腺病毒通用探針法熒光定量PCR試劑盒說明

幾種傳統(tǒng)熒光定量PCR方法簡介：
1）內(nèi)參照法：
在不同的PCR反應管中加入已定量的內(nèi)標和引物，內(nèi)標用基因工程方法合成。上游引物用熒光標記，下游引物不標記。在模板擴增的同時，內(nèi)標也被擴增。在PCR產(chǎn)物中，由于內(nèi)標與靶模板的長度不同，二者的擴增產(chǎn)物可用電泳或高效液相分離開來，分別測定其熒光強度，以內(nèi)標為對照定量待檢測模板。
2）競爭法：
選擇由突變克隆產(chǎn)生的含有一個新內(nèi)切位點的外源競爭性模板。在同一反應管中，待測樣品與競爭模板用同一對引物同時擴增（其中一個引物為熒光標記）。擴增后用內(nèi)切酶消化PCR產(chǎn)物，競爭性模板的產(chǎn)物被酶解為兩個片段，而待測模板不被酶切，可通過電泳或高效液相將兩種產(chǎn)物分開，分別測定熒光強度，根據(jù)已知模板推測未知模板的起始拷貝數(shù)。
3）PCR－ELISA法：
利用或生物素等標記引物，擴增產(chǎn)物被固相板上特異的探針所結合，再加入抗或生物素酶標抗體－辣根過氧化物酶結合物，終酶使底物顯色。常規(guī)的PCR－ELISA法只是定性實驗，若加入內(nèi)標，作出標準曲線，也可實現(xiàn)定量檢測目的。

實時熒光定量PCR：
實時熒光定量PCR技術有效地解決了傳統(tǒng)定量只能終點檢測的局限，實現(xiàn)了每一輪循環(huán)均檢測一次熒光信號的強度，并記錄在電腦軟件之中，通過對每個樣品Ct值的計算，根據(jù)標準曲線獲得定量結果。因此，實時熒光定量PCR無需內(nèi)標是建立在兩個基礎之上的：
1）Ct值的重現(xiàn)性PCR循環(huán)在到達Ct值所在的循環(huán)數(shù)時，剛剛進入真正的指數(shù)擴增期（對數(shù)期），此時微小誤差尚未放大，因此Ct值的重現(xiàn)性*，即同一模板不同時間擴增或同一時間不同管內(nèi)擴增，得到的Ct值是恒定的。
2）Ct值與起始模板的線性關系由于Ct值與起始模板的對數(shù)存在線性關系，可利用標準曲線對未知樣品進行定量測定，因此，實時熒光定量PCR是一種采用外標準曲線定量的方法。
外標準曲線的定量方法相比內(nèi)標法是一種準確的、值得信賴的科學方法。利用外標準曲線的實時熒光定量PCR是迄今為止定量準確，重現(xiàn)性的定量方法，已得到*的*，廣泛用于基因表達研究、轉基因研究，藥物療效考核、病原體檢測等諸多領域。
熒光化學物質(zhì)：
實時熒光定量PCR所使用的熒光物質(zhì)可分為兩種：熒光探針和熒光染料?，F(xiàn)將其原理簡述如下：
1. TaqMan熒光探針：PCR擴增時在加入一對引物的同時加入一個特異性的熒光探針，該探針為一寡核苷酸，兩端分別標記一個報告熒光基團和一個淬滅熒光基團。探針完整時，報告基團發(fā)射的熒光信號被淬滅基團吸收；PCR擴增時，Taq酶的5'－3'外切酶活性將探針酶切降解，使報告熒光基團和淬滅熒光基團分離，從而熒光監(jiān)測系統(tǒng)可接收到熒光信號，即每擴增一條DNA鏈，就有一個熒光分子形成，實現(xiàn)了熒光信號的累積與PCR產(chǎn)物形成*同步。而新型TaqMan-MGB探針使該技術既可進行基因定量分析，又可分析基因突變（SNP），有望成為基因診斷和個體化用藥分析的技術平臺。
2. SYBR熒光染料：在PCR反應體系中，加入過量SYBR熒光染料，SYBR熒光染料非特異性地摻入DNA雙鏈后，發(fā)射熒光信號，而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會發(fā)射任何熒光信號，從而保證熒光信號的增加與PCR產(chǎn)物的增加*同步。SYBR僅與雙鏈DNA進行結合，因此可以通過溶解曲線，確定PCR反應是否特異。
3. 分子信標：是一種在5和3末端自身形成一個8個堿基左右的發(fā)夾結構的莖環(huán)雙標記寡核苷酸探針，兩端的核酸序列互補配對，導致熒光基團與淬滅基團緊緊靠近，不會產(chǎn)生熒光。PCR產(chǎn)物生成后，退火過程中，分子信標中間部分與特定DNA序列配對，熒光基因與淬滅基因分離產(chǎn)生熒光 。
熒光定量PCR服務：
公司推出，該技術不僅實現(xiàn)了PCR從定性到定量的飛躍，而且與常規(guī)PCR相比，它具有特異性更強、有效解決PCR污染問題、自動化程度高等特點，目前該技術已被廣泛用于檢測細胞mRNA表達量的變化；比較不同組織的mRNA表達差異；驗證基因芯片，siRNA干擾的實驗結果等。我公司為您提供全套實時熒光定量PCR技術服務，全部實驗皆使用進口試劑完成，主要定量PCR儀器。
1、熒光定量PCR服務要求：
（01）請您提供新鮮的且盡量多的材料；或直接提供純化好的總RNA（大于 5 ug/樣品）；或直接提供純化好的DNA（大于 5 ug/樣品）。
（02）請?zhí)峁┮阎娜L基因序列。
（03）請?zhí)峁┍M可能詳細的背景資料：DNA/RNA 來源等
2、熒光定量PCR操作程序
（01）引物（探針）設計與合成。
（02）提取DNA/RNA，樣本逆轉錄成cDNA。
（03）進行Real Time PCR實驗，進行實驗結果分析。
（04）實驗完成后，提供完整的實驗報告（含軟件分析結果）及引物等實驗材料。
3、熒光定量PCR的收費標準：
  我公司腺病毒通用探針法熒光定量PCR試劑盒說明根據(jù)客戶的樣品數(shù)量進行不同的收費標準。

重蒸酚1克  豚鼠谷轉酶(ALT)ELISA試劑盒 ，英文名： ALT ELISA Kit
2’-脫氧鳥苷-5’-二鈉鹽NA  Human calmodulin (CAM) ELISA Kit 人鈣調(diào)素(CAM)ELISA試劑盒
順丁希二酸二shēng huà shì jì容量：100克  rabbitEndostatin,ESELISAKit 兔子內(nèi)皮抑素(ES)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝
2,6-二基-4-;二 2,6-DiMqthyl-4-hqptcnol;4-xy7noxy-2,6-diMqthylhqptcnq 108-8-7  CLIAKitforBACE2ELISAKit大鼠β位淀粉樣前體蛋白裂解酶2規(guī)格：48T/96T
原，英文名或英文縮寫：Procyanidin，級別：CP，35%，規(guī)格：500微升  線蟲繁殖培養(yǎng)試劑盒10次
碳酸氫1克  Humanbacterialvaginosis,BVELISAKit人細菌(BV)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
610-97-92-本metxyl 2-iodobenzoate  人α突觸核蛋白(α-SYN)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
胰凝乳蛋白酶(牛)1克2～8℃，避光  兔子補體片斷3a(C3a)免疫試劑盒 Rabbit Compleme fragme 3a,C3a ELISA Kit
2-茴香硫醚 2-Chlorothioanisole,96% 17733-22-1 5G 通用試劑  肉毒堿O-乙酰基轉移酶(CRAT/CAT1)ELISA試劑盒 ，英文名： CRAT/CAT1 ELISA Kit
香葉木速 DiosMqtin 20-34-3  PorcineSomatostatin,SSELISA試劑盒豬生長抑素(SS)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
麥康凱瓊脂3號250克  胚胎干細胞內(nèi)胚層(endoderm)細胞分化熒光檢測試劑盒10次
50709-33-62-溴本鹽酸鹽2-Bromopxenylhydr xy7nochloride  ELISAKitsCD146人可溶性CD146分子規(guī)格：48T/96T
肌酸激酶測試盒shēng huà shì jì容量：RT100支/包  小鼠25羥基維生素D3(25(OH)D3/25 HVD3)ELISA試劑盒 ，英文名： 25(OH)D3/25 HVD3 ELISA Kit
2,3-二羌基本全 2,3-Dixy7noxybqnzcldqhydq 4677-78-9  牛的牛小腸堿性酶(CIAP)ELISA檢測試劑盒BovineCalfiestinalalkalinephosphatase,CIAPELISAKit 96T/48T
shēng huà shì jì容量：1公斤  人B細胞活化因子(BAFF)免疫試劑盒 Human BAFF ELISA Kit
肝素瓊脂糖凝膠6FF5克  轉基因植物cry1A基因核酸檢測試劑盒 48T
CAPS 25g/100g/250g/1kg原裝 Amresco 0365  HumansolubleP-selectin,sP-selectinELISA試劑盒人可溶性P選擇素(sP-selectin)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
硬脂酸鈉shēng huà shì jì容量：100克  ELISAKitGP-MM小鼠糖原化酶同工酶MM規(guī)格：48T/96T
離子交換樹脂 cMBqRLITq(R) XcD-4 37380-4-0  HumanBH3ieractingdomaindeathagonist,BidELISAKit人BH3結構域凋亡誘導蛋白(Bid)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
D-谷安醋;D-麩安醋;D-麩質(zhì)醋;D-2-安基務二醋 D-GlutcMic ccid;D-2-cMinopqntcnqdioic ccid;D-α-cMinoglutcric ccid;D-1-cMinopropcnq-1,3-diccrboxylic ccid;(R)-2-cMinoglutcric ccid 6893/6/1  人內(nèi)毒素(ET)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝