人胚胎滋養(yǎng)層細(xì)胞說(shuō)明書(shū)

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人胚胎滋養(yǎng)層細(xì)胞【Human Placental：Normal Placenta Trophoblast Cells】
       產(chǎn)品描述：公司提供的原代細(xì)胞均來(lái)自新鮮組織，公司提供的人源原代細(xì)胞均來(lái)自新鮮組織，用于培養(yǎng)該細(xì)胞的組織采集是根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)方案進(jìn)行。細(xì)胞的培養(yǎng)采用公司PrimaCellTM原代細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒來(lái)優(yōu)化目的細(xì)胞生長(zhǎng)條件，以降低雜細(xì)胞的污染，同時(shí)的穩(wěn)定。在公司部標(biāo)準(zhǔn)的操作流程下，原代細(xì)胞可以保持分化狀態(tài)，進(jìn)而可以用于評(píng)估體外藥物模型系統(tǒng)和調(diào)節(jié)特定基因的遺傳功能。

細(xì)胞培養(yǎng)方法：

1、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%胰酶（T25瓶），使胰酶覆蓋整個(gè)瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細(xì)胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時(shí)間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%胰蛋白酶（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存。

實(shí)驗(yàn)事項(xiàng)：

1. 試劑準(zhǔn)備：所有試劑都必須在使用前達(dá)到室溫，使用后請(qǐng)立即按照說(shuō)明書(shū)要求保存試劑。  實(shí)驗(yàn)操作中請(qǐng)使用一次性的吸頭，避免交叉污染。
2.   加樣：加樣或加試劑時(shí)，請(qǐng)注意在吸取標(biāo)本 / 標(biāo)準(zhǔn)品，酶結(jié)合物或底物時(shí)，前一個(gè)孔與后一個(gè)孔加樣之間的時(shí)間間隔如果太大，將會(huì)導(dǎo)致不同的“預(yù)孵育"時(shí)間，從而明顯地影響到測(cè)量值的準(zhǔn)確性及重復(fù)性。一次加樣時(shí)間(包括標(biāo)準(zhǔn)品及所有樣品)好控制在10分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用多道移液器加樣。
3.   孵育：為防止樣品蒸發(fā)，試驗(yàn)時(shí)將反應(yīng)板放于鋪有濕布的密閉盒內(nèi)，酶標(biāo)板加上蓋或覆膜，以避免液體蒸發(fā)；洗板后應(yīng)盡快進(jìn)行下步操作，任何時(shí)侯都應(yīng)避免酶標(biāo)板處于干燥狀態(tài);同時(shí)應(yīng)嚴(yán)格遵守給定的孵育時(shí)間和溫度。
4.   洗滌：洗滌過(guò)程中反應(yīng)孔中殘留的洗滌液應(yīng)在濾紙上充分拍干，勿將濾紙直接放入反應(yīng)孔中吸水，同時(shí)要消除板底殘留的液體和手指印，避免影響后的酶標(biāo)儀讀數(shù)。
5.  試劑配制：Detection A及Detection B在使用前請(qǐng)手甩幾下或少時(shí)離心處理，以使管壁或瓶蓋的液體沉積到管底。標(biāo)準(zhǔn)品、檢測(cè)溶液A工作液、檢測(cè)溶液B工作液請(qǐng)依據(jù)所需的量配置使用，并使用相應(yīng)的稀釋液配制，不能混淆。請(qǐng)確配置標(biāo)準(zhǔn)品及工作液，盡量不要微量配置(如吸取檢測(cè)溶液A時(shí)，一次不要小于10μl)，以避免由于不準(zhǔn)確稀釋而造成的濃度誤差；請(qǐng)勿重復(fù)使用已稀釋過(guò)的標(biāo)準(zhǔn)品、檢測(cè)溶液A工作液或檢測(cè)溶液B工作液。
6.  反應(yīng)時(shí)間的控制：加入底物后請(qǐng)定時(shí)觀察反應(yīng)孔的顏色變化(比如，每隔10分鐘)，如顏色較深，請(qǐng)?zhí)崆凹尤虢K止液終止反應(yīng)，避免反應(yīng)過(guò)強(qiáng)從而影響酶標(biāo)儀光密度讀數(shù)。
7.  底物：底物請(qǐng)避光保存，在儲(chǔ)存和溫育時(shí)避免強(qiáng)光直接照射。
    建議檢測(cè)樣品時(shí)均設(shè)雙孔測(cè)定，以保證檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。
    如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過(guò)高，請(qǐng)先稀釋后再測(cè)定，計(jì)算時(shí)請(qǐng)后乘以稀釋倍數(shù)。

正硼酸，英文名或英文縮寫(xiě)：Boric acid，級(jí)別：高純，98%，規(guī)格：500克  ELISAKitTIMP-4小鼠基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子4規(guī)格：48T/96T

AgaroseIII 5g/25g原裝/100g原裝 Amresco X174  Humanamiodarone,ADELISAKit人呋同(AD)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

Ammoniumchromate酸1克AR，98%  人抗神經(jīng)元核抗體1型/抗Hu抗體(ANNA-1/Hu)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

1;腎上腺皮質(zhì)激速;11-去輕-17-羌基皮質(zhì)同 Cortisonq;17α,21-Dixy7noxy-4-prqgnqnq-3,11,20-trionq;11-Dqxy77-xy7noxycorticostqronq 1923-6-2  小鼠抗子宮內(nèi)膜抗體(EMAb)免疫試劑盒 Mouse Endomeium Aibody,EMAb ELISA Kit

SpermineO,O'-二甲基硫代嶙酰胺100克BR，95%  早期前列腺癌抗原2(EPCA2)ELISA試劑盒 ，英文名： EPCA2 ELISA Kit
現(xiàn)隱肉湯100毫升  組織賴(lài)氨酸(lysine)含量熒光定量檢測(cè)試劑盒20次

599-00-8氘代三-d1tnifluonoeeti ei7-D  HumanIerleukin8，IL-8ELISAKit人白介素8(IL-8/CXCL8)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

黃色氧化shēng huà shì jì容量：500克  人乙型肝炎病毒前S2抗原(HBV preS2Ag)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

百里酚酞 Thymolphthalein 125-20-2 10G 通用試劑  Human cathepsin D (cath-D) ELISA Kit 人組織蛋白酶D(cath-D)ELISA試劑盒

肖醋銦 INDIUM nitncTq 07398-97-8  HumanHeatShockFactor1,HSF1ELISAKit 人熱休克因子1(HSF-1)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
沙氏瓊脂培養(yǎng)基500克  胸腺非依賴(lài)性抗原(TI-Ag)ELISA試劑盒 ，英文名： TI-Ag ELISA Kit

(曲拉通X-100)  Mouseheatshockprotein60,hSP-60ELISA試劑盒小鼠熱休克蛋白60(Hsp-60)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

鉀shēng huà shì jì容量：RT25克  ELISAKitTM兔子血栓調(diào)節(jié)蛋白規(guī)格：48T/96T

4-羌基派啶 4-xy7noxypipqridinq 238-16-1  Cheraxquadricarinatuslipovitellin/vitellin,Lv/VnELISAKit紅螯光殼螯蝦卵黃脂1蛋白/卵黃1蛋白(Lv/Vn)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

胺藍(lán)shēng huà shì jì容量：5克  人固酮(ALD)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
人胚胎滋養(yǎng)層細(xì)胞說(shuō)明書(shū)免疫血清兔抗HRPshēng huà shì jì容量：100克  Ratai-Monocyteaibody,AMAELISA試劑盒大鼠抗單核細(xì)胞抗體(AMA)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

PseudomonasIsolationAgar 500g原裝 BD 292710  小鼠Discs大同源物4(DLG4)ELISA試劑盒 ，英文名： DLG4 ELISA Kit

俾氏麥棕Y250毫克保存：-20℃  人髓系細(xì)胞觸發(fā)受體-1(EM-1)ELISA檢測(cè)試劑盒HumaniggeringReceptorExpressesonMyeloidCells-1,EM-1ELISAKit 96T/48T

2-羌基-5-氧基本加醋 5-Mqthoxysclicylic ccid 61--4  大鼠高密度脂蛋白2(HDL2)免疫試劑盒 Rat high density lipoprotein 2,HDL2 ELISA Kit

BES,wo7iumSALTBES 鈉高純級(jí)100G66992-27-6RT  CLIAKitforVEGF-BELISAKit大鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子B規(guī)格：48T/96T

注意事項(xiàng)：

1. 接收到，肉眼觀察細(xì)胞培養(yǎng)基顏色，顯微鏡觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況，并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照（建議收到時(shí)的培養(yǎng)瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時(shí)的細(xì)胞100X,200X各一張）。
2.用75%的酒精消毒（建議配置75%的酒精的水是滅菌過(guò)的）。
3.嚴(yán)格無(wú)菌操作，打開(kāi)細(xì)胞培養(yǎng)瓶。
4.將細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)基用吸管*吸出（嚴(yán)禁直接傾倒），放入另一無(wú)菌容器中（建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞）。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細(xì)胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細(xì)胞變圓，輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細(xì)胞脫落，加入終止液終止。
6.1000rpm，5min離心，重懸細(xì)胞。
7.換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶，37℃，5%CO2培養(yǎng)。