人腎管狀上皮細(xì)胞提取物培養(yǎng)

人腎管狀上皮細(xì)胞提取物【Human renal: renal tubular epithelial cell Derivatives】

人腎管狀上皮細(xì)胞提取物是從人腎管狀上皮細(xì)胞提取的，人腎管狀上皮細(xì)胞從正常人腎小管組織制備。正常人腎小管組織采集自各地方醫(yī)院，采集工作根據(jù)IRB 和 HIPAA批準(zhǔn)的方案進(jìn)行。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過嚴(yán)格的QA/QC流程以確保其質(zhì)量。這些產(chǎn)品可以直接用于基因克隆，表達(dá)圖譜分析以及各種分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的研究。

總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進(jìn)行純化。生物科技提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結(jié)果等。
cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA第一鏈，以50ul總反應(yīng)體系進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機(jī)引物以及10mg總RNA。68℃反應(yīng)10min 后終止RT反應(yīng)。利用1x RT Buffer 運(yùn)輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng)。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴(yán)格的QA/QC分析，保證了產(chǎn)品的質(zhì)量。
蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人關(guān)節(jié)軟骨組織裂解液，離心去除組織碎片，通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。 

 實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說明：

1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕；
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率；
5．如果細(xì)胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

 運(yùn)輸和保存：

視天氣狀況和運(yùn)輸距離遠(yuǎn)近，公司與客戶協(xié)商后選擇下述方式中的一種進(jìn)行。
1)1mL凍存細(xì)胞懸液裝于1.8ml的凍存管中，置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進(jìn)行運(yùn)輸；收到細(xì)胞后請盡快解凍復(fù)蘇細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，如無法立刻進(jìn)行復(fù)蘇操作，凍存細(xì)胞可在-80℃的條件下保存1個(gè)月。
2)T-25培養(yǎng)瓶充滿*培養(yǎng)基后進(jìn)行常溫運(yùn)輸；收到細(xì)胞后請鏡下觀察細(xì)胞生長狀態(tài)，如鋪瓶率超過85%請立即進(jìn)行傳代操作，如懸浮的細(xì)胞較多，請將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細(xì)胞能夠再次貼壁。
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。

操作要點(diǎn)：

1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個(gè)15mL無菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動(dòng)凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細(xì)胞能盡快通過易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細(xì)胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時(shí)避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。
5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶內(nèi)，補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動(dòng)細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長至80~90%匯合時(shí)正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。

鹽霉素殘留酶聯(lián)免疫檢測試劑盒Clemastine fumarate149767富馬酸氯馬斯汀

地塞米松殘留酶聯(lián)免疫檢測試劑盒Citrostadienol47檸檬二烯醇

頭孢三合一殘留酶聯(lián)免疫檢測試劑盒Citreorosein4813ω-羥基大黃素

泰樂菌素殘留酶聯(lián)免疫檢測試劑盒Citalopram hydrobromide597292氫西酞普蘭

四環(huán)素類藥物殘留酶聯(lián)免疫檢測試劑盒cis-Octahydro-isoindole2182
Norfloxacin  中文名：諾氟沙星  分子式：C16H18FN3O3    小鼠黃體生成素釋放激素(LHRH)ELISAKit  

Norethindrone  中文名：炔諾酮  分子式：C20H26O2    小鼠腦紅蛋白(NGB)ELISAKit              

Norandrostenedione  中文名：19-去甲-4-雄烯二酮  分子式：C18H24O2    中文名稱   方法   規(guī)格

n-Octylbenzene  中文名：  分子式：C14H22    小鼠血小板衍生生長因子可溶性受體α(PDGFsR-α)ELISAKit  

Nitrendipine  中文名：尼群地平  分子式：C18H20N2O6    小鼠血小板衍生生長因子AB(PDGF-AB)ELISAKit
吲達(dá)帕胺  Indapamide  質(zhì)量規(guī)格：>99%,EP6.0,BR 化線粒體凍存液(生物能量學(xué)保護(hù))50毫升

吲達(dá)帕胺（標(biāo)準(zhǔn)品）  Indapamide  質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品 化線粒體呼吸控制率(RCR)定量檢測試劑盒20

帕醇(標(biāo)準(zhǔn)品)  Iopamidol  質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,USP 化線粒體可溶性總蛋白制備試劑盒20

帕醇  Iopamidol  質(zhì)量規(guī)格：>98%,USP 化線粒體膜流動(dòng)性(membranefluidity)熒光檢測試劑盒20

鹽酸洛哌丁胺  Loperamide HCl  質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR 化線粒體膜通道孔(MPTP)比色法檢測試劑盒20

鹽酸洛哌丁胺(標(biāo)準(zhǔn)品)  Loperamide HCl  質(zhì)量規(guī)格：HPLC>99%,標(biāo)準(zhǔn)品 化線粒體膜通道孔(MPTP)熒光檢測試劑盒20

酮咯酸氨丁三醇  Ketorolac Tromethamine   質(zhì)量規(guī)格：>98.5%,USP,BR 化線粒體內(nèi)膜功能/膜電位測定試劑盒100

酮咯酸氨丁三醇（標(biāo)準(zhǔn)品）  Ketorolac Tromethamine   質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品 化線粒體溶解試劑盒20

蘭索拉唑  Lansoprazole   質(zhì)量規(guī)格：干品含量>98%,USP32 化線粒體損傷/氧化(NAO)熒光測定試劑盒20/200

蘭索拉唑（標(biāo)準(zhǔn)品）  Lansoprazole   質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品 化線粒體細(xì)胞色素C氧化酶活性測定試劑盒20
人腎管狀上皮細(xì)胞提取物培養(yǎng)Tenacigenin B  中文名：  分子式：C21H32O5    脂多糖   10mg

Temozolomide  中文名：替莫唑胺  分子式：C6H6N6O2    Lipopolysaccharides,Escherichiacoli055:B5

Telmisartan tert-butyl ester  中文名：  分子式：C37H38N4O2    L-異亮酸   10g

Telmisartan  中文名：替米沙坦  分子式：C33H30N4O2    L-Isoleucine   50g              

Tegafur  中文名：替加氟  分子式：C8H9FN2O3    脂肪酶（LPS）試劑盒   可見分光光度法   50管/48樣