小鼠腦靜脈血管平滑肌細(xì)胞提取物

小鼠腦靜脈血管平滑肌細(xì)胞提取物【Mouse Brain: Normal Cerebral Venous Vascular Smooth Muscle Cells Derivatives】

小鼠腦靜脈血管平滑肌細(xì)胞提取物是從小鼠原代腦靜脈血管平滑肌細(xì)胞提取的，小鼠原代腦靜脈血管平滑肌細(xì)胞從正常小鼠腦組織制備。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過(guò)嚴(yán)格的QA/QC流程以確保其質(zhì)量。這些產(chǎn)品可以直接用于基因克隆，表達(dá)圖譜分析以及各種分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的研究。

總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進(jìn)行純化。生物科技提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測(cè)定結(jié)果等。
cDNA制備：純化后的總RNA來(lái)合成cDNA第一鏈，以50ul總反應(yīng)體系進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機(jī)引物以及10mg總RNA。68℃反應(yīng)10min 后終止RT反應(yīng)。利用1x RT Buffer 運(yùn)輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng)。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過(guò)了嚴(yán)格的QA/QC分析，保證了產(chǎn)品的質(zhì)量。
蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人關(guān)節(jié)軟骨組織裂解液，離心去除組織碎片，通過(guò)Bio-Rad蛋白檢測(cè)試劑盒測(cè)定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。

 實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說(shuō)明：

1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過(guò)鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕；
4．如果需要更多生長(zhǎng)狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過(guò)大，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率；
5．如果細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

操作要點(diǎn)：

1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個(gè)15mL無(wú)菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動(dòng)凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細(xì)胞能盡快通過(guò)易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒(méi)入水中，BRL(大鼠肝細(xì)胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺(tái)內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時(shí)避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。
5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動(dòng)細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長(zhǎng)至80~90%匯合時(shí)正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過(guò)2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。

卡那霉素 ELISA試劑盒96TMethylprednisolone hemisuccinate29217

乙氧基 ELISA試劑盒96TMethylprednisolone acetate536甲基潑尼松龍醋酸酯

四環(huán)素 ELISA試劑盒96TMethyl β-D-fructofuranoside1334甲基-β-D-呋喃果糖苷

雪卡毒素 ELISA試劑盒96TMethyl levulinate6245

磺胺喹惡啉 ELISA試劑盒96TMethyl chlorogenate2987綠原酸甲酯
Humanplasminogenactivatorinhibitor，PAIELISAKit人纖溶酶原激活物抑制因子(PAI)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  1-Methyl-3-nitrophthalate  中文名：  分子式：C9H7NO6 

Humanplasminogenactivator，PLGAELISAKit人纖溶酶原激活劑(PLGA)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  1-Methyl-5-nitro-1H-benzimidazole-2-butanoic acid ethyl ester  3543-72-4  中文名：  分子式：C14H17N3O4 

HumanPlasminogen，PlgELISAKit人纖溶酶原(Plg)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  1-Methyl-aminomethyl naphthalene  中文名：  分子式：C12H13N 

Humanplasmin-aiplasmincomplex,PAPELISAKit人纖溶酶抗纖溶酶復(fù)合物(PAP)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  1-Hydroxy-2-methylanthraquinone  中文名：1-羥基-2-甲基蒽醌  分子式：C15H10O3 

Humanplasmin/fibrinolysin,PL/FbnELISAKit人纖溶酶/纖維蛋白溶酶(PL/Fbn)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  1-Ethyl-3-nitrophthalate  16533-45-2  中文名：  分子式：C10H9NO6
西替利嗪  Cetirizine 2HCl  質(zhì)量規(guī)格：>98%，進(jìn)口分裝 *化學(xué)封閉溶液10毫升

醋酸西曲瑞克  Cetrorelix Acetate  質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR 超聲化鮭魚(yú)精單鏈DNA10毫升

白屈菜紅堿  Chelerythrine  質(zhì)量規(guī)格：>98%,分析標(biāo)準(zhǔn)品 超氧化物歧化酶(SOD)標(biāo)準(zhǔn)曲線測(cè)定試劑盒5

醋酸氯己定  Chlorhexidine Acatate  質(zhì)量規(guī)格：>98% 超氧化物歧化酶(SOD)標(biāo)準(zhǔn)曲線測(cè)定試劑盒5

氟伐他汀鈉  Fluvastatin  salt  質(zhì)量規(guī)格：>99%,BR 超氧化物歧化酶(SOD)紅細(xì)胞裂解樣品制備試劑盒50

氟伐他汀鈉(標(biāo)準(zhǔn)品)  Fluvastatin  salt  質(zhì)量規(guī)格：>99%,BR 超氧化物歧化酶(SOD)紅細(xì)胞裂解樣品制備試劑盒50

克林沙星  Clinafloxacin  質(zhì)量規(guī)格：>98.5% 超氧化物歧化酶(SOD)活性檢測(cè)試劑盒(附標(biāo)準(zhǔn)樣)50

鹽酸左旋咪唑  Levamisole HCl  質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR 超氧化物歧化酶(SOD)活性檢測(cè)試劑盒50

鹽酸左旋咪唑（標(biāo)準(zhǔn)品）  Levamisole HCl  質(zhì)量規(guī)格：UV法含量測(cè)定 超氧化物歧化酶(SOD)活性檢測(cè)試劑盒50

米帕明/丙咪嗪  Clomipramine HCL   質(zhì)量規(guī)格：>99%,BR 超氧化物歧化酶(SOD)活性酶動(dòng)力比色法定量檢測(cè)試劑盒(含標(biāo)準(zhǔn)樣)50
小鼠腦靜脈血管平滑肌細(xì)胞提取物檸檬酸（CA）含量測(cè)試盒   可見(jiàn)分光光度法   50管/48樣              Rizatriptan benzoate  145202-66-0  中文名：苯甲酸利扎曲坦  分子式：C22H25N5O2 

鎳快速測(cè)試盒   Nickel rapid test case  Ranitidine  66357-35-5  中文名：雷尼替丁  分子式：C13H22N4O3S  度：98.0%  關(guān)鍵詞： 

鎳測(cè)試盒   Nickel test case  4-[2-(2-Amino-4,7-dihydro-4-oxo-1H-pymol[2,3-d]pyrimodin-5-yl)ethyl]benzoic acid methyl ester  中文名：  分子式：C16H16N4O3  度：98.0%

尿酸含量測(cè)試盒   可見(jiàn)分光光度法   50管/48樣              Tropisetron hydrochloride  105826-92-4  中文名：鹽酸托烷司瓊  分子式：C17H21ClN2O2 

尿激酶型纖溶酶原激活因子受體 (uPA-R)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進(jìn)口分裝     O-Benzyl-L-tyrosine  16652-64-5  中文名：O-芐基-L-酪氨酸  分子式：C16H17NO3

運(yùn)輸和保存：
視天氣狀況和運(yùn)輸距離遠(yuǎn)近，公司與客戶協(xié)商后選擇下述方式中的一種進(jìn)行。
1)1mL凍存細(xì)胞懸液裝于1.8ml的凍存管中，置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進(jìn)行運(yùn)輸；收到細(xì)胞后請(qǐng)盡快解凍復(fù)蘇細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，如無(wú)法立刻進(jìn)行復(fù)蘇操作，凍存細(xì)胞可在-80℃的條件下保存1個(gè)月。
2)T-25培養(yǎng)瓶充滿*培養(yǎng)基后進(jìn)行常溫運(yùn)輸；收到細(xì)胞后請(qǐng)鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)，如鋪瓶率超過(guò)85%請(qǐng)立即進(jìn)行傳代操作，如懸浮的細(xì)胞較多，請(qǐng)將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過(guò)夜以幫助未死亡的懸浮細(xì)胞能夠再次貼壁。
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號(hào)21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。