人肝癌亞力山大細(xì)胞；PLC/PRF/5培養(yǎng)

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產(chǎn)品描述：
細(xì)胞名稱 人肝癌亞力山大細(xì)胞；PLC/PRF/5培養(yǎng)
形態(tài)特性上皮細(xì)胞

生長特性貼壁生長

特征特性該細(xì)胞系分泌乙肝病毒表面抗原（HBsAg）。此細(xì)胞系原先被支原體污染，后用BM-cycline去除支原體。

培養(yǎng)條件MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%

傳代方法消化5-10分鐘。1:2。3-4天長滿。

傳代情況P(78+5)

凍存條件*培養(yǎng)基+8%DMSO

支原體檢測陰性

STRAmelogenin:X；CSF1PO:10；D13S317:11,12；D16S539:13；D18S51:17；D19S433:11,13；D21S11:30,33.2；D2S1338:19,22；D3S1358:15；D5S818:12；D7S820:9,11；D8S1179:13,16；FGA:19.2,25；TH01:8；TPOX:8；vWA:15,16

同工酶

染色體

冷凍保存細(xì)胞之方法：
人肝癌亞力山大細(xì)胞；PLC/PRF/5培養(yǎng)冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）人肝癌亞力山大細(xì)胞；PLC/PRF/5培養(yǎng)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
*Anti-CRMP2/Dpysl2(collapsinresponsemediatorprotein-2)/FITC熒光素標(biāo)記抗二氫嘧啶酶樣2抗體IgG規(guī)格：0.2ml

*Anti-Phospho-CRMP-2(Thr514)/FITC熒光素標(biāo)記兔抗人、大、小鼠磷酸化二氫嘧啶酶樣2抗體IgG規(guī)格：0.2ml

*Anti-CRP/Biotin生物素化C-反應(yīng)蛋白抗體IgG規(guī)格：0.2ml

*Anti-CRP/FITC熒光素標(biāo)記C-反應(yīng)蛋白抗體IgG規(guī)格：0.2ml

*Anti-CRP/HRP辣根過氧化物酶標(biāo)記鼠抗人C-反應(yīng)蛋白單克隆抗體IgG規(guī)格：0.2ml

*Anti-CRTAM/FITC熒光素標(biāo)記CRTAM抗體IgG規(guī)格：0.2ml

*Anti-C-SKI/FITC熒光素標(biāo)記抗C-SKI抗體IgG規(guī)格：0.2ml

*Anti-CSIG/FITC熒光素標(biāo)記細(xì)胞衰老抑制基因抗體IgG規(guī)格：0.2ml

*Anti-CSP/FITC熒光素標(biāo)記環(huán)子孢子蛋白(約氏瘧原蟲)抗體IgG規(guī)格：0.2ml

*Anti-CT/FITC熒光素標(biāo)記降鈣素抗體IgG規(guī)格：0.2ml
人肝癌亞力山大細(xì)胞；PLC/PRF/5培養(yǎng)*Anti-SYT3突觸結(jié)合蛋白3抗體規(guī)格：0.1ml

*Anti-T3*狀腺素T3抗體規(guī)格：0.2ml

*Anti-SynapsinI神經(jīng)突觸素1抗體規(guī)格：0.1ml

*Anti-phospho-SynapsinI(Ser553)磷酸化神經(jīng)突觸素1抗體規(guī)格：0.1ml

*Anti-phospho-SynapsinI(Ser9)磷酸化神經(jīng)突觸素1抗體規(guī)格：0.1ml

*Anti-SynapsinII神經(jīng)突觸素2抗體規(guī)格：0.2ml

*Anti-T3*狀腺素T3抗體規(guī)格：0.2ml

*Anti-TACR3速激肽受體3抗體規(guī)格：0.2ml

*Anti-TAK1轉(zhuǎn)化生長因子β活化激酶1規(guī)格：0.2ml

*Anti-Phospho-TAK1(Ser412)磷酸化轉(zhuǎn)化生長因子β活化激酶1規(guī)格：0.1ml
注意事項：
?1.一般客戶拿到人肝癌亞力山大細(xì)胞；PLC/PRF/5培養(yǎng)后，應(yīng)該注意什么？
客戶收到細(xì)胞先不開蓋，放在培養(yǎng)箱靜置若干小時后（看細(xì)胞密度而定）在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況，并對細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照（建議受收細(xì)胞時的培養(yǎng)基拍一張照片，觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況，顯微鏡下拍細(xì)胞100X，200X各一張），排除細(xì)胞本身污染的情況；收到細(xì)胞未開封，出現(xiàn)污染狀況我們負(fù)責(zé)免費發(fā)送一株細(xì)胞。
收到細(xì)胞時如無異常情況，請在顯微鏡下觀察細(xì)胞密度，如為貼壁細(xì)胞，未超過80%匯合度時，將培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)液吸出，留下10ml培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)；超過80%匯合度時，請按細(xì)胞培養(yǎng)條件傳代培養(yǎng)。如為懸浮細(xì)胞，吸出培養(yǎng)液、1000轉(zhuǎn)/分鐘離心2分鐘，吸出上清，管底細(xì)胞用新鮮培養(yǎng)基懸浮細(xì)胞后移回培養(yǎng)瓶。
細(xì)胞出現(xiàn)問題，不予以重發(fā)的情況有哪些？
（1）客戶造成細(xì)胞污染，不重發(fā)；
（2）客戶不正確操作致細(xì)胞狀態(tài)不好，不重發(fā)；
（3）非推薦細(xì)胞培養(yǎng)體系致的細(xì)胞狀態(tài)不好，不重發(fā)；
（4）細(xì)胞狀態(tài)不好，未提供細(xì)胞培養(yǎng)前3天照片的，不重發(fā)；
（5）細(xì)胞培養(yǎng)時經(jīng)其它處理的，不重發(fā)；
（6）細(xì)胞收到2天內(nèi)，未告知，不重發(fā)；
（7）視具體情況而定。