小鼠腦動脈血管平滑肌細(xì)胞提取物培養(yǎng)

小鼠腦動脈血管平滑肌細(xì)胞提取物【Mouse Brain: Normal Aortic Smooth Muscle Cells Derivatives】

小鼠腦動脈血管平滑肌細(xì)胞提取物是從小鼠原代腦動脈血管平滑肌細(xì)胞提取的，小鼠原代腦動脈血管平滑肌細(xì)胞從正常小鼠腦組織制備。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過嚴(yán)格的QA/QC流程以確保其質(zhì)量。這些產(chǎn)品可以直接用于基因克隆，表達圖譜分析以及各種分子生物學(xué)實驗的研究。

總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進行純化。生物科技提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結(jié)果等。
cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA第一鏈，以50ul總反應(yīng)體系進行逆轉(zhuǎn)錄，體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機引物以及10mg總RNA。68℃反應(yīng)10min 后終止RT反應(yīng)。利用1x RT Buffer 運輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng)。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴(yán)格的QA/QC分析，保證了產(chǎn)品的質(zhì)量。
蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人關(guān)節(jié)軟骨組織裂解液，離心去除組織碎片，通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。

我司常期代理ATCC Acris  abcam  cst  Biorbyt  santa  Novus  sigma  lifespan  NEB  roche  ABI  R&D millipore   BD  Qiagen Cayman  Jackson Life  GeneTex   Bio-Rad DSHB  tocris   peprotech 等品牌；部分產(chǎn)品現(xiàn)貨，超低比價，產(chǎn)品名稱貨期短，價格優(yōu)，售后齊全。

細(xì)胞培養(yǎng)方法：
1、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達到80-90%時即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%胰酶（T25瓶），使胰酶覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細(xì)胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補加適量培養(yǎng)基。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時進行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%胰蛋白酶（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。

實驗事項：

1. 試劑準(zhǔn)備：所有試劑都必須在使用前達到室溫，使用后請立即按照說明書要求保存試劑。  實驗操作中請使用一次性的吸頭，避免交叉污染。
2.   加樣：加樣或加試劑時，請注意在吸取標(biāo)本 / 標(biāo)準(zhǔn)品，酶結(jié)合物或底物時，前一個孔與后一個孔加樣之間的時間間隔如果太大，將會導(dǎo)致不同的“預(yù)孵育"時間，從而明顯地影響到測量值的準(zhǔn)確性及重復(fù)性。一次加樣時間(包括標(biāo)準(zhǔn)品及所有樣品)好控制在10分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用多道移液器加樣。
3.   孵育：為防止樣品蒸發(fā)，試驗時將反應(yīng)板放于鋪有濕布的密閉盒內(nèi)，酶標(biāo)板加上蓋或覆膜，以避免液體蒸發(fā)；洗板后應(yīng)盡快進行下步操作，任何時侯都應(yīng)避免酶標(biāo)板處于干燥狀態(tài);同時應(yīng)嚴(yán)格遵守給定的孵育時間和溫度。
4.   洗滌：洗滌過程中反應(yīng)孔中殘留的洗滌液應(yīng)在濾紙上充分拍干，勿將濾紙直接放入反應(yīng)孔中吸水，同時要消除板底殘留的液體和手指印，避免影響后的酶標(biāo)儀讀數(shù)。
5.  試劑配制：Detection A及Detection B在使用前請手甩幾下或少時離心處理，以使管壁或瓶蓋的液體沉積到管底。標(biāo)準(zhǔn)品、檢測溶液A工作液、檢測溶液B工作液請依據(jù)所需的量配置使用，并使用相應(yīng)的稀釋液配制，不能混淆。請確配置標(biāo)準(zhǔn)品及工作液，盡量不要微量配置(如吸取檢測溶液A時，一次不要小于10μl)，以避免由于不準(zhǔn)確稀釋而造成的濃度誤差；請勿重復(fù)使用已稀釋過的標(biāo)準(zhǔn)品、檢測溶液A工作液或檢測溶液B工作液。
6.  反應(yīng)時間的控制：加入底物后請定時觀察反應(yīng)孔的顏色變化(比如，每隔10分鐘)，如顏色較深，請?zhí)崆凹尤虢K止液終止反應(yīng)，避免反應(yīng)過強從而影響酶標(biāo)儀光密度讀數(shù)。
7.  底物：底物請避光保存，在儲存和溫育時避免強光直接照射。
    建議檢測樣品時均設(shè)雙孔測定，以保證檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。
    如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高，請先稀釋后再測定，計算時請后乘以稀釋倍數(shù)。

注意事項：

1. 接收到，肉眼觀察細(xì)胞培養(yǎng)基顏色，顯微鏡觀察細(xì)胞生長情況，并對細(xì)胞進行不同倍數(shù)拍照（建議收到時的培養(yǎng)瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時的細(xì)胞100X,200X各一張）。
2.用75%的酒精消毒（建議配置75%的酒精的水是滅菌過的）。
3.嚴(yán)格無菌操作，打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶。
4.將細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)基用吸管*吸出（嚴(yán)禁直接傾倒），放入另一無菌容器中（建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞）。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細(xì)胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細(xì)胞變圓，輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細(xì)胞脫落，加入終止液終止。
6.1000rpm，5min離心，重懸細(xì)胞。
7.換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶，37℃，5%CO2培養(yǎng)。 

菌落總數(shù)測試片Methenolone enanthate32美替諾龍庚酸酯

阪崎腸桿菌單重?zé)晒?/span>PCR檢測試劑盒48Methenolone acetate4345美替諾龍醋酸酯

沙門氏菌單重?zé)晒?/span>PCR檢測試劑盒48Androst-en7-one96355α-雄甾-烯7-酮

志賀氏菌單重?zé)晒?/span>PCR檢測試劑盒48Epiandrosterone4819表雄酮

單增李斯特氏菌單重?zé)晒?/span>PCR檢測試劑盒48Androstanolone 17-benzoate577雄諾龍苯甲酸酯
Humanplacealprotein，PPELISAKit人胎盤蛋白(PP)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  1-Benzyl L-aspartate  7362-93-8  中文名：L-天冬氨酸1-芐酯  分子式：C11H13NO4 

HumanPlacealalkalinepkosphatase,PLAPELISAKit人胎盤堿性0酸酶(PLAP)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  1-Amino-4-hydroxyanthraquinone  中文名：1-氨基-4-羥基蒽醌  分子式：C14H9NO3 

Humanplacealactogen,HPLELISAKit人胎盤催乳素(HPL)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  1-Amino-2-methylanthraquinone  82-28-0  中文名：1-氨基-2-甲基蒽醌  分子式：C15H11NO2 

Humanplaceagrowthfactor，PLGFELISAKit人胎盤生長因子(PLGF)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  1-Actamido-3,5-dimethyladmantane  中文名：  分子式：C14H23NO 

HumanPlaceaCadherin，P-cadELISAKit人P鈣黏蛋白/胎盤鈣黏蛋白(P-cad)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  1-Acetoxy-9,17-octadecadiene-12,14-diyne-11,16-diol  213905-35-2  中文名：  分子式：C20H28O4
西洛他唑（標(biāo)準(zhǔn)品）  Cilostazol  質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品 RatNeuroglobin,NGBELISA試劑盒大鼠腦紅蛋白(NGB)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

順鉑(進分)  Cisplatin   質(zhì)量規(guī)格：進分Sigma P4394  RatNeuron-specificenolase,NSEELISAKit大鼠神經(jīng)特異性烯醇化酶(NSE)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

順鉑  Cisplatin   質(zhì)量規(guī)格：>98.5%,細(xì)胞培養(yǎng)級,BR RatNeuron-specificenolase,NSEELISA試劑盒大鼠神經(jīng)特異性烯醇化酶(NSE)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

順鉑（標(biāo)準(zhǔn)品）  Cisplatin   質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品 RatNeuroophin3,-3ELISAKit大鼠神經(jīng)營養(yǎng)因子3(-3)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

克拉曲濱,克拉利賓  Cladribine  質(zhì)量規(guī)格：>99.0%,USP34,BR,可用于細(xì)胞培養(yǎng) RatNeuroophin3,-3ELISA試劑盒大鼠神經(jīng)營養(yǎng)因子3(-3)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

克拉霉素  Clarithromycin   質(zhì)量規(guī)格：>97%,USP34,BR RatNeuroophin4,-4ELISAKit大鼠神經(jīng)營養(yǎng)因子4(-4)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

克拉霉素（標(biāo)準(zhǔn)品）  Clarithromycin   質(zhì)量規(guī)格：HPLC>95%,標(biāo)準(zhǔn)品 RatNeuroophin4,-4ELISA試劑盒大鼠神經(jīng)營養(yǎng)因子4(-4)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

克林霉素酯  Clindamycin Phosphate  質(zhì)量規(guī)格：克林霉素含量>758μg/mg,USP32 RatneuropeptideY,NP-YELISAKit大鼠神經(jīng)肽Y(NP-Y)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

克林霉素酯(標(biāo)準(zhǔn)品)  Clindamycin Phosphate  質(zhì)量規(guī)格：用于含量測定 RatneuropeptideY,NP-YELISA試劑盒大鼠神經(jīng)肽Y(NP-Y)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

克羅拉濱/氯法拉濱  Clofarabine  質(zhì)量規(guī)格：> 99%,BR,可用于細(xì)胞培養(yǎng) Ratnicotinamideadeninedinucleotidephosphate,NADPHELISAKit大鼠煙酰胺腺嘌呤二核苷酸0酸(NADPH)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
小鼠腦動脈血管平滑肌細(xì)胞提取物培養(yǎng)普氏立克次體(RP)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)   48T  3-Amino-3-phenylpropionic acid  中文名：C9H11NO2  分子式：C9H11NO2  度：98.0%

葡萄糖氧化酶（GOD）測試盒   可見分光光度法   50管/48樣  Pirfenidone  中文名：哌非尼酮  分子式：C12H11NO 

葡萄糖激酶   英文名稱：   Human Glucokinase   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   GCK  Androstanolone heptanoate  中文名：雄諾龍庚酸酯  分子式：C26H42O3  度：98.0%

葡萄糖-6-0酸脫氫酶（G－6－PD）檢測   BN N-ACETYL-D-GLUCOSAMINIDASE (NAG) detection                 Prilocaine hydrochloride  1786-81-8  中文名：鹽酸丙胺卡因  分子式：C13H21ClN2O 

葡萄糖60酸脫氫酶   英文名稱：   Human Glucose 6 Phosphate Dehydrogenase   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   G6PD  Androstanolone heptanoate  中文名：雄諾龍庚酸酯  分子式：C26H42O3