ELISA Kit

乙二醇(光譜 ,≥99%)  Ethylene glycol  質(zhì)量規(guī)格：光譜 ,≥99% 犬游離甲狀腺素(FT4)試劑盒 Canine Free Thyroxine,FT4 ELISA Kit

甘油(for spectroscopy,≥99.5%)  Glycerol in water for HPLC verification  質(zhì)量規(guī)格：for spectroscopy,≥99.5% 犬游離*狀腺原氨酸(Free-T3)試劑盒 Canine Free i-iodothyronine Indes,Free-T3 ELISA Kit

碳酸鋰(SP)  Lithium carbonate  質(zhì)量規(guī)格：SP 犬游離脂肪酸(FFA)試劑盒 Dog free fatty acids,FFA ELISA kit

新亞銅試劑鹽酸鹽一水合物(99%)  Neocuproine hydrochloride monohydrate  質(zhì)量規(guī)格：0.99 犬誘導(dǎo)型合成酶(iNOS)試劑盒 Dog inducible niic oxide syhase,iNOS ELISA Kit
小腦顆粒細(xì)胞和腫瘤原代細(xì)胞提取物培養(yǎng)土壤纖維素酶（S-CL）測試盒   可見分光光度法   50管/24樣  4-Amino-3-hydroxybenzoic acid  2374-03-0  中文名：4-氨基-3-羥基苯甲酸  分子式：C7H7NO3  度：98.0%   

土壤無機(jī)0（S-PHOS）含量測試盒   可見分光光度法   50管/48樣  4-Amino-3-hydroxy-1-naphthalenesulfonic acid  116-63-2  中文名：4-氨基-3-羥基-1-萘磺酸  分子式：C10H9NO4S  度：98.0%   

土壤無機(jī)0（S-PHOS）含量測試盒   可見分光光度法   50管/24樣  4-Aminoantipyrine  中文名：4-氨基安替比林  分子式：C11H13N3O  度：99.0%

土壤脫氫酶(SDHA)測試盒   可見分光光度法   50管/24樣              4-Aminoantipyrine  中文名：4-氨基安替比林  分子式：C11H13N3O 

土壤酸性蛋白酶試劑盒   可見分光光度法   50管/24樣  4-Amino-2,5-dimethoxy-N-phenylbenzenesulphonamide  中文名：4-氨基-2,5-二甲氧基-N-苯基苯磺酰胺  分子式：C14H16N2O4S  度：99.0%

運(yùn)輸和保存：
視天氣狀況和運(yùn)輸距離遠(yuǎn)近，公司與客戶協(xié)商后選擇下述方式中的一種進(jìn)行。
1)1mL凍存細(xì)胞懸液裝于1.8ml的凍存管中，置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進(jìn)行運(yùn)輸；收到細(xì)胞后請(qǐng)盡快解凍復(fù)蘇細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，如無法立刻進(jìn)行復(fù)蘇操作，凍存細(xì)胞可在-80℃的條件下保存1個(gè)月。
2)T-25培養(yǎng)瓶充滿*培養(yǎng)基后進(jìn)行常溫運(yùn)輸；收到細(xì)胞后請(qǐng)鏡下觀察細(xì)胞生長狀態(tài)，如鋪瓶率超過85%請(qǐng)立即進(jìn)行傳代操作，如懸浮的細(xì)胞較多，請(qǐng)將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細(xì)胞能夠再次貼壁。
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號(hào)21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。