小鼠子宮平滑肌細(xì)胞提取物培養(yǎng)

小鼠子宮平滑肌細(xì)胞提取物【Mouse Uterus: Normal Uterus Derivatives】

小鼠子宮平滑肌細(xì)胞提取物是從小鼠原代子宮平滑肌細(xì)胞提取的，小鼠原代子宮平滑肌細(xì)胞從正常小鼠子宮組織制備。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過嚴(yán)格的QA/QC流程以確保其質(zhì)量。這些產(chǎn)品可以直接用于基因克隆，表達(dá)圖譜分析以及各種分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的研究。

總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進(jìn)行純化。生物科技提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結(jié)果等。
cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA第一鏈，以50ul總反應(yīng)體系進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機(jī)引物以及10mg總RNA。68℃反應(yīng)10min 后終止RT反應(yīng)。利用1x RT Buffer 運(yùn)輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng)。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴(yán)格的QA/QC分析，保證了產(chǎn)品的質(zhì)量。
蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人關(guān)節(jié)軟骨組織裂解液，離心去除組織碎片，通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。

 實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說明：

1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時(shí)動作要輕；
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率；
5．如果細(xì)胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

操作要點(diǎn)：

1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細(xì)胞能盡快通過易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細(xì)胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時(shí)避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。
5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶內(nèi)，補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長至80~90%匯合時(shí)正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。

萊克多巴胺快速檢測卡（膠體金法）Benzoguanamine916苯代三聚胺

萊克多巴胺快速檢測卡（膠體金法）Benzalazine5888二芐肼

萊克多巴胺快速檢測卡（膠體金法）Benzofuroxan46苯并呋咱

氯霉素快速檢測卡（膠體金法）3-(2-Benzothiazolylthio)propionic acid4763-(2-苯并噻唑基硫代)

氯霉素快速檢測卡（膠體金法）(2-Benzothiazolylthio)acetic acid629572-(苯并噻唑基硫代)乙酸
Inositol   100g                 Quetiapine  111974-69-7  中文名：喹硫平  分子式：C21H25N3O2S 

Indole-3-ByicAcid(IBA)   5g  Quetiapine  中文名：喹硫平  分子式：C21H25N3O2S 

icine   100g                 3-Amino-5-phenylpyrazole  中文名：3-氨基-5-苯基吡唑  分子式：C9H9N3 

ichloroaceticAcid   500g  3-Aminoadamantan-1-ol  702-82-9  中文名：  分子式：C10H17NO 

I 型膠原 N 末端肽 (X)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進(jìn)口分裝  3'-Hydroxygynuramide II  中文名：  分子式：C42H83NO6  度：%
硝酸奧昔康唑（標(biāo)準(zhǔn)品）  Oxiconazole Nitrate  質(zhì)量規(guī)格：HPLC法含量測定 小鼠生長抑素(SS)ELISA試劑盒 ，英文名： SS ELISA Kit

普瑞巴林（標(biāo)準(zhǔn)品）  Pregabalin  質(zhì)量規(guī)格：HPLC法含量測定 小鼠生長因子(GH)ELISA檢測試劑盒Mousegrowthhormone,GHELISAKIT 96T/48T

(S)-(+)-苯乙醇酸（普瑞巴林雜質(zhì)）（標(biāo)準(zhǔn)品）  [(S)-(+)-MandelicAcid] （Pregabalin impurity）  質(zhì)量規(guī)格：供檢查用 小鼠視黃醇結(jié)合蛋白(RBP)ELISA檢測試劑盒MouseRetinol-bindingprotein,RBPELISAKit 96T/48T

山梨醇（標(biāo)準(zhǔn)品）  D-Sorbitol  質(zhì)量規(guī)格：供檢查用 小鼠視黃醇結(jié)合蛋白(RBP)ELISA試劑盒 ，英文名： RBP ELISA Kit

乙二醇（標(biāo)準(zhǔn)品）  Ethylene Glycol  質(zhì)量規(guī)格：供檢查用 小鼠視黃醇結(jié)合蛋白4(RBP-4)ELISA檢測試劑盒MouseRetinol-bindingprotein4,RBP-4ELISAKit 96T/48T

降二氫辣椒堿  Nordihydrocapsaicin  質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥95%,標(biāo)準(zhǔn)品 小鼠視黃醇結(jié)合蛋白4(RBP-4)ELISA試劑盒 ，英文名： RBP-4 ELISA Kit

4-甲氨基安替比林（標(biāo)準(zhǔn)品）  4-(Methylamino)-antipyrine  質(zhì)量規(guī)格：供檢查用 小鼠嗜環(huán)蛋白/親環(huán)素A(CyPA)ELISA檢測試劑盒MousecyclophilinA,CyPAELISAKit 96T/48T

硫酸肼（標(biāo)準(zhǔn)品）  Hydrazine sulfate  質(zhì)量規(guī)格：供TLC法系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用 小鼠嗜環(huán)蛋白/親環(huán)素A(CyPA)ELISA試劑盒 ，英文名： CyPA ELISA Kit

硫酸肼（標(biāo)準(zhǔn)品）  Hydrazine sulfate  質(zhì)量規(guī)格：供檢查用 小鼠嗜酸粒細(xì)胞趨化蛋白Eotaxin 1(Eotaxin 1/CCL11)ELISA試劑盒 ，英文名： Eotaxin 1/CCL11 ELISA Kit

環(huán)扁桃酯（標(biāo)準(zhǔn)品）  Cyclandelate  質(zhì)量規(guī)格：HPLC法含量測定 小鼠嗜酸粒細(xì)胞趨化蛋白Eotaxin 2(Eotaxin 2/CCL24)ELISA試劑盒 ，英文名： Eotaxin 2/CCL24 ELISA Kit
小鼠子宮平滑肌細(xì)胞提取物培養(yǎng)可溶性ENG/sCD105   英文名稱：   Human soluble Endoglin   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   ENG/sCD105  Paroxetine hydrochloride  中文名：鹽酸帕羅西汀  分子式：C19H21ClFNO3 

顆粒體蛋白Granulin   英文名稱：   Granulin   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   GRN  3-O-Acetylandrostenone hydrazone  122914-94-7  中文名：3-O-乙酰基雄酮腙  分子式：C21H32N2O2 

抗緊張素‖受體︱型自身抗體   英文名稱：   Angiotensin 2 Receptor 1 Aoaibodies   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   AT1R-AA  3-Amino-4-methylbenzamide  中文名：3-氨基-4-甲基苯甲酰胺  分子式：C8H10N2O  度：98.0%

抗緊張素‖受體︱型自身抗體   英文名稱：    Angiotensin 2 Receptor 1 Aoaibodies   英文縮寫：   AT1R-AA   規(guī)格：   48T/96T  Ophiopogonin D  中文名：麥冬皂苷D  分子式：C44H70O16 

抗酸性0酸酶（SACP）試劑盒（比色法）  Repaglinide  135062-02-1  中文名：瑞格列奈  分子式：Repaglinide  度：98.0%  關(guān)鍵詞：

運(yùn)輸和保存：
視天氣狀況和運(yùn)輸距離遠(yuǎn)近，公司與客戶協(xié)商后選擇下述方式中的一種進(jìn)行。
1)1mL凍存細(xì)胞懸液裝于1.8ml的凍存管中，置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進(jìn)行運(yùn)輸；收到細(xì)胞后請盡快解凍復(fù)蘇細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，如無法立刻進(jìn)行復(fù)蘇操作，凍存細(xì)胞可在-80℃的條件下保存1個月。
2)T-25培養(yǎng)瓶充滿*培養(yǎng)基后進(jìn)行常溫運(yùn)輸；收到細(xì)胞后請鏡下觀察細(xì)胞生長狀態(tài)，如鋪瓶率超過85%請立即進(jìn)行傳代操作，如懸浮的細(xì)胞較多，請將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細(xì)胞能夠再次貼壁。
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。