PrimaCell™人視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞試劑盒

PrimaCell™人視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞試劑盒

總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進行純化。生物科技提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結(jié)果等。
cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA第一鏈，以50ul總反應(yīng)體系進行逆轉(zhuǎn)錄，體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機引物以及10mg總RNA。68℃反應(yīng)10min 后終止RT反應(yīng)。利用1x RT Buffer 運輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng)。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴(yán)格的QA/QC分析，保證了產(chǎn)品的質(zhì)量。
蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人關(guān)節(jié)軟骨組織裂解液，離心去除組織碎片，通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。

實驗要點及說明；

1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕；
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率；
5．如果細(xì)胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

操作要點；

1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細(xì)胞能盡快通過易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細(xì)胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。
5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶內(nèi)，補加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進行后續(xù)的實驗。

犬血管性血友病因子/瑞斯托霉素輔因子(VWF)試劑盒 Dog von Willebrand Factor,vWF ELISA Kit  97-53-0丁香酚規(guī)格  Eugenol

英文名稱FN纖維連結(jié)蛋白規(guī)格：96T/48T  530-57-4丁香酸  Syringic acid

腸胃活檢螺旋桿菌(H.PYLORI)亞甲基藍(METHYLENEBLUE)染色試劑盒50  12777-70-7東北貫眾素說明書  Dryocrassin ABBA

Ratghcagons-likepepfide1,GLP-1ELISA試劑盒大鼠胰高血糖素樣肽1(Glp-1)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  531-44-2東莨菪苷品牌  Scopolin

小鼠轉(zhuǎn)運蛋白1(TNPO1)ELISA試劑盒 ，英文名： TNPO1 ELISA Kit  51-34-3東莨菪堿規(guī)格  Scopolamine
6926-14-3乙酰哈巴苷說明書  8-O-Acetylharpagide   組蛋白H4-K8乙?；瘷z測試劑盒10/20等

6926-14-3乙酰哈巴苷品牌  Acetylharpagide  組蛋白H4-K5乙?；瘷z測試劑盒10/20等

69091-17-4β-乙酰氧基異戊酰阿卡寧規(guī)格  β-acetoxyisovalerylalkannin  組蛋白H4-K31(mono)甲基化檢測試劑盒10/20等

6902-91-6吉馬酮說明書  Germacrone   組蛋白H4-K20(mono/di/i)甲基化檢測試劑盒10/20等

6902-77-8京尼平  Genipin   組蛋白H4-K16乙酰化檢測試劑盒10/20等
Very low density lipoprotein receptor (VLDLR) ELISA Kit 人極低密度脂蛋白受體(VLDLR)ELISA試劑盒  93675-88-8連翹酯苷E說明書  Forsythoside E 

guineapigLeukoieneB4,LT-B4ELISAKit 豚鼠白三烯B4(LTB4)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝  28282-25-9β-欖香酮酸品牌  β-EleMonic acid 

CLIAKitforANG-IIELISAKit大鼠血管緊張素Ⅱ規(guī)格：48T/96T  173429-83-9補骨脂香豆素A規(guī)格  Ficusin A 

血液脯氨酰肽酶(prolinase)比色法定量檢測試劑盒20  7437-55-08-香葉草氧基補骨脂素  8-Geranyloxypsoralen 

PorcineDexamethasone,DexELISAKit豬地塞米松(Dex)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  14259-47-3香蜂草苷說明書  DidyMin
PrimaCell™人視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞試劑盒培養(yǎng)19885-10-0澤瀉醇A說明書  Alisol A   英文名稱RatneuropeptideYELISAKit大鼠神經(jīng)肽Y(NPY)規(guī)格：96T/48T

19879-32-4補骨脂甲素說明書  Bavachin   英文名稱RatneuropeptideYELISAKit大鼠神經(jīng)肽Y(NPY)規(guī)格：96T/48T

19773-24-1貝母辛規(guī)格  Peimisine  英文名稱RatMyosinELISAKit大鼠肌球蛋白(Myosin)規(guī)格：96T/48T

19666-76-3人參二醇說明書  Panaxadiol  英文名稱RatMyosinELISAKit大鼠肌球蛋白(Myosin)規(guī)格：96T/48T

19573-01-4白當(dāng)歸素規(guī)格  Byakangelicin   英文名稱RatMyoglobinELISAKit大鼠肌紅蛋白(MYO)規(guī)格：96T/48T

運輸和保存；
視天氣狀況和運輸距離遠近，公司與客戶協(xié)商后選擇下述方式中的一種進行。
1)1mL凍存細(xì)胞懸液裝于1.8ml的凍存管中，置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進行運輸；收到細(xì)胞后請盡快解凍復(fù)蘇細(xì)胞進行培養(yǎng)，如無法立刻進行復(fù)蘇操作，凍存細(xì)胞可在-80℃的條件下保存1個月。
2)T-25培養(yǎng)瓶充滿*培養(yǎng)基后進行常溫運輸；收到細(xì)胞后請鏡下觀察細(xì)胞生長狀態(tài)，如鋪瓶率超過85%請立即進行傳代操作，如懸浮的細(xì)胞較多，請將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細(xì)胞能夠再次貼壁。
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。