畸形*線蟲探針法熒光定量PCR試劑盒說明

熒光定量PCR試劑盒技術(shù)：
本實(shí)用新型技術(shù)公開了一種實(shí)時(shí)熒光定量PCR試劑盒，包括盒體，盒體由上盒體和下盒體組成，上盒體的底面上設(shè)有限位凸起，下盒體的頂面上設(shè)有與限位凸起匹配的凹槽，且在下盒體左右側(cè)壁的下端均軟連接有側(cè)蓋，側(cè)蓋遠(yuǎn)離下盒體的一端連接有卡勾，下盒體的上端邊緣處設(shè)有環(huán)形凸起，兩個(gè)卡勾分別勾住環(huán)形凸起的左右兩端將上盒體固定在下盒體上；凹槽的內(nèi)部設(shè)有固定桿，固定桿上通過轉(zhuǎn)動(dòng)件轉(zhuǎn)動(dòng)連接有用于放置試管的試管架；下盒體的左右兩側(cè)均設(shè)置有收納槽。本實(shí)用新型技術(shù)通過將盒體分為上下組合的兩個(gè)部分，并將兩個(gè)部分通過側(cè)蓋連接，即可保證試劑盒的便攜性，同時(shí)使用試劑盒自帶的試管可提高檢測的效率。

參數(shù)規(guī)格：

產(chǎn)品名稱：畸形*線蟲探針法熒光定量PCR試劑盒說明
英文名稱：Nematodirus abnormalis
貨號：EY-P7001

產(chǎn)品規(guī)格：50T
分類：熒光定量PCR試劑盒
儲存條件：-20℃避光保存，避免反復(fù)凍融。
運(yùn)輸：低溫、避光，快遞免費(fèi)送貨上門。
產(chǎn)品特點(diǎn)：
本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設(shè)計(jì)引物而開發(fā)的高靈敏 PCR檢測試劑盒 。

產(chǎn)品特點(diǎn)
1. 使用化學(xué)修飾的熱啟動(dòng)聚合酶，反應(yīng)特異性高，*程度地避免了非特異擴(kuò)增；
2. 反應(yīng)緩沖液經(jīng)充分優(yōu)化，反應(yīng)靈敏快速，40個(gè)循環(huán)只需20多分鐘；
3. 抗干擾能力強(qiáng)，反應(yīng)重復(fù)性高，適合對土壤、糞便、腫瘤和血液來源的復(fù)雜樣本中的靶基因進(jìn)行檢測分析。
在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號積累實(shí)時(shí)監(jiān)測整個(gè)PCR進(jìn)程，zui后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進(jìn)行定量分析的方法。
 特異性熒光標(biāo)記：
 TaqMan法
 TaqMan探針的特性：
（1）5′端標(biāo)記有報(bào)告基團(tuán)（Reporter, R），如FAM、VIC等
（2）3′端標(biāo)記有熒光淬滅基團(tuán) （Quencher, Q）
（3）探針完整，R所發(fā)射的熒光能量被Q基團(tuán)吸收 ，無熒光， R與Q分開，發(fā)熒光
（4）Taq酶有 5′→3′外切核酸酶活性，可水解探針
相對定量通過內(nèi)標(biāo)定量：
內(nèi)標(biāo)（Endogenous Control）通常是β-actin、GAPDH基因等看家基因，在細(xì)胞中的表達(dá)量或在基因組中的拷貝數(shù)恒定，受環(huán)境因素影響小，內(nèi)標(biāo)定量結(jié)果代表了樣本中所含細(xì)胞或基因組數(shù)量。
相對定量分析方法  ：
 2-ΔΔCt
前提：目標(biāo)序列和內(nèi)參序列的擴(kuò)增效率接近100％且偏差在5％以內(nèi)
  1、用內(nèi)參基因的CT值歸一目標(biāo)基因的CT值：
    ΔCT（test）= CT（target,test）-CT（ref,test） 
    ΔCT（calibrator）= CT（target,calibrator）-CT（ref, calibrator） 
  2、用校準(zhǔn)樣本的ΔCT值歸一試驗(yàn)樣本的ΔCT值：
         ΔΔCT= ΔCT（test） - ΔCT（calibrator）
  3、計(jì)算表達(dá)水平比率：
                    2 –ΔΔCT=表達(dá)量的比值

 

熒光定量PCR檢測方法包括以下步驟：
(1)將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個(gè)質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時(shí)用于參照基因以及待測目的基因擴(kuò)增檢測的標(biāo)準(zhǔn)品，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時(shí)用于繪制參照基因以及待測目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線；
(2)待測樣本與步驟(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增后，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算各自的拷貝數(shù)，計(jì)算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結(jié)果。
其中步驟(1)為：將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個(gè)質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時(shí)用于參照基因以及待測目的基因擴(kuò)增檢測的標(biāo)準(zhǔn)品，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時(shí)用于繪制參照基因以及待測目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線。
其中所述參照基因?yàn)楸绢I(lǐng)域常規(guī)參照基因，較佳地管家基因，優(yōu)選地為RPPH1的擴(kuò)增區(qū)域，其中所述質(zhì)粒載體為本領(lǐng)域常規(guī)質(zhì)粒載體，較佳地為PCR克隆載體，優(yōu)選地為TA cloning載體，所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標(biāo)準(zhǔn)品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1：1。由于標(biāo)準(zhǔn)品中待測目的基因與參照基因的比例為1:1，解決了目前相對標(biāo)準(zhǔn)曲線法應(yīng)用中目的基因與參照基因的濃度比例關(guān)系難以控制的問題，提高HER2基因擴(kuò)增檢測的可靠性。
步驟(2)為：待測樣本與步驟(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增后，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算各自的拷貝數(shù)，計(jì)算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結(jié)果。
其中所述待測目的基因?yàn)楸绢I(lǐng)域常規(guī)待測目的基因，較佳地為腫瘤或者疾病的特異性基因，更佳地為HER2基因的擴(kuò)增區(qū)域，所述熒光定量PCR擴(kuò)增為本領(lǐng)域常規(guī)熒光定量PCR擴(kuò)增方法，所述熒光定量PCR擴(kuò)增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴(kuò)增，更佳地為雙通道熒光定量PCR擴(kuò)增。

天青II曙紅100克  小鼠α2-HS糖蛋白(αHSG)ELISA試劑盒 ，英文名： αHSG ELISA Kit

9000-1-5阿拉伯樹膠Arabic gum  人凝血因子Ⅹ(FⅩ)ELISA檢測試劑盒HumancoagulationfactorⅩ,FⅩELISAKit 96T/48T

人參皂甙Rb2，英文名或英文縮寫：Ginsenoside Rb2，級別：AR，99.5%，規(guī)格：100克  大鼠基質(zhì)細(xì)胞衍生因子1β(SDF-1β/CXCL12)免疫試劑盒 Rat Somal cell derived factor 1β,SDF-1β ELISA Kit

鄰甲基對苯鹽 2,5-Diamino sulfate,97% 615-50-9 25G 通用試劑  英文名稱RatCD30ELISAKit大鼠CD30規(guī)格：96T/48T

過氧化月桂酰; Lcuroyl pqroxidq;Dodqccnoyl pqroxidq;clpqrox C; 102-74-8  可溶性真菌/酵母細(xì)胞膜蛋白相位分離制備試劑盒20次
咪康唑shēng huà shì jì容量：RT5克  人α干擾素-2b(IFN-α2b)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

612-82-8鄰聯(lián)胺鹽酸鹽3,3'-Dimetxylbenzidine dixy7nochloride  兔子白介素3(IL-3)免疫試劑盒 Rabbit Ierleukin 3,IL-3 ELISA Kit

四乙基溴化shēng huà shì jì容量：1克  特異性蛋白B(PSPB)ELISA試劑盒 ，英文名： PSPB ELISA Kit

3,3'-二羥基二苯二... 3,3′-Dihydroxydiphenyl disulfide,97% 21101-56-4 5G 通用試劑  PorcineansformingGrowthfactorβ2,TGF-β2ELISA試劑盒豬轉(zhuǎn)化生長因子β2(TGF-β2)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

二基鱗醋 97% DIMqTHYLPHOSPHINIC cCID 383-1-3  HumanaibodytogroupAseptococcalpolysaccharide,ASPELISA試劑盒人A組鏈球菌菌壁多糖抗體(ASP)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
固紅-奈磺酸TR，英文名或英文縮寫：Fast red TR，級別：BR，99%，規(guī)格：250毫克  ELISAKitIL-3小鼠白介素3規(guī)格：48T/96T

L-Tryptophan 25g/100g/250g/500g 國產(chǎn)  GoatGrowthHormoneReleasingPeptide,GHRPELISAKit山羊生長激素釋放多肽(GHRP)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

Crystalviolet龍膽紫100ul/支BR，羧化度≥60%  人巨噬細(xì)胞集落刺激因子受體(M-CSFR)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

B-葡聚糖　2-8℃ bqtc-D-Gluccn 9041--9  小鼠過氧化氫酶(CAT)免疫試劑盒 Mouse Catalase,CAT ELISA Kit

固藍(lán) RR 鹽 Fast Blue RR Salt (≥90%, crystalline) 14726-29-5 5G 染色劑  胰島淀粉樣多肽(IAPP)ELISA試劑盒 ，英文名： IAPP ELISA Kit
畸形*線蟲探針法熒光定量PCR試劑盒說明xy7noCHLORICACID,6N鹽酸 6N試劑級透明無色液體RT不sigma  RabbitThromboxaneB2,TX-B2ELISA試劑盒兔血栓素B2(TXB2)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

腦心浸粉NA  HumanBigEndothelin,BigETELISA試劑盒人大內(nèi)皮素(BigET)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

胰胨大豆瓊脂斜面500毫升  HumanCXC-chemokinereceptor3,CXCR3ELISAKit人CXC趨化因子受體3(CXCR3)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

3-溴 3-Bromophenol,98% 591-20-8 10G 通用試劑  人11β羥基類固醇脫氫酶(11β-HSD)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

麥芽糊精/麥芽糖糊精/Maltodextrin BR 500克 國產(chǎn)/進(jìn)口  山羊固酮(ALD)免疫試劑盒 Goat aldosterone,ALD ELISA Kit