小鼠腦靜脈血管平滑肌細胞提取物

小鼠腦靜脈血管平滑肌細胞提取物【Mouse Brain: Normal Cerebral Venous Vascular Smooth Muscle Cells Derivatives】

小鼠腦靜脈血管平滑肌細胞提取物是從小鼠原代腦靜脈血管平滑肌細胞提取的，小鼠原代腦靜脈血管平滑肌細胞從正常小鼠腦組織制備。所有的產品在發(fā)貨之前均經過嚴格的QA/QC流程以確保其質量。這些產品可以直接用于基因克隆，表達圖譜分析以及各種分子生物學實驗的研究。

總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進行純化。生物科技提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結果等。
cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA第一鏈，以50ul總反應體系進行逆轉錄，體系中包括MMLV反轉錄酶和隨機引物以及10mg總RNA。68℃反應10min 后終止RT反應。利用1x RT Buffer 運輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應。所有cDNA產品在訂單發(fā)貨之前都經過了嚴格的QA/QC分析，保證了產品的質量。
蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人關節(jié)軟骨組織裂解液，離心去除組織碎片，通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。

 實驗要點及說明：

1．本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細胞培養(yǎng)，懸浮細胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應該為優(yōu)質玻璃，并經過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕；
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率；
5．如果細胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

操作要點：

1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內，再逐步轉移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內*解凍，使細胞能盡快通過易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內，將管內細胞轉移至準備好的離心管內，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉移至離心管內。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細胞懸液。
5）將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內，補加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內培養(yǎng)。
6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經過2~3次傳代，細胞活力恢復后才能進行后續(xù)的實驗。

卡那霉素 ELISA試劑盒96TMethylprednisolone hemisuccinate29217

乙氧基 ELISA試劑盒96TMethylprednisolone acetate536甲基潑尼松龍醋酸酯

四環(huán)素 ELISA試劑盒96TMethyl β-D-fructofuranoside1334甲基-β-D-呋喃果糖苷

雪卡毒素 ELISA試劑盒96TMethyl levulinate6245

磺胺喹惡啉 ELISA試劑盒96TMethyl chlorogenate2987綠原酸甲酯
Humanplasminogenactivatorinhibitor，PAIELISAKit人纖溶酶原激活物抑制因子(PAI)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  1-Methyl-3-nitrophthalate  中文名：  分子式：C9H7NO6 

Humanplasminogenactivator，PLGAELISAKit人纖溶酶原激活劑(PLGA)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  1-Methyl-5-nitro-1H-benzimidazole-2-butanoic acid ethyl ester  3543-72-4  中文名：  分子式：C14H17N3O4 

HumanPlasminogen，PlgELISAKit人纖溶酶原(Plg)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  1-Methyl-aminomethyl naphthalene  中文名：  分子式：C12H13N 

Humanplasmin-aiplasmincomplex,PAPELISAKit人纖溶酶抗纖溶酶復合物(PAP)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  1-Hydroxy-2-methylanthraquinone  中文名：1-羥基-2-甲基蒽醌  分子式：C15H10O3 

Humanplasmin/fibrinolysin,PL/FbnELISAKit人纖溶酶/纖維蛋白溶酶(PL/Fbn)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  1-Ethyl-3-nitrophthalate  16533-45-2  中文名：  分子式：C10H9NO6
西替利嗪  Cetirizine 2HCl  質量規(guī)格：>98%，進口分裝 *化學封閉溶液10毫升

醋酸西曲瑞克  Cetrorelix Acetate  質量規(guī)格：>98%,BR 超聲化鮭魚精單鏈DNA10毫升

白屈菜紅堿  Chelerythrine  質量規(guī)格：>98%,分析標準品 超氧化物歧化酶(SOD)標準曲線測定試劑盒5

醋酸氯己定  Chlorhexidine Acatate  質量規(guī)格：>98% 超氧化物歧化酶(SOD)標準曲線測定試劑盒5

氟伐他汀鈉  Fluvastatin  salt  質量規(guī)格：>99%,BR 超氧化物歧化酶(SOD)紅細胞裂解樣品制備試劑盒50

氟伐他汀鈉(標準品)  Fluvastatin  salt  質量規(guī)格：>99%,BR 超氧化物歧化酶(SOD)紅細胞裂解樣品制備試劑盒50

克林沙星  Clinafloxacin  質量規(guī)格：>98.5% 超氧化物歧化酶(SOD)活性檢測試劑盒(附標準樣)50

鹽酸左旋咪唑  Levamisole HCl  質量規(guī)格：>98%,BR 超氧化物歧化酶(SOD)活性檢測試劑盒50

鹽酸左旋咪唑（標準品）  Levamisole HCl  質量規(guī)格：UV法含量測定 超氧化物歧化酶(SOD)活性檢測試劑盒50

米帕明/丙咪嗪  Clomipramine HCL   質量規(guī)格：>99%,BR 超氧化物歧化酶(SOD)活性酶動力比色法定量檢測試劑盒(含標準樣)50
小鼠腦靜脈血管平滑肌細胞提取物檸檬酸（CA）含量測試盒   可見分光光度法   50管/48樣              Rizatriptan benzoate  145202-66-0  中文名：苯甲酸利扎曲坦  分子式：C22H25N5O2 

鎳快速測試盒   Nickel rapid test case  Ranitidine  66357-35-5  中文名：雷尼替丁  分子式：C13H22N4O3S  度：98.0%  關鍵詞： 

鎳測試盒   Nickel test case  4-[2-(2-Amino-4,7-dihydro-4-oxo-1H-pymol[2,3-d]pyrimodin-5-yl)ethyl]benzoic acid methyl ester  中文名：  分子式：C16H16N4O3  度：98.0%

尿酸含量測試盒   可見分光光度法   50管/48樣              Tropisetron hydrochloride  105826-92-4  中文名：鹽酸托烷司瓊  分子式：C17H21ClN2O2 

尿激酶型纖溶酶原激活因子受體 (uPA-R)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進口分裝     O-Benzyl-L-tyrosine  16652-64-5  中文名：O-芐基-L-酪氨酸  分子式：C16H17NO3

運輸和保存：
視天氣狀況和運輸距離遠近，公司與客戶協(xié)商后選擇下述方式中的一種進行。
1)1mL凍存細胞懸液裝于1.8ml的凍存管中，置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進行運輸；收到細胞后請盡快解凍復蘇細胞進行培養(yǎng)，如無法立刻進行復蘇操作，凍存細胞可在-80℃的條件下保存1個月。
2)T-25培養(yǎng)瓶充滿*培養(yǎng)基后進行常溫運輸；收到細胞后請鏡下觀察細胞生長狀態(tài)，如鋪瓶率超過85%請立即進行傳代操作，如懸浮的細胞較多，請將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細胞能夠再次貼壁。
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。