小鼠尿道上皮細(xì)胞提取物培養(yǎng)

小鼠尿道上皮細(xì)胞提取物【Mouse Urethral: Normal Urethral Derivatives】

小鼠尿道上皮細(xì)胞提取物是從小鼠原代尿道上皮細(xì)胞提取的，小鼠原代尿道上皮細(xì)胞從正常小鼠尿道組織制備。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過嚴(yán)格的QA/QC流程以確保其質(zhì)量。這些產(chǎn)品可以直接用于基因克隆，表達(dá)圖譜分析以及各種分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的研究。

總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進(jìn)行純化。生物科技提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結(jié)果等。
cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA第一鏈，以50ul總反應(yīng)體系進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機(jī)引物以及10mg總RNA。68℃反應(yīng)10min 后終止RT反應(yīng)。利用1x RT Buffer 運(yùn)輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng)。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴(yán)格的QA/QC分析，保證了產(chǎn)品的質(zhì)量。
蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人關(guān)節(jié)軟骨組織裂解液，離心去除組織碎片，通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。

 實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說明：

1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時(shí)動作要輕；
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率；
5．如果細(xì)胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

操作要點(diǎn)：

1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細(xì)胞能盡快通過易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細(xì)胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時(shí)避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。
5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶內(nèi)，補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長至80~90%匯合時(shí)正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。

喹諾酮類藥物殘留酶聯(lián)免疫檢測試劑盒Cefozopran hydrochloride1139814鹽酸頭孢唑蘭

萊克多巴胺殘留酶聯(lián)免疫檢測試劑盒Cefotaxime 644853頭孢噻肟鈉

氯霉素殘留酶聯(lián)免疫檢測試劑盒Cefixime7937頭孢克肟

克侖特羅殘留酶聯(lián)免疫檢測試劑盒Cefcapene pivoxil hydrochloride1478164鹽酸頭孢卡品酯

呋喃妥因代謝物殘留酶聯(lián)免疫檢測試劑盒Caudatin383952告達(dá)庭
Imatinib  152459-95-5  中文名：伊馬替尼  分子式：C29H31N7O    人內(nèi)皮細(xì)胞生長因子受體1(VEGFR-1/Flt1)ELISAKit              

Mitiglinide calcium  145525-41-3  中文名：米格列奈鈣  分子式：C19H25NO3    豚鼠白介素4(IL-4)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

9-Aminominocycline hydrochloride  149934-21-4  中文名：  分子式：C23H29ClN4O7    Human cytochrome P450c21A/21- hydroxylase (CYP21A) ELISA Kit 人細(xì)胞色素P450c21A/21-羥化酶(CYP21A)ELISA試劑盒

Minocycline hydrochloride  13614-98-7  中文名：  分子式：C23H28ClN3O7    HumanMousemyeloperoxidase-aineuophilcytoplasmicaibodyIgG,MPO-ANCAIgGELISAkit 人髓過氧化物酶特異性抗中性粒細(xì)胞胞質(zhì)抗體IgG(MPO-ANCAIgG)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

Benzyl 2-aminoacetate p-sulfonate  1738-76-7  中文名：  分子式：C16H19NO5S    HumancyclophilinB,CyPBELISA試劑盒人嗜環(huán)蛋白/親環(huán)素B(CyPB)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
香豆素120；7-氨基-4-甲基香豆素(AMC)  7-Amino-4-methylcoumarin   質(zhì)量規(guī)格：>97% 人動力蛋白輕鏈1,細(xì)胞質(zhì)(DYNLL1/DLC1/DNCL1/DNCLC1/HDLC1)試劑盒 Human DYNLL1 ELISA kit

Duvelisib (IPI-145)  IPI-145 (INK1197)  質(zhì)量規(guī)格：>98%,選擇性的PI3K δ/γ抑制劑 人毒性休克綜合征1(TSST-1)ELISA檢測試劑盒Humaoxicshocksyndrometoxin,TSST-1ELISAKit 96T/48T

5--4-氯-3吲哚神經(jīng)氨酸鈉鹽  X-NeuNAc   質(zhì)量規(guī)格：>98%,美國進(jìn)口 人毒蕈堿型乙酰膽堿受體M2(mAChRM2)自身抗體試劑盒 Human muscarinic acetylcholine receptor M2(mAChRM2)aoaibody ELISA kit

ABEI；N-（4-氨丁基）-N-乙基異魯米諾  N-(4-Aminobutyl)-N-ethylisoluminol  質(zhì)量規(guī)格：>97%,進(jìn)分 人端粒保護(hù)蛋白1(POT1)試劑盒 Human POT1 ELISA kit

TTAC；十四烷基*基氯化銨  Tetradecyltrimethylammonium chloride  質(zhì)量規(guī)格：>99%,AR 人端粒酶(TE)試劑盒 Human telomerase,TE ELISA Kit

DTAC；十二烷基*基氯化銨  Dodecyltrimethylammonium chloride(DTAC)  質(zhì)量規(guī)格：>99%,BR 人端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶(TE)試劑盒 Human TE ELISA Kit

CTAC;十六烷基*基氯化銨  CTAC  質(zhì)量規(guī)格：>99% 人端粒重復(fù)序列結(jié)合因子1(TERF1)試劑盒 Human TERF1 ELISA kit

十八烷基*基氯化銨  Stearyl Trimethyl Ammoium Chloride(STAC)  質(zhì)量規(guī)格：>99%,BR 人端粒重復(fù)序列結(jié)合因子2(TERF2)試劑盒 Human TERF2 ELISA kit

十烷基*基氯化銨  Decyltrimethylammonium chloride  質(zhì)量規(guī)格：>99% 人對(PABA)ELISA檢測試劑盒Humanpara-aminobenzoicacid,PABAELISAKit 96T/48T

辛基*基氯化銨;八烷基*基氯化銨  Trimethyloctylammonium chloride   質(zhì)量規(guī)格：>99%,BR 人對(PABA)試劑盒 Human para-aminobenzoic acid,PABA ELISA Kit
小鼠尿道上皮細(xì)胞提取物培養(yǎng)流行性腮腺炎病毒(MV)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)   48T  Norfloxacin lactate  中文名：乳酸諾氟沙星  分子式：C19H24FN3O6 

痢疾桿菌(SH)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)   48T  Trazodone hydrochloride  中文名：鹽酸曲唑酮  分子式：C19H23Cl2N5O 

類風(fēng)濕因子（RF）測定試劑盒（膠乳增強(qiáng)比濁法）  Rifampicin  13292-46-1  中文名：利福平  分子式：C43H58N4O12  度：96.5%   

萊克多巴胺檢測試紙條(組織)   Ractopamine test sip (Organization)  Pidotimod  121808-62-6  中文名：匹多莫德  分子式：C9H12N2O4S  度：98.0%  關(guān)鍵詞： 

萊克多巴胺檢測試紙條（尿樣）   Ractopamine test sip (urine)  Pidotimod  中文名：匹多莫德  分子式：C9H12N2O4S

運(yùn)輸和保存：
視天氣狀況和運(yùn)輸距離遠(yuǎn)近，公司與客戶協(xié)商后選擇下述方式中的一種進(jìn)行。
1)1mL凍存細(xì)胞懸液裝于1.8ml的凍存管中，置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進(jìn)行運(yùn)輸；收到細(xì)胞后請盡快解凍復(fù)蘇細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，如無法立刻進(jìn)行復(fù)蘇操作，凍存細(xì)胞可在-80℃的條件下保存1個月。
2)T-25培養(yǎng)瓶充滿*培養(yǎng)基后進(jìn)行常溫運(yùn)輸；收到細(xì)胞后請鏡下觀察細(xì)胞生長狀態(tài)，如鋪瓶率超過85%請立即進(jìn)行傳代操作，如懸浮的細(xì)胞較多，請將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細(xì)胞能夠再次貼壁。
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。