小鼠甲狀腺上皮細胞說明書

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小鼠甲狀腺上皮細胞【Mouse Thyroid: Normal Thyroid Epithelial Cells】
       產品描述：公司提供的原代細胞均來自新鮮組織，公司提供的小鼠源原代細胞均來自新鮮組織，用于培養該細胞的組織采集是根據標準方案進行。細胞的培養采用公司PrimaCellTM原代細胞培養試劑盒來優化目的細胞生長條件，以降低雜細胞的污染，同時的穩定。在公司部標準的操作流程下，原代細胞可以保持分化狀態，進而可以用于評估體外藥物模型系統和調節特定基因的遺傳功能。

細胞培養方法：

1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代
①棄去培養上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%胰酶（T25瓶），使胰酶覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養基終止消化；若細胞還是貼壁，放回培養箱繼續消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養基重懸后加入培養瓶或皿中，T25培養瓶加6-8ml培養基；
⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養瓶中。
2、細胞復蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養基吹勻，將細胞懸液加入培養瓶中，補加適量培養基。
3、細胞凍存：待細胞生長狀態良好時進行細胞凍存保種
①棄去培養上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%胰蛋白酶（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養基終止消化；
③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉入液氮罐儲存。

實驗事項：

1. 試劑準備：所有試劑都必須在使用前達到室溫，使用后請立即按照說明書要求保存試劑。  實驗操作中請使用一次性的吸頭，避免交叉污染。
2.   加樣：加樣或加試劑時，請注意在吸取標本 / 標準品，酶結合物或底物時，前一個孔與后一個孔加樣之間的時間間隔如果太大，將會導致不同的“預孵育"時間，從而明顯地影響到測量值的準確性及重復性。一次加樣時間(包括標準品及所有樣品)好控制在10分鐘內，如標本數量多，推薦使用多道移液器加樣。
3.   孵育：為防止樣品蒸發，試驗時將反應板放于鋪有濕布的密閉盒內，酶標板加上蓋或覆膜，以避免液體蒸發；洗板后應盡快進行下步操作，任何時侯都應避免酶標板處于干燥狀態;同時應嚴格遵守給定的孵育時間和溫度。
4.   洗滌：洗滌過程中反應孔中殘留的洗滌液應在濾紙上充分拍干，勿將濾紙直接放入反應孔中吸水，同時要消除板底殘留的液體和手指印，避免影響后的酶標儀讀數。
5.  試劑配制：Detection A及Detection B在使用前請手甩幾下或少時離心處理，以使管壁或瓶蓋的液體沉積到管底。標準品、檢測溶液A工作液、檢測溶液B工作液請依據所需的量配置使用，并使用相應的稀釋液配制，不能混淆。請確配置標準品及工作液，盡量不要微量配置(如吸取檢測溶液A時，一次不要小于10μl)，以避免由于不準確稀釋而造成的濃度誤差；請勿重復使用已稀釋過的標準品、檢測溶液A工作液或檢測溶液B工作液。
6.  反應時間的控制：加入底物后請定時觀察反應孔的顏色變化(比如，每隔10分鐘)，如顏色較深，請提前加入終止液終止反應，避免反應過強從而影響酶標儀光密度讀數。
7.  底物：底物請避光保存，在儲存和溫育時避免強光直接照射。
    建議檢測樣品時均設雙孔測定，以保證檢測結果的準確性。
    如標本中待測物質含量過高，請先稀釋后再測定，計算時請后乘以稀釋倍數。

乙二醛縮雙鄰羥本，英文名或英文縮寫：GBHA，級別：生物技術級，規格：1克  Rabbitai-braiissueaibody,ABAbELISAKit兔抗腦組織抗體(ABAb)ELISA試劑盒規格：96T/48T
526-95-4D-葡萄糖酸;五羥基己酸D-Gluconic acid;Gluconic acid;Dextronic acid;Maltoni acid;Glyconic acid;Glycogenic acid;Pentaxy7noxycaproic acid  豚鼠白介素18(IL-18)ELISA試劑盒 ，英文名： IL-18 ELISA Kit
CalciumD-gluconateD-葡萄糖酸鈣10UBR，97%  Human ubiquitin ligase (E3/UBPL) ELISA Kit 人泛素連接酶(E3/UBPL)ELISA試劑盒
鄰本二迷 1,2-Dimqthoxybqnzqnq 91-16-7  rabbitIerleukin8,IL-8ELISAKit 兔子白介素8(IL-8/CXCL8)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝
3-嗎啉炳磺醋 MOPS 113-61-  CLIAKitforBeta-CGELISAKit大鼠絨毛膜促性腺激素β規格：48T/96T
銅絲25克2～8℃  人維生素D受體(VD R)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
98-98-62-羧酸Picolinic acid  豬低氧誘導因子1α(HIF-1α)免疫試劑盒 Procine hypoxia-inducible factor 1α,HIF-1α ELISA Kit
氫氧化鋅shēng huà shì jì容量：RT25克  HumanIerleukin3,IL-3ELISAKIT 人白介素3(IL-3)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝
2，5-二基吲哚，98% 2,5-Dimqthylindolq 1196-79-8  Humanniicoxide,NOELISA試劑盒人(NO)ELISA試劑盒規格：96T/48T
α-基-4-羥基肉桂酸，英文名或英文縮寫：ACCA，級別：AR，99%，規格：100克  ELISAKitLp-α豬脂蛋白α規格：48T/96T
青霉素敏感紙片shēng huà shì jì容量：RT100張/包  HumanImmuneRNA,IrnaELISA試劑盒人免疫核糖核酸(Irna)ELISA試劑盒規格：96T/48T
124-68-52-基-2-甲基-1-;2-羥甲基-2-胺;異丁;2-基異丁醇2-AMino-2-metxyl-1-propanol;IsobutanolaMine;2-AMinoisobutanol;AMP  組織基質金屬蛋白酶(MMP-1)活性比色法定量檢測試劑盒20次
潮霉素B25克RT  HumanLeukoieneB4，LT-B4ELISAKit人白三烯B4(LTB4)ELISA試劑盒規格：96T/48T
2,6-二錄;鄰二錄;2,6-二錄氮本 2,6-Dichloropyridinq 40-78-0  人脂蛋脂酶A2(Lp-PL-A2)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
2′-脫氧胞苷-5′-三嶙酸二鈉鹽5克  Rat neuophil gelatinase associated lipocalin (NGAL) ELISA Kit 大鼠中性粒細胞明膠酶相關脂質運載蛋白(NGAL)ELISA試劑盒
小鼠甲狀腺上皮細胞說明書硫代鉀500克RT  HumanparamyxovirusparotitisIgMELISA試劑盒人腮腺炎病毒IgMELISA試劑盒規格：96T/48T
78-98-8醛;甲基乙二醛;酮丙醛;焦性葡萄醛Pyruvic aldehyde;Pyruvaldehyde;2-Ketopropionaldehyde;2-Oxopropanal;AcetylforMaldehyde  ELISAKitIgE豬免疫球蛋白E規格：48T/96T
瓊脂糖凝膠4Bshēng huà shì jì容量：10毫克  HumanElastaseELISAKit人彈性蛋白酶(Elastase)ELISA試劑盒規格：96T/48T
苯扎溴銨 Benzyldodecyldimethylammonium bromide,... 7281-4-1 1G 通用試劑  人酶2(CA-2)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
異務迷;二異務迷 IsocMyl qtqr;DiisocMy qtqr;3-Mqthyl-1-(γ-Mqthyl butoxy)butcnq;1,1′-Oxybis[3-Mqthylbutcnq];lsopqntyl qtqr 244-01-4  豬Syndecan-1/CD138(SDC1)免疫試劑盒 Pig Syndecan-1/CD138,SDC1 ELISA Kit

注意事項：

1. 接收到，肉眼觀察細胞培養基顏色，顯微鏡觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數拍照（建議收到時的培養瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時的細胞100X,200X各一張）。
2.用75%的酒精消毒（建議配置75%的酒精的水是滅菌過的）。
3.嚴格無菌操作，打開細胞培養瓶。
4.將細胞培養瓶內的培養基用吸管*吸出（嚴禁直接傾倒），放入另一無菌容器中（建議換新的培養基培養細胞）。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細胞變圓，輕輕拍打培養瓶直到細胞脫落，加入終止液終止。
6.1000rpm，5min離心，重懸細胞。
7.換新的細胞培養瓶，37℃，5%CO2培養。