人角膜上皮細胞提取物說明書

人角膜上皮細胞提取物【Human Eye: Normal Corneal Epithelial Cells Derivatives】

人角膜上皮細胞提取物是從人原代角膜上皮細胞提取的，人原代角膜上皮細胞從正常人角膜上皮組織制備。正常人角膜上皮組織采集自各地方醫院，采集工作根據IRB 和 HIPAA批準的方案進行。所有的產品在發貨之前均經過嚴格的QA/QC流程以確保其質量。這些產品可以直接用于基因克隆，表達圖譜分析以及各種分子生物學實驗的研究。

總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進行純化。生物科技提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結果等。
cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA第一鏈，以50ul總反應體系進行逆轉錄，體系中包括MMLV反轉錄酶和隨機引物以及10mg總RNA。68℃反應10min 后終止RT反應。利用1x RT Buffer 運輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應。所有cDNA產品在訂單發貨之前都經過了嚴格的QA/QC分析，保證了產品的質量。
蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人關節軟骨組織裂解液，離心去除組織碎片，通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。 

 實驗要點及說明：

1．本方法適用于貼壁細胞培養，而不適用于懸浮細胞培養，懸浮細胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應該為優質玻璃，并經過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕；
4．如果需要更多生長狀態一致的細胞，可以使用較大的培養皿，但不宜過大，以避免培養液的浪費和增加污染機率；
5．如果細胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

 運輸和保存：

視天氣狀況和運輸距離遠近，公司與客戶協商后選擇下述方式中的一種進行。
1)1mL凍存細胞懸液裝于1.8ml的凍存管中，置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進行運輸；收到細胞后請盡快解凍復蘇細胞進行培養，如無法立刻進行復蘇操作，凍存細胞可在-80℃的條件下保存1個月。
2)T-25培養瓶充滿*培養基后進行常溫運輸；收到細胞后請鏡下觀察細胞生長狀態，如鋪瓶率超過85%請立即進行傳代操作，如懸浮的細胞較多，請將培養瓶至于培養箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細胞能夠再次貼壁。
一．培養基及培養凍存條件準備：
1）準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優質胎牛血清，10%。
2）培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配，液氮儲存。

操作要點：

1）將培養基在37℃水浴鍋預熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預熱培養基。
2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內，再逐步轉移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內*解凍，使細胞能盡快通過易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內，將管內細胞轉移至準備好的離心管內，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產生氣泡。用新鮮培養基洗管壁2次，均轉移至離心管內。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養基，吹打制成細胞懸液。
5）將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內，補加適量的培養基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內培養。
6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養基以去除死細胞。繼續培養，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經過2~3次傳代，細胞活力恢復后才能進行后續的實驗。

樹脂型™基因組DNA提純試劑盒0次5-O-Ethylcleroindicin D4881382

樹脂型™PCR產物純化及膠回收試劑盒0次5-Hydroxymethyl-furoic acid633815-羥甲基-糠酸

硅膠膜型™質粒DNA小量提取試劑盒次(2Z,6Z,E,14E,18E)-Farnesylfarnesol6953

硅膠膜型™基因組DNA提純試劑盒次Solanesol1317茄尼醇

硅膠膜型™PCR產物純化及膠回收試劑盒次Methyl (9Z,11E)3-hydroxyoctadeca,11-dienoate98375
N-Acetyl-D-tryptophan  2280/1/5  中文名：N-乙酰基-D-色氨酸  分子式：C13H14N2O3    三0酸腺苷酶   英文名稱：   Adenosine iphosphate   規格：   48T/96T   英文縮寫：   ATP

Allyl cinnamate  1866-31-5  中文名：肉桂酸烯丙酯  分子式：C12H12O2    緊張素Ⅱ一型受體抗原   英文名稱：   Angiotensin 2 Receptor 1 Aigen   規格：   48T/96T   英文縮寫：   AT1R

2-Aminofluorene  153-78-6  中文名：2-氨基芴  分子式：C13H11N    抗緊張素‖受體︱型自身抗體   英文名稱：   Angiotensin 2 Receptor 1 Aoaibodies   規格：   48T/96T   英文縮寫：   AT1R-AA

(1R,2S)-1-Amino-2-indanol  136030-00-7  中文名：(1R,2S)-1-氨基-2-茚醇  分子式：C9H11NO    緊張素Ⅰ   英文名稱：   AngiotensinⅠ   規格：   48T/96T   英文縮寫：   ANGⅠ

Amitraz  33089-61-1  中文名：雙甲瞇  分子式：C19H23N3    三(羥甲基)基鹽酸鹽   100g
乙酸銨(分子生物學級)  Ammonium acetate  質量規格：>98%,分子生物學級 單核細胞趨化蛋白1(MCP-1/CCL2/MCAF)ELISA檢測試劑盒Monkeymonocytechemotacticprotein1/monocytechemotacticandactivatingfactor,MCP1/MCAFELISAkit 96T/48T

微晶纖維素(100 um)  Cellulose, Microcrystalline  質量規格：BR,100 um 單核細胞增生李斯特菌(Listeriamonocytogenes)鑒定16SrDNAPCR擴增檢測試劑盒20

乳糖；α-乳糖,一水  alpha-Lactose, monohydrate  質量規格：BR 單酸甘油脂脂解酶(monoacylglycerollipase)活性比色法定量檢測試劑盒20

氯化鈣二水  Calcium chloride, dihydrate  質量規格：>99%,BR 單線態氧氣清除(scavenging)活性比色法篩選試劑盒20

乙二醇  Ethylene glycol  質量規格：BR 單線態氧氣清除(scavenging)活性熒光篩選試劑盒20

硫酸鎂七水(分子生物學級)  Magnesium sulfate, heptahydrate  質量規格：>98%,分子生物 膽轉運功能檢測試劑盒20

糖化酶;葡萄糖淀粉酶  Glucozyme  質量規格：BR,10萬u/G 膽紅素(Bilirubin)定量檢測試劑盒50

聚乙二醇4000  PEG 4000  質量規格：>99%,BR 膽堿酯酶(CHE)定量檢測試劑盒50

無水氫二鉀  Potassium phosphate, dibasic, anhydrous  質量規格：>98%,BR 膽堿酯酶(CHE)活性比色法定量檢測試劑盒20

甲酰胺  Formamide  質量規格：>99%,BR 淡綠(LIGHTGREEN)復染試劑盒50
人角膜上皮細胞提取物說明書trans-4-Aminocyclohexanol  27489-62-9  中文名：  分子式：C6H13NO  度：98.0%  關鍵詞：    小鼠過氧化物酶體增殖物活化受體γ   英文名稱：   Mouse Peroxisome Proliferators Activated Receptor γ   規格：   48T/96T   英文縮寫：   PPARγ

Tranexamic acid  1197-18-8  中文名：凝血酸  分子式：C8H15NO2  度：98.0%      小鼠誘導型合成酶elisa試劑盒   小鼠誘導型合成酶試劑盒   規格型號：96T/48T   小鼠誘導型合成酶試劑盒，規格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產品別名：小鼠誘導型合成酶試劑盒、小鼠誘導型合成酶eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質期：6個月。

Torososide A  165689-32-7  中文名：  分子式：C38H32O15  度：%  關鍵詞：  植物提取物; 天然產物; 天然產物庫  小鼠內皮型合成酶elisa試劑盒   小鼠內皮型合成酶試劑盒   規格型號：96T/48T   小鼠內皮型合成酶試劑盒，規格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產品別名：小鼠內皮型合成酶試劑盒、小鼠內皮型合成酶eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質期：6個月。

Topiramate  97240-79-4  中文名：托吡酯  分子式：C12H21NO8S  度：98.0%  關鍵詞：    豚鼠神經肽Belisa試劑盒   豚鼠神經肽B試劑盒   規格型號：96T/48T   豚鼠神經肽B試劑盒，規格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產品別名：豚鼠神經肽B試劑盒、豚鼠神經肽Beisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質期：6個月。

Tolvaptan  150683-30-0  中文名：托伐普坦  分子式：C26H25ClN2O3  度：98.0%  關鍵詞：    小鼠游離脂肪酸elisa試劑盒   小鼠游離脂肪酸試劑盒   規格型號：96T/48T   小鼠游離脂肪酸試劑盒，規格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產品別名：小鼠游離脂肪酸試劑盒、小鼠游離脂肪酸eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質期：6個月。