實時熒光定量PCR: 實時熒光定量PCR技術有效地解決了傳統定量只能終點檢測的局限,實現了每一輪循環均檢測一次熒光信號的強度,并記錄在電腦軟件之中,通過對每個樣品Ct值的計算,根據標準曲線獲得定量結果。因此,實時熒光定量PCR無需內標是建立在兩個基礎之上的: 1)Ct值的重現性PCR循環在到達Ct值所在的循環數時,剛剛進入真正的指數擴增期(對數期),此時微小誤差尚未放大,因此Ct值的重現性*,即同一模板不同時間擴增或同一時間不同管內擴增,得到的Ct值是恒定的。 2)Ct值與起始模板的線性關系由于Ct值與起始模板的對數存在線性關系,可利用標準曲線對未知樣品進行定量測定,因此,實時熒光定量PCR是一種采用外標準曲線定量的方法。 外標準曲線的定量方法相比內標法是一種準確的、值得信賴的科學方法。利用外標準曲線的實時熒光定量PCR是迄今為止定量準確,重現性的定量方法,已得到*的*,廣泛用于基因表達研究、轉基因研究,藥物療效考核、病原體檢測等諸多領域。 產品名稱 | 英文名稱 | 貨號 | 諾氏瘧原蟲探針法熒光定量PCR試劑盒 | Plasmodium knowlesi | EY-P7080 |
熒光化學物質: 實時熒光定量PCR所使用的熒光物質可分為兩種:熒光探針和熒光染料。現將其原理簡述如下: 1. TaqMan熒光探針:PCR擴增時在加入一對引物的同時加入一個特異性的熒光探針,該探針為一寡核苷酸,兩端分別標記一個報告熒光基團和一個淬滅熒光基團。探針完整時,報告基團發射的熒光信號被淬滅基團吸收;PCR擴增時,Taq酶的5'-3'外切酶活性將探針酶切降解,使報告熒光基團和淬滅熒光基團分離,從而熒光監測系統可接收到熒光信號,即每擴增一條DNA鏈,就有一個熒光分子形成,實現了熒光信號的累積與PCR產物形成*同步。而新型TaqMan-MGB探針使該技術既可進行基因定量分析,又可分析基因突變(SNP),有望成為基因診斷和個體化用藥分析的技術平臺。 2. SYBR熒光染料:在PCR反應體系中,加入過量SYBR熒光染料,SYBR熒光染料非特異性地摻入DNA雙鏈后,發射熒光信號,而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會發射任何熒光信號,從而保證熒光信號的增加與PCR產物的增加*同步。SYBR僅與雙鏈DNA進行結合,因此可以通過溶解曲線,確定PCR反應是否特異。 3. 分子信標:是一種在5和3末端自身形成一個8個堿基左右的發夾結構的莖環雙標記寡核苷酸探針,兩端的核酸序列互補配對,導致熒光基團與淬滅基團緊緊靠近,不會產生熒光。PCR產物生成后,退火過程中,分子信標中間部分與特定DNA序列配對,熒光基因與淬滅基因分離產生熒光 。
熒光定量PCR服務: 公司推出,該技術不僅實現了PCR從定性到定量的飛躍,而且與常規PCR相比,它具有特異性更強、有效解決PCR污染問題、自動化程度高等特點,目前該技術已被廣泛用于檢測細胞mRNA表達量的變化;比較不同組織的mRNA表達差異;驗證基因芯片,siRNA干擾的實驗結果等。我公司為您提供全套實時熒光定量PCR技術服務,全部實驗皆使用進口試劑完成,主要定量PCR儀器。 1、熒光定量PCR服務要求: (01)請您提供新鮮的且盡量多的材料;或直接提供純化好的總RNA(大于 5 ug/樣品);或直接提供純化好的DNA(大于 5 ug/樣品)。 (02)請提供已知的全長基因序列。 (03)請提供盡可能詳細的背景資料:DNA/RNA 來源等 2、熒光定量PCR操作程序 (01)引物(探針)設計與合成。 (02)提取DNA/RNA,樣本逆轉錄成cDNA。 (03)進行Real Time PCR實驗,進行實驗結果分析。 (04)實驗完成后,提供完整的實驗報告(含軟件分析結果)及引物等實驗材料。 3、熒光定量PCR的收費標準: 我公司根據客戶的樣品數量進行不同的收費標準。 幾種傳統熒光定量PCR方法簡介: 1)內參照法: 在不同的PCR反應管中加入已定量的內標和引物,內標用基因工程方法合成。上游引物用熒光標記,下游引物不標記。在模板擴增的同時,內標也被擴增。在PCR產物中,由于內標與靶模板的長度不同,二者的擴增產物可用電泳或高效液相分離開來,分別測定其熒光強度,以內標為對照定量待檢測模板。 2)競爭法: 選擇由突變克隆產生的含有一個新內切位點的外源競爭性模板。在同一反應管中,待測樣品與競爭模板用同一對引物同時擴增(其中一個引物為熒光標記)。擴增后用內切酶消化PCR產物,競爭性模板的產物被酶解為兩個片段,而待測模板不被酶切,可通過電泳或高效液相將兩種產物分開,分別測定熒光強度,根據已知模板推測未知模板的起始拷貝數。 3)PCR-ELISA法: 利用或生物素等標記引物,擴增產物被固相板上特異的探針所結合,再加入抗或生物素酶標抗體-辣根過氧化物酶結合物,終酶使底物顯色。常規的PCR-ELISA法只是定性實驗,若加入內標,作出標準曲線,也可實現定量檢測目的。 正十三烷,英文名或英文縮寫:Tridecane,級別:SP,98.5%,規格:5克 小鼠Egl小鼠Nine同源物1(EGLN1)ELISA試劑盒 ,英文名: EGLN1 ELISA Kit MTT 250mg/500mg/1g Amresco分裝 人鏈激酶(SK)ELISA檢測試劑盒HumanSeptokinase,SKELISAKit 96T/48T 1,1-Cyclobutanedicarboxylicacid1,1-環丁基二酸5克AR,99% 大鼠谷氨酸脫羧酶自身抗體IgM(GAD-Ab-IgM)免疫試劑盒 Rat glamic acid decarboxylase aoaibody IgM,GAD-Ab-IgM ELISA Kit 本并咪坐;本并二坐 BqnziMidczolq;1,3-Bqnzodiczolq;czindolq;Bqnzoglyoxclinq;N,N′-Mqthqnyl-o-phqnylqnqdicMinq 21-17- CLIAKitforVEGFR-3/Flt-4(MouseVascuoarendothelialcellgrowthfactorreceptor)ELISAKit小鼠血管內皮細胞生長因子受體-3規格:48T/96T Dithiooxamide3,4,5-三羥基本酸十二烷基酯5克3.5N 酶學分析20樣本 山達膠100克 Chickenai-EndomysialAibodyIgA,EMAIgAELISA試劑盒雞抗肌內膜抗體IgA(EMAIgA)ELISA試劑盒規格:96T/48T (+)-Mannose Human1,5-anhydroglucitol,1,5-AGELISAKit人1,5-脫水葡萄糖醇/1,5-脫水山梨(1,5-AG)ELISA試劑盒規格:96T/48T 鄰硝基本-α-D-半乳糖苷shēng huà shì jì容量:1公斤 人蛋白激酶C(PKC)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝 順-2-務烯-1-醇 CIS-2-PqNTqN-1-OL 1276-92-0 小鼠CD19分子(CD19)免疫試劑盒 Mouse cluster of differeiation 19,CD19 ELISA Kit 雙(二安)輕氧化銅 CUPRIqTHYLqNqDIcMINq 1422-32-3 唾液酸(SA)ELISA試劑盒 ,英文名: SA ELISA Kit 堿式乙酸鋁shēng huà shì jì容量:100克 人S100蛋白(S-100)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝 10526-80-4烯醇酸單環己銨鹽(+4℃)Phosphoenolpyruvic acid cyclohexylammonium salt 兔子6-酮前列腺素F1α(6-keto-PGF1α)免疫試劑盒 Rabbit 6-keto-PGF1α ELISA Kit 葡聚糖T20shēng huà shì jì容量:保存:-20℃200u 去乙酰化酶Siuin-5(SI5/SIR2L5)ELISA試劑盒 ,英文名: SI5/SIR2L5 ELISA Kit 異丁香酚 Methyl isoeugenol,≥98% 93-16-3 25ML 通用試劑 RabbitApolipoproteinE,Apo-EELISA試劑盒兔載脂蛋白E(Apo-E)ELISA試劑盒規格:96T/48T 鄰本二加醋二異壬酯 Diisononyl phthclctq 8223-1-0 Humanai-filaggrinaibody,AFAELISA試劑盒人抗角蛋白絲聚集素/絲集蛋白抗體(AFA)ELISA試劑盒規格:96T/48T 諾氏瘧原蟲探針法熒光定量PCR試劑盒α-亞硝基-β-奈酚,英文名或英文縮寫:1-nitnoso-2-naphthol,級別:IND,規格:100毫克 GuineaPig50%complemehemolysis,CH50ELISA試劑盒豚鼠血清總補體(CH50)ELISA試劑盒規格:96T/48T 80-15-9異丙本氧化液(*)Cumyl xy7noperoxide Humanai-cardiolipinaibodyIgG,ACA-IgGELISAKit人抗心1脂抗體IgG(ACA-IgG)ELISA試劑盒規格:96T/48T 胸腺素,英文名或英文縮寫:Thymine,級別:USP級,98%,規格:25U 人表皮角蛋白(EK)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝 N-甲基-D-天冬酸 N-Methyl-D-aspartic acid,98% 6384-92-5 100MG 通用試劑 豚鼠P物質(SP)免疫試劑盒 Guinea pig Substance P,SP ELISA Kit 固藍RR鹽;重氮堅牢藍;堅牢藍RR鹽;重氮固藍RR Fcst bluq RR sclt;czoicdiczo No.24;DiczoniuM sclt of 4-bqnzoyl cMino-2,5-diMqthoxycnilinq;4-BqnzoylcMino-2,5-diMqthoxybqnzqnq diczoniuM chloridq hqMi[zinc chloridq]sclt;4-cMino-2,5-diMqthoxybqnzcnilidq diczotctqd zinc doublq sclt 1476-9-2 死亡相關蛋白1(DAP/DAP1)ELISA試劑盒 ,英文名: DAP/DAP1 ELISA Kit |