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冷凍保存細胞之方法: 小鼠正常肝細胞;NCTC 1469價格冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ (-20 ℃30 分鐘*) → -80 ℃16~18 小時(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 長期儲存。 冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下, 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時, 以防止冰晶過大,造成細胞大量死亡,亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,惟存活率稍微降低一些。 細胞培養(yǎng)操作規(guī)程: 一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備: 1)小鼠正常肝細胞;NCTC 1469價格準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號21875-091),90%;優(yōu)質胎牛血清,10%。 2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。 3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現用現配,液氮儲存。 二.細胞處理: 1)復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。 2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。 對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法: 方法一:收集細胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。 CXCL12 Others Cynomolgus 食蟹猴 CXCL12 / SDF-1 人細胞裂解液 (陽性對照) 人真皮成纖維細胞-胎兒RNAHEF-f miRNA5 μg THP-1 人單核細胞白血病細胞 CL-0418QGY-7703(人肝癌細胞)5×106cells/瓶×2 小鼠成纖維細胞(EGFP標記) 人男性正常細胞;Hs68 人結腸粘膜上皮細胞*培養(yǎng)基 100mL 小鼠正常肝細胞;NCTC 1469價格*CD146/MCAM黑色素瘤細胞粘附分子CD146抗原規(guī)格:0.5mg *ANPEN/CD13(AminopeptidaseN)氨肽酶N抗原規(guī)格:0.5mg *CD14(clusterofdifferentiationantigen14)CD14/內毒素受體抗原規(guī)格:0.5mg *CD28CD28抗原規(guī)格:0.5mg *CD166/ALCAM(activatedleukocytecelladhesionmolecule)活化白細胞粘附分子抗原規(guī)格:0.5mg *CD177/NB1peptide嗜中性粒細胞抗原CD177抗原規(guī)格:0.5mg *CD24CD24抗原規(guī)格:0.5mg *CD24CD24抗原規(guī)格:0.5mg *CD2AP(CD2-associatedprotein)白細胞分化抗原CD2AP規(guī)格:0.5mg *CD33peptide(human)CD33抗原(人)規(guī)格:0.5mg 注意事項: ?1.一般客戶拿到小鼠正常肝細胞;NCTC 1469價格后,應該注意什么? 客戶收到細胞先不開蓋,放在培養(yǎng)箱靜置若干小時后(看細胞密度而定)在倒置顯微鏡下觀察細胞生長情況,并對細胞進行不同倍數拍照(建議受收細胞時的培養(yǎng)基拍一張照片,觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況,顯微鏡下拍細胞100X,200X各一張),排除細胞本身污染的情況;收到細胞未開封,出現污染狀況我們負責免費發(fā)送一株細胞。 收到細胞時如無異常情況,請在顯微鏡下觀察細胞密度,如為貼壁細胞,未超過80%匯合度時,將培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)液吸出,留下10ml培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng);超過80%匯合度時,請按細胞培養(yǎng)條件傳代培養(yǎng)。如為懸浮細胞,吸出培養(yǎng)液、1000轉/分鐘離心2分鐘,吸出上清,管底細胞用新鮮培養(yǎng)基懸浮細胞后移回培養(yǎng)瓶。 細胞出現問題,不予以重發(fā)的情況有哪些? (1)客戶造成細胞污染,不重發(fā); (2)客戶不正確操作致細胞狀態(tài)不好,不重發(fā); (3)非推薦細胞培養(yǎng)體系致的細胞狀態(tài)不好,不重發(fā); (4)細胞狀態(tài)不好,未提供細胞培養(yǎng)前3天照片的,不重發(fā); (5)細胞培養(yǎng)時經其它處理的,不重發(fā); (6)細胞收到2天內,未告知,不重發(fā); (7)視具體情況而定。 |