細胞培養操作規程: 一.培養基及培養凍存條件準備: 1)人肝癌細胞系;HCCIH03培養準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640:GIBCO,貨號21875-091),90%;優質胎牛血清,10%。 2)培養條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養箱濕度為70%-80%。 3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現用現配,液氮儲存。 二.細胞處理: 1)復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準備好的含有4mL培養基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養基的培養瓶中培養過夜。第二天換液并檢查細胞密度。 2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養。 對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法: 方法一:收集細胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。 我司常期代理ATCC Acris abcam cst Biorbyt santa Novus sigma lifespan NEB roche ABI R&D millipore BD Qiagen Cayman Jackson Life GeneTex Bio-Rad DSHB tocris peprotech 等品牌;部分產品現貨,超低比價,人肝癌細胞系;HCCIH03培養貨期短,價格優,售后齊全。點擊進入了解更多腫瘤細胞。 產品描述: 細胞名稱 人肝癌細胞系;HCCIH03培養 形態特性上皮樣 生長特性貼壁生長 特征特性該細胞屬保藏,其特征特性尚未公開。 培養條件MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)10%FBS 傳代方法1:3傳代,3-4天傳1次 傳代情況C5 凍存條件基礎培養基+5%DMSO+20%FBS 支原體檢測陰性 STR 同工酶 染色體
注意事項: ?1.一般客戶拿到人肝癌細胞系;HCCIH03培養后,應該注意什么? 客戶收到細胞先不開蓋,放在培養箱靜置若干小時后(看細胞密度而定)在倒置顯微鏡下觀察細胞生長情況,并對細胞進行不同倍數拍照(建議受收細胞時的培養基拍一張照片,觀察培養基的顏色和是否有漏液情況,顯微鏡下拍細胞100X,200X各一張),排除細胞本身污染的情況;收到細胞未開封,出現污染狀況我們負責免費發送一株細胞。 收到細胞時如無異常情況,請在顯微鏡下觀察細胞密度,如為貼壁細胞,未超過80%匯合度時,將培養瓶中培養液吸出,留下10ml培養液繼續培養;超過80%匯合度時,請按細胞培養條件傳代培養。如為懸浮細胞,吸出培養液、1000轉/分鐘離心2分鐘,吸出上清,管底細胞用新鮮培養基懸浮細胞后移回培養瓶。 細胞出現問題,不予以重發的情況有哪些? (1)客戶造成細胞污染,不重發; (2)客戶不正確操作致細胞狀態不好,不重發; (3)非推薦細胞培養體系致的細胞狀態不好,不重發; (4)細胞狀態不好,未提供細胞培養前3天照片的,不重發; (5)細胞培養時經其它處理的,不重發; (6)細胞收到2天內,未告知,不重發; (7)視具體情況而定。 *Anti-EAAT2/FITC熒光素標記抗膠質細胞谷氨酸運載蛋白2抗體IgG規格:0.2ml *Anti-EAAT3/FITC熒光素標記抗膠質細胞谷氨酸運載蛋白3抗體IgG規格:0.2ml *Anti-EAG1/FITC熒光素標記鉀離子通道蛋白EAG1抗體IgG規格:0.2ml *Anti-EBNA-3/FITC熒光素標記EB病毒核抗原-3抗體IgG規格:0.2ml *Anti-E-cadherin/FITC熒光素標記E-鈣粘附分子抗體IgG規格:0.2ml *Anti-ECE1/FITC熒光素標記內皮素轉化酶1抗體IgG規格:0.2ml *Anti-ECE2/FITC熒光素標記抗內皮素轉化酶2抗體IgG規格:0.2ml *Anti-ECG2/FITC熒光素標記食道癌相關基因抗體IgG規格:0.2ml *Anti-ECM1/FITC熒光素標記細胞外基質蛋白1抗體IgG規格:0.2ml *Anti-ECP/FITC熒光素標記抗嗜酸性粒細胞陽離子蛋白抗體IgG規格:0.2ml 人肝癌細胞系;HCCIH03培養*Anti-UCP-2線粒體脫偶連蛋白2抗體規格:0.2ml *Anti-UCP-3線粒體脫偶連蛋白3抗體規格:0.2ml *Anti-Uteroglobin子宮珠蛋白抗體規格:0.2ml *Anti-ULBP1/N2DL1UL16結合蛋白1蛋白抗體規格:0.2ml *Anti-ULBP2/N2DL2UL16結合蛋白2抗體規格:0.2ml *Anti-ULBP3/N2DL3UL16結合蛋白3抗體規格:0.2ml *Anti-USF-1等上游刺激因子1抗體規格:0.1ml *Anti-VPS18空泡分選蛋白18抗體規格:0.2ml *Anti-Ubiquitin/UBC/UBB泛素蛋白抗體規格:0.2ml *Anti-USP1泛素特異性蛋白酶1抗體規格:0.2ml 冷凍保存細胞之方法: 人肝癌細胞系;HCCIH03培養冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ (-20 ℃30 分鐘*) → -80 ℃16~18 小時(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 長期儲存。 冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下, 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時, 以防止冰晶過大,造成細胞大量死亡,亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,惟存活率稍微降低一些。 |