PrimaCell™人小梁網(wǎng)細(xì)胞試劑盒 總RNA制備:利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA,然后用Qiagen RNA Clean Kit進(jìn)行純化。生物科技提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測(cè)定結(jié)果等。 cDNA制備:純化后的總RNA來(lái)合成cDNA第一鏈,以50ul總反應(yīng)體系進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄,體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機(jī)引物以及10mg總RNA。68℃反應(yīng)10min 后終止RT反應(yīng)。利用1x RT Buffer 運(yùn)輸cDNA,1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng)。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過(guò)了嚴(yán)格的QA/QC分析,保證了產(chǎn)品的質(zhì)量。 蛋白制備:利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人關(guān)節(jié)軟骨組織裂解液,離心去除組織碎片,通過(guò)Bio-Rad蛋白檢測(cè)試劑盒測(cè)定蛋白濃度,組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF,-80度保存。 產(chǎn)品名稱 | PrimaCell™人小梁網(wǎng)細(xì)胞試劑盒價(jià)格 | 英文名稱 | | 貨號(hào) | EYX99537 |
實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說(shuō)明; 1.本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng),而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng),懸浮細(xì)胞可使用滴片法; 2.所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃,并經(jīng)過(guò)鉻酸洗液處理; 3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕; 4.如果需要更多生長(zhǎng)狀態(tài)一致的細(xì)胞,可以使用較大的培養(yǎng)皿,但不宜過(guò)大,以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率; 5.如果細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。 運(yùn)輸和保存; 視天氣狀況和運(yùn)輸距離遠(yuǎn)近,公司與客戶協(xié)商后選擇下述方式中的一種進(jìn)行。 1)1mL凍存細(xì)胞懸液裝于1.8ml的凍存管中,置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進(jìn)行運(yùn)輸;收到細(xì)胞后請(qǐng)盡快解凍復(fù)蘇細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng),如無(wú)法立刻進(jìn)行復(fù)蘇操作,凍存細(xì)胞可在-80℃的條件下保存1個(gè)月。 2)T-25培養(yǎng)瓶充滿*培養(yǎng)基后進(jìn)行常溫運(yùn)輸;收到細(xì)胞后請(qǐng)鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài),如鋪瓶率超過(guò)85%請(qǐng)立即進(jìn)行傳代操作,如懸浮的細(xì)胞較多,請(qǐng)將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過(guò)夜以幫助未死亡的懸浮細(xì)胞能夠再次貼壁。 一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備: 1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號(hào)21875-091),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。 2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。 3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲(chǔ)存。
操作要點(diǎn); 1)將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱;準(zhǔn)備一個(gè)15mL無(wú)菌的離心管,加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。 2)將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出,快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫(可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯,裝滿37℃的水,細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi),再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中)。輕輕晃動(dòng)凍存管,使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍,使細(xì)胞能盡快通過(guò)易受損的溫度段(-5~0℃)。注意凍存管管口不能沒(méi)入水中,BRL(大鼠肝細(xì)胞)避免引起污染。 3)用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺(tái)內(nèi),將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi),輕輕吹打液體,使細(xì)胞均勻分散,降低DMSO濃度,吹打時(shí)避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次,均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。 4)800rpm離心5min,棄上清,加入新鮮的培養(yǎng)基,吹打制成細(xì)胞懸液。 5)將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶?jī)?nèi),補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基,輕輕晃動(dòng)細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻,放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。 6)第二天觀察細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)情況,換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng),待細(xì)胞長(zhǎng)至80~90%匯合時(shí)正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過(guò)2~3次傳代,細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。 英文名稱MouseAILR1ELISAKIT小鼠AILR1規(guī)格:96T/48T 35286-58-9地榆皂苷I品牌 Ziyuglycoside I 腸胃活檢螺旋桿菌(H.PYLORI)瓦辛斯泰雷(WahinStarry)銀染試劑盒50 35286-59-0地榆皂苷Ⅱ規(guī)格 Ziyuglycoside II RatGelsolinELISA試劑盒大鼠凝溶膠蛋白(Gelsolin)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 482-89-3靛藍(lán) Indigo 小鼠自身調(diào)節(jié)因子(AIRE)ELISA試劑盒 ,英文名: AIRE ELISA Kit 479-41-4靛玉紅說(shuō)明書 Indirubin 犬C肽(C-Peptide)ELISA檢測(cè)試劑盒 96T/48T 551-08-6丁烯基苯酞品牌 n-Butylidenephthalide 6989-21-5蒼術(shù)酮 Atractylon 組蛋白脫乙酰化酶1(HDAC1)活性比色法定量檢測(cè)試劑盒20 69884-00-0擬人參皂苷F11 Pseudoginsenoside F11 組蛋白脫乙酰化酶(HDAC)總活性比色法定量檢測(cè)試劑盒20 69659-80-9丹參酮IIA-磺酸鈉品牌 Tanshinone IIA-sulfonic 組蛋白染色質(zhì)沉淀(CHIP)分析試劑盒10/20 69659-80-9丹參酮IIA-磺酸鈉規(guī)格 Sulfotanshinone Injection 組蛋白賴氨酸特異性脫甲基酶1(LYSINESPECIFICDEMETHYLASE-1;LSD-1)活性熒光定量檢測(cè)試劑盒 69363-14-0五味子酚規(guī)格 Schisanhenol 組蛋白H4乙酰化檢測(cè)試劑盒10/20等 RatInsulin-likegrowthfactorbindingprotein4,IGFBP-4ELISA試劑盒大鼠胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白4(IGFBP-4)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 32449-98-2Khasianine品牌 Khasianine 小鼠載脂蛋白C1(APOC1)ELISA試劑盒 ,英文名: APOC1 ELISA Kit 20316-62-5銀椴苷規(guī)格 Tiliroside 單核細(xì)胞趨化蛋白1(MCP-1/CCL2/MCAF)ELISA檢測(cè)試劑盒Monkeymonocytechemotacticprotein1/monocytechemotacticandactivatingfactor,MCP1/MCAFELISAkit 96T/48T 51938-32-0夏佛塔苷 Schaftoside 犬堿性1酸酶(ALP)試劑盒 Canine alkaline phosphatase,ALP ELISA Kit 260413-62-5女貞苷說(shuō)明書 Ligustroflavone 英文名稱HumanAngiopoietin-2ELISAKit人血管生成素-2(ANG-2)規(guī)格:96T/48T 113443-70-2大黃酸-8-O-β-D-葡萄糖苷品牌 Rhein-8-O-β-D-glucopyranoside PrimaCell™人小梁網(wǎng)細(xì)胞試劑盒價(jià)格194851-84-8酸棗仁皂苷D品牌 Jujuboside D 英文名稱RatMyoglobinELISAKit大鼠肌紅蛋白(MYO)規(guī)格:96T/48T 19408-84-5二氫辣椒堿規(guī)格 Dihydrocapsaicin 英文名稱RatMotilinELISAKit大鼠胃動(dòng)素(MTL)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 19309-14-9小豆蔻明 Cardamonin 英文名稱RatMotilinELISAKit大鼠胃動(dòng)素(MTL)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 19275-46-83-異倒捻子素 3-isomangostin 英文名稱RatMMP-9ELISAKit大鼠基質(zhì)金屬蛋白酶-9(MMP-9)規(guī)格:96T/48T 19210-12-9哈巴俄苷品牌 Harpagoside 英文名稱RatMMP-5ELISAKit大鼠基質(zhì)金屬蛋白酶5(MMP-5)規(guī)格:96T/48T |