人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞；NCI-H716 H716培養(yǎng)

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產(chǎn)品描述：
細(xì)胞名稱 人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞；NCI-H716 [H716]培養(yǎng)
形態(tài)特性上皮細(xì)胞

生長特性貼壁生長

特征特性從一位經(jīng)5-氟尿嘧啶治療的患者腹水中得到的細(xì)胞建立了這個細(xì)胞株。與其它結(jié)直腸癌細(xì)胞系不同，這株細(xì)胞有多巴脫羧酶，細(xì)胞質(zhì)中有核心致密的內(nèi)分泌型顆粒。這株細(xì)胞不表達(dá)TAG-72或CA19-9抗原，也不生成癌胚抗原（CEA）。

培養(yǎng)條件RPMI1640(w/oHepes)優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%

傳代方法消化3-5分鐘。1:2。3天內(nèi)可長滿。

傳代情況PN5

凍存條件*培養(yǎng)基+8%DMSO

支原體檢測陰性

STR

同工酶

染色體

冷凍保存細(xì)胞之方法：
人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞；NCI-H716 [H716]培養(yǎng)冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞；NCI-H716 [H716]培養(yǎng)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
*Anti-HRG-Beta/FITC熒光素標(biāo)記抗HRGβ抗體IgG規(guī)格：0.2ml

*Anti-HSL/FITC熒光素標(biāo)記荷爾蒙敏感脂肪酸抗體IgG規(guī)格：0.2ml

*Anti-Phospho-HSL(Ser552)/FITC熒光素標(biāo)記磷酸化荷爾蒙敏感脂肪酶抗體IgG規(guī)格：0.2ml

*Anti-Phospho-HSL(Ser563)/FITC熒光素標(biāo)記磷酸化荷爾蒙敏感脂肪酶抗體IgG規(guī)格：0.2ml

*Anti-Phospho-HSL(Ser565)/FITC熒光素標(biāo)記磷酸化荷爾蒙敏感脂肪酶抗體IgG規(guī)格：0.2ml

*Anti-Phospho-HSL(Ser660)/FITC熒光素標(biāo)記磷酸化荷爾蒙敏感脂肪酶抗體IgG規(guī)格：0.2ml

*Anti-HSP-20/FITC熒光素標(biāo)記熱休克蛋白-20抗體IgG規(guī)格：0.2ml

*Anti-HSP22/FITC熒光素標(biāo)記熱休克蛋白-22抗體IgG規(guī)格：0.2ml

*Anti-HSP-27/FITC熒光素標(biāo)記HSP-27蛋白抗體IgG規(guī)格：0.2ml

*Anti-HSP-47/FITC熒光素標(biāo)記熱休克蛋白-47蛋白抗體IgG規(guī)格：0.2ml
人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞；NCI-H716 [H716]培養(yǎng)*Anti-BrdU/FITC熒光素標(biāo)記溴脫氧尿苷抗體IgG規(guī)格：0.2ml

*Anti-SMARCA4/SNF2beta/FITC熒光素標(biāo)記抑癌基因SNF2β抗體IgG規(guī)格：0.2ml

*Anti-BRMS-1/FITC熒光素標(biāo)記癌轉(zhuǎn)移抑制基因1抗體IgG規(guī)格：0.2ml

*Anti-BTG2/TIS21/FITC熒光素標(biāo)記B細(xì)胞遷移基因2抗體IgG規(guī)格：0.2ml

*Anti-Brucella/FITC熒光素標(biāo)記抗布魯氏菌抗體IgG規(guī)格：0.2ml

*Anti-Brucella/HRP辣根過氧化物酶標(biāo)記抗布魯氏菌抗體IgG規(guī)格：0.2ml

*Anti-Brucella/Biotin生物素標(biāo)記抗布魯氏菌抗體IgG規(guī)格：0.2ml

*Anti-BSEP/FITC熒光素標(biāo)記膽汁酸鹽輸出泵蛋白抗體IgG規(guī)格：0.2ml

*Anti-BSP/FITC熒光素標(biāo)記骨涎蛋白抗體IgG規(guī)格：0.2ml

*GoatAnti-humanC3/FITC熒光素標(biāo)記羊抗人補(bǔ)體C3IgG規(guī)格：0.2ml
注意事項(xiàng)：
?1.一般客戶拿到人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞；NCI-H716 [H716]培養(yǎng)后，應(yīng)該注意什么？
客戶收到細(xì)胞先不開蓋，放在培養(yǎng)箱靜置若干小時后（看細(xì)胞密度而定）在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況，并對細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照（建議受收細(xì)胞時的培養(yǎng)基拍一張照片，觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況，顯微鏡下拍細(xì)胞100X，200X各一張），排除細(xì)胞本身污染的情況；收到細(xì)胞未開封，出現(xiàn)污染狀況我們負(fù)責(zé)免費(fèi)發(fā)送一株細(xì)胞。
收到細(xì)胞時如無異常情況，請?jiān)陲@微鏡下觀察細(xì)胞密度，如為貼壁細(xì)胞，未超過80%匯合度時，將培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)液吸出，留下10ml培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)；超過80%匯合度時，請按細(xì)胞培養(yǎng)條件傳代培養(yǎng)。如為懸浮細(xì)胞，吸出培養(yǎng)液、1000轉(zhuǎn)/分鐘離心2分鐘，吸出上清，管底細(xì)胞用新鮮培養(yǎng)基懸浮細(xì)胞后移回培養(yǎng)瓶。
細(xì)胞出現(xiàn)問題，不予以重發(fā)的情況有哪些？
（1）客戶造成細(xì)胞污染，不重發(fā)；
（2）客戶不正確操作致細(xì)胞狀態(tài)不好，不重發(fā)；
（3）非推薦細(xì)胞培養(yǎng)體系致的細(xì)胞狀態(tài)不好，不重發(fā)；
（4）細(xì)胞狀態(tài)不好，未提供細(xì)胞培養(yǎng)前3天照片的，不重發(fā)；
（5）細(xì)胞培養(yǎng)時經(jīng)其它處理的，不重發(fā)；
（6）細(xì)胞收到2天內(nèi)，未告知，不重發(fā)；
（7）視具體情況而定。