大鼠腸微血管組織提取物培養(yǎng)

大鼠腸微血管組織提取物【Rat Intestinal: Normal Intestinal Microvascular Derivatives】

微血管是極細微的血管，管徑平均為6～9μm，連于動、靜脈之間，互相連接成網(wǎng)狀。微血管壁薄，管徑較小，血流很慢，通透性大。其功能是利于血液與組織之間進行物質(zhì)交換。其管壁主要由一層內(nèi)皮細胞構(gòu)成，在內(nèi)皮有一薄層結(jié)締組織。另外還常可見到一種扁而有突起的細胞貼在微血管的管壁外面，稱為周細胞。公司科技提供來自新鮮或冷凍大鼠腸微血管組織中高質(zhì)量的總RNA，PCR準(zhǔn)備的第一

總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進行純化。生物科技提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結(jié)果等。
cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA第一鏈，以50ul總反應(yīng)體系進行逆轉(zhuǎn)錄，體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機引物以及10mg總RNA。68℃反應(yīng)10min 后終止RT反應(yīng)。利用1x RT Buffer 運輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng)。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴格的QA/QC分析，保證了產(chǎn)品的質(zhì)量。
蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人關(guān)節(jié)軟骨組織裂解液，離心去除組織碎片，通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。 

實驗要點及說明；

1．本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細胞培養(yǎng)，懸浮細胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕；
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率；
5．如果細胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

運輸和保存；

視天氣狀況和運輸距離遠近，公司與客戶協(xié)商后選擇下述方式中的一種進行。
1)1mL凍存細胞懸液裝于1.8ml的凍存管中，置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進行運輸；收到細胞后請盡快解凍復(fù)蘇細胞進行培養(yǎng)，如無法立刻進行復(fù)蘇操作，凍存細胞可在-80℃的條件下保存1個月。
2)T-25培養(yǎng)瓶充滿*培養(yǎng)基后進行常溫運輸；收到細胞后請鏡下觀察細胞生長狀態(tài)，如鋪瓶率超過85%請立即進行傳代操作，如懸浮的細胞較多，請將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細胞能夠再次貼壁。
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。

操作要點；

1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細胞能盡快通過易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi)，將管內(nèi)細胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細胞懸液。
5）將細胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細胞瓶內(nèi)，補加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細胞需經(jīng)過2~3次傳代，細胞活力恢復(fù)后才能進行后續(xù)的實驗。

Cy35mgNorfloxacin4586諾氟沙星

Cy3 NHS1 mgIndapamide2675吲達帕胺

Cy55mgLoperamide hydrochloride345523鹽酸洛哌丁胺

Cy5 NHSNefopam hydrochloride233277鹽酸奈福泮

Cy5.55mgBenzenesulfonic acid1998/11/3苯磺酸
Coumarin 7  27425-55-4  中文名：香豆素 7  分子式：C20H19N3O2    山羊內(nèi)啡肽（EP）ELISA試劑盒  

Aspartame  22839-47-0  中文名：阿司帕坦  分子式：C14H18N2O5    山羊骨形成蛋白2（BMP-2）ELISA試劑盒         組裝/原裝

Aripiprazole  129722-12-9  中文名：阿立哌唑  分子式：C23H27Cl2N3O2    山羊孤啡肽（OFQ/N）ELISA試劑盒           

1,6-Anhydro-β-D-glucose  498-07-7  中文名：1,6-脫水-β-D-葡萄糖  分子式：C6H10O5    山羊球蛋白G   英文名稱：   Immunoglobulin G   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   IgG

Benzo-15-crown 5-ether  14098-44-3  中文名：苯并-15-冠5-醚  分子式：C14H20O5    綿羊促卵泡生成激素   英文名稱：   Follicle Stimulating Hormone   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   FSH
尼泊金乙酯  Ethyl Paraben  質(zhì)量規(guī)格：美國進口 組分氧化應(yīng)激活性氧(ROS)光澤精化學(xué)發(fā)光法定量檢測試劑盒50

四環(huán)素復(fù)鹽  Tetracycline phosphate complex  質(zhì)量規(guī)格：美國進口 組分氧化應(yīng)激活性氧(ROS)魯米諾化學(xué)發(fā)光法定量檢測試劑盒50

四環(huán)素  Tetracycline  質(zhì)量規(guī)格：進分 組分氧化應(yīng)激活性氧(ROS)魯米諾化學(xué)發(fā)光法定量檢測試劑盒50

4-鹽酸差向四環(huán)素  4-Epitetracycline hydrochloride  質(zhì)量規(guī)格：美國進口 組織固著液(Bouin固著液)50毫升

四環(huán)素-d6  Tetracycline-d6  質(zhì)量規(guī)格：美國進口 組織灌注固著液(4%中性多聚甲固著液)50毫升

4-差向-四環(huán)素-d6  4-epi-Tetracycline-d6  質(zhì)量規(guī)格：美國進口

4-差向-四環(huán)素  4-Epi-Tetracycline  質(zhì)量規(guī)格：美國進口

四環(huán)素10-O-b-D-半乳糖皮蒽  Tetracycline 10-O-b-D-galactopyranoside  質(zhì)量規(guī)格：美國進口

米格列奈鈣  Mitiglinide Calcium  質(zhì)量規(guī)格：美國進口

大鼠腸微血管組織提取物培養(yǎng)轉(zhuǎn)化生長因子β1(TGF-β1)ELISAKit     Agomelatine  中文名：阿戈美拉汀  分子式：C15H17NO2  度：98.0%

轉(zhuǎn)化生長因子β1(TGF-β1)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝  2-(Morpholinodithio)benzothiazole  95-32-9  中文名：2-(4-嗎啉基二硫代)苯并噻唑  分子式：C11H12N2OS3  度：98.0%  關(guān)鍵詞： 

主要組織相容性復(fù)合體Ⅲ類elisa試劑盒   主要組織相容性復(fù)合體Ⅲ類試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   主要組織相容性復(fù)合體Ⅲ類試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：主要組織相容性復(fù)合體Ⅲ類試劑盒、主要組織相容性復(fù)合體Ⅲ類eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。  Agomelatine  138112-76-2  中文名：阿戈美拉汀  分子式：C15H17NO2 

主要組織相容性復(fù)合體Ⅲ類(MHCⅢ/RLAⅢ)ELISA試劑盒     Afatinib  850140-72-6  中文名：阿法替尼  分子式：C24H25ClFN5O3 

主要組織相容性復(fù)合體Ⅲ類(MHCⅢ/RLAⅢ)ELISAKit     6-Amino-4-hydroxy-2-naphthalenesulfonic acid  中文名：6-氨基-4-羥基-2-萘磺酸  分子式：C10H9NO4S  度：98.0%