小鼠腦動(dòng)脈血管內(nèi)皮細(xì)胞說明書

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小鼠腦動(dòng)脈血管內(nèi)皮細(xì)胞【Mouse Brain : Normal Cerebral Vascular Endothelial Cells】
       產(chǎn)品描述：公司提供的原代細(xì)胞均來自新鮮組織，公司提供的小鼠源原代細(xì)胞均來自新鮮組織，用于培養(yǎng)該細(xì)胞的組織采集是根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)方案進(jìn)行。細(xì)胞的培養(yǎng)采用公司PrimaCellTM原代細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒來優(yōu)化目的細(xì)胞生長(zhǎng)條件，以降低雜細(xì)胞的污染，同時(shí)的穩(wěn)定。在公司部標(biāo)準(zhǔn)的操作流程下，原代細(xì)胞可以保持分化狀態(tài)，進(jìn)而可以用于評(píng)估體外藥物模型系統(tǒng)和調(diào)節(jié)特定基因的遺傳功能。

細(xì)胞培養(yǎng)方法：

1、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%胰酶（T25瓶），使胰酶覆蓋整個(gè)瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細(xì)胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時(shí)間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%胰蛋白酶（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存。

實(shí)驗(yàn)事項(xiàng)：

1. 試劑準(zhǔn)備：所有試劑都必須在使用前達(dá)到室溫，使用后請(qǐng)立即按照說明書要求保存試劑。  實(shí)驗(yàn)操作中請(qǐng)使用一次性的吸頭，避免交叉污染。
2.   加樣：加樣或加試劑時(shí)，請(qǐng)注意在吸取標(biāo)本 / 標(biāo)準(zhǔn)品，酶結(jié)合物或底物時(shí)，前一個(gè)孔與后一個(gè)孔加樣之間的時(shí)間間隔如果太大，將會(huì)導(dǎo)致不同的“預(yù)孵育"時(shí)間，從而明顯地影響到測(cè)量值的準(zhǔn)確性及重復(fù)性。一次加樣時(shí)間(包括標(biāo)準(zhǔn)品及所有樣品)好控制在10分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用多道移液器加樣。
3.   孵育：為防止樣品蒸發(fā)，試驗(yàn)時(shí)將反應(yīng)板放于鋪有濕布的密閉盒內(nèi)，酶標(biāo)板加上蓋或覆膜，以避免液體蒸發(fā)；洗板后應(yīng)盡快進(jìn)行下步操作，任何時(shí)侯都應(yīng)避免酶標(biāo)板處于干燥狀態(tài);同時(shí)應(yīng)嚴(yán)格遵守給定的孵育時(shí)間和溫度。
4.   洗滌：洗滌過程中反應(yīng)孔中殘留的洗滌液應(yīng)在濾紙上充分拍干，勿將濾紙直接放入反應(yīng)孔中吸水，同時(shí)要消除板底殘留的液體和手指印，避免影響后的酶標(biāo)儀讀數(shù)。
5.  試劑配制：Detection A及Detection B在使用前請(qǐng)手甩幾下或少時(shí)離心處理，以使管壁或瓶蓋的液體沉積到管底。標(biāo)準(zhǔn)品、檢測(cè)溶液A工作液、檢測(cè)溶液B工作液請(qǐng)依據(jù)所需的量配置使用，并使用相應(yīng)的稀釋液配制，不能混淆。請(qǐng)確配置標(biāo)準(zhǔn)品及工作液，盡量不要微量配置(如吸取檢測(cè)溶液A時(shí)，一次不要小于10μl)，以避免由于不準(zhǔn)確稀釋而造成的濃度誤差；請(qǐng)勿重復(fù)使用已稀釋過的標(biāo)準(zhǔn)品、檢測(cè)溶液A工作液或檢測(cè)溶液B工作液。
6.  反應(yīng)時(shí)間的控制：加入底物后請(qǐng)定時(shí)觀察反應(yīng)孔的顏色變化(比如，每隔10分鐘)，如顏色較深，請(qǐng)?zhí)崆凹尤虢K止液終止反應(yīng)，避免反應(yīng)過強(qiáng)從而影響酶標(biāo)儀光密度讀數(shù)。
7.  底物：底物請(qǐng)避光保存，在儲(chǔ)存和溫育時(shí)避免強(qiáng)光直接照射。
    建議檢測(cè)樣品時(shí)均設(shè)雙孔測(cè)定，以保證檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。
    如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過高，請(qǐng)先稀釋后再測(cè)定，計(jì)算時(shí)請(qǐng)后乘以稀釋倍數(shù)。

乙二安四乙酸二鈉銅鹽250毫克2～8℃  ELISAKitIgG豚鼠免疫球蛋白G規(guī)格：48T/96T

(羅丹明123)  ChickenAi-ThrombinⅢ,AT-ⅢELISAKit雞抗凝血酶Ⅲ抗體(AT-Ⅲ)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

鹽酸shēng huà shì jì容量：25克  人環(huán)氧合酶-1(COX-1)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

5-溴-間二本，98% 5-Bromo-m-xylqnq 226-96-7  小鼠雌激素(E)免疫試劑盒 Mouse esogen,E ELISA Kit

小分子量蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)shēng huà shì jì容量：25克  血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子B(VEGF-B)ELISA試劑盒 ，英文名： VEGF-B ELISA Kit
鐵絲shēng huà shì jì容量：RT25克  Humanglomerularbasememembraneaibogy,GBMELISAKit人抗腎小球基底膜抗體(GBM)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

PPLO瓊脂NA  人細(xì)菌(BV)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

FMOC-L-絲酸1公斤  豬基質(zhì)金屬蛋白酶9(MMP-9)免疫試劑盒 Porcine maix metalloproteinase 9,MMP-9 ELISA Kit

N-(4-基丁基)-N-... N-(4-Aminobutyl)-N-ethylisoluminol,≥90% 66612-29-1 25MG 通用試劑  HumanPlatelet-DerivedGrowthFactorSolubleReceptorα,PDGFsR-αELISAkit 人血血小板衍生生長(zhǎng)因子可溶性受體α(PDGFsR-α)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

錄化;一水合錄化 litxium chloridq Monohydrctq 82144-11-  humanMusmusculussimilao60SribosomalproteinL12,LOC382344ELISA試劑盒人類似60S核糖體蛋白L21(LOC382344)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
羥脯酸測(cè)試前處理試劑25支/包RT  Humancholecystokininoctapeptide，CCK-8ELISAKit人膽囊收縮素/縮膽囊素八肽(CCK-8)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

84-58-5錄xlonine  人c-Jun基末端激酶(JNK)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

曲酸100克  兔前列腺素F(PG-F)免疫試劑盒 Rabbit prostaglandin F,PG-F ELISA kit

橙花叔醇 Mixture of cis and trans,97% 7212-44-4 25ML 通用試劑  前顆粒蛋白(PGRN)ELISA試劑盒 ，英文名： PGRN ELISA Kit

偶氮膦mA/2-(4--2-膦酸基苯偶氮)-7-(3-乙酰基苯偶氮)-1,8-二羥基-3,6-二磺酸/CPA-mA 顯色劑 1克 國(guó)產(chǎn)/進(jìn)口  rabbitInsulin-likegrowthfactor1,IGF-1ELISA試劑盒兔子胰島素樣生長(zhǎng)因子1(IGF-1)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
小鼠腦動(dòng)脈血管內(nèi)皮細(xì)胞說明書嶙酸鹽葡萄糖胨水培養(yǎng)基shēng huà shì jì容量：150米  組織樣品組織蛋白酶B(CATHEPSINB)活性熒光定量檢測(cè)試劑盒20次

76-61-9百里酚藍(lán)Thymol Blue  HumanHeatShockProtein70，HSP-70ELISAKit人熱休克蛋白70(HSP-70)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

乙酸纖維素100毫克  人血管活性肽酶抑制劑(VPI)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

12-冠醚-4 12-Crown-4,98% 294-93-9 1G 通用試劑  豬熱休克蛋白40(HSP-40)免疫試劑盒 Porcine HSP-40 ELISA Kit

乳糖膽鹽培養(yǎng)基 Lcctosq Bilq Mqdium  Humaniercellularadhesionmolecule2,ICAM-2ELISAKit 人細(xì)胞間粘附分子2(ICAM-2/CD102)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

注意事項(xiàng)：

1. 接收到，肉眼觀察細(xì)胞培養(yǎng)基顏色，顯微鏡觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況，并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照（建議收到時(shí)的培養(yǎng)瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時(shí)的細(xì)胞100X,200X各一張）。
2.用75%的酒精消毒（建議配置75%的酒精的水是滅菌過的）。
3.嚴(yán)格無菌操作，打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶。
4.將細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)基用吸管*吸出（嚴(yán)禁直接傾倒），放入另一無菌容器中（建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞）。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細(xì)胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細(xì)胞變圓，輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細(xì)胞脫落，加入終止液終止。
6.1000rpm，5min離心，重懸細(xì)胞。
7.換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶，37℃，5%CO2培養(yǎng)。