人惡性黑色素瘤細(xì)胞；A-375 A375說(shuō)明書

細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）人惡性黑色素瘤細(xì)胞；A-375 [A375]說(shuō)明書準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號(hào)21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
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產(chǎn)品描述：
細(xì)胞名稱 人惡性黑色素瘤細(xì)胞；A-375 [A375]說(shuō)明書
形態(tài)特性上皮細(xì)胞

生長(zhǎng)特性貼壁生長(zhǎng)

特征特性A375源自一位54歲女性，是D.J.Giard等人建立的一系列細(xì)胞株中的一株。它在抗胸腺細(xì)胞球蛋白、血清處理的NIH瑞士小鼠中

成類似于惡性黑素瘤的快速增長(zhǎng)的皮下腫瘤，在普通成纖維細(xì)胞和瓊脂上

成克隆。

培養(yǎng)條件DMEM-H:Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%

傳代方法消化3-5分鐘。1:2。3天內(nèi)可長(zhǎng)滿。

傳代情況P(166+5)

凍存條件*培養(yǎng)基+8%DMSO

支原體檢測(cè)陰性

STRAmelogenin:X；CSF1PO:11,12；D13S317:11,14；D16S539:9；D18S51:12,17；D19S433:13,14.2；D21S11:29,30；D2S1338:16,24；D3S1358:15,17；D5S818:12；D7S820:9；D8S1179:11,14；FGA:23；TH01:8；TPOX:8,10；vWA:16,17

同工酶

染色體

注意事項(xiàng)：
?1.一般客戶拿到人惡性黑色素瘤細(xì)胞；A-375 [A375]說(shuō)明書后，應(yīng)該注意什么？
客戶收到細(xì)胞先不開(kāi)蓋，放在培養(yǎng)箱靜置若干小時(shí)后（看細(xì)胞密度而定）在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況，并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照（建議受收細(xì)胞時(shí)的培養(yǎng)基拍一張照片，觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況，顯微鏡下拍細(xì)胞100X，200X各一張），排除細(xì)胞本身污染的情況；收到細(xì)胞未開(kāi)封，出現(xiàn)污染狀況我們負(fù)責(zé)免費(fèi)發(fā)送一株細(xì)胞。
收到細(xì)胞時(shí)如無(wú)異常情況，請(qǐng)?jiān)陲@微鏡下觀察細(xì)胞密度，如為貼壁細(xì)胞，未超過(guò)80%匯合度時(shí)，將培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)液吸出，留下10ml培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)；超過(guò)80%匯合度時(shí)，請(qǐng)按細(xì)胞培養(yǎng)條件傳代培養(yǎng)。如為懸浮細(xì)胞，吸出培養(yǎng)液、1000轉(zhuǎn)/分鐘離心2分鐘，吸出上清，管底細(xì)胞用新鮮培養(yǎng)基懸浮細(xì)胞后移回培養(yǎng)瓶。
細(xì)胞出現(xiàn)問(wèn)題，不予以重發(fā)的情況有哪些？
（1）客戶造成細(xì)胞污染，不重發(fā)；
（2）客戶不正確操作致細(xì)胞狀態(tài)不好，不重發(fā)；
（3）非推薦細(xì)胞培養(yǎng)體系致的細(xì)胞狀態(tài)不好，不重發(fā)；
（4）細(xì)胞狀態(tài)不好，未提供細(xì)胞培養(yǎng)前3天照片的，不重發(fā)；
（5）細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)經(jīng)其它處理的，不重發(fā)；
（6）細(xì)胞收到2天內(nèi)，未告知，不重發(fā)；
（7）視具體情況而定。
*Anti-CD44v5/FITC熒光素標(biāo)記兔抗人、大、小鼠CD44V5抗體IgG規(guī)格：0.2ml

*Anti-CD44V6/CD44/HCAM/FITC熒光素標(biāo)記抗CD44抗體IgG規(guī)格：0.2ml

*Anti-CD44v7/FITC熒光素標(biāo)記兔抗人、大、小鼠CD44V7抗體IgG規(guī)格：0.2ml

*Anti-CD45(LCA)/FITC熒光素標(biāo)記CD45(白細(xì)胞共同抗原)抗體規(guī)格：0.2ml

*Anti-CD45/RBITC紅色熒光素羅丹明標(biāo)記CD45抗體IgG規(guī)格：0.2ml

*Anti-CD45RO/FITC熒光素標(biāo)記CD45RO抗體IgG規(guī)格：0.2ml

*Anti-CD46/MCP/FITC熒光素標(biāo)記膜輔蛋白/內(nèi)源性輔助因子活性蛋白抗體(人)IgG規(guī)格：0.2ml

*Anti-CD46/MCP/FITC熒光素標(biāo)記膜輔蛋白/內(nèi)源性輔助因子活性蛋白抗體IgG規(guī)格：0.2ml

*Anti-CA125/Biotin生物素標(biāo)記兔抗人CA125抗原抗體IgG規(guī)格：0.2ml

*Anti-CD48/SLAMF2/FITC熒光素標(biāo)記CD48抗體IgG規(guī)格：0.2ml
人惡性黑色素瘤細(xì)胞；A-375 [A375]說(shuō)明書*Anti-RELN/Reelin絡(luò)絲蛋白抗體規(guī)格：0.2ml

*Anti-Rbms3抑癌基因Rbms3抗體規(guī)格：0.2ml

*Anti-RET/Cret指狀蛋白R(shí)ET抗體規(guī)格：0.2ml

*Anti-Phospho-Ret(Tyr905)磷酸化指狀蛋白R(shí)ET抗體規(guī)格：0.1ml

*Anti-Phospho-Ret(Tyr1062)磷酸化指狀蛋白R(shí)ET抗體規(guī)格：0.1ml

*Anti-Resistin(rat,mouse)抵抗素抗體（大鼠，小鼠）規(guī)格：0.1ml

*Anti-Resistin(human,dog)抵抗素抗體（人，犬）規(guī)格：0.1ml

*Anti-RELMa抵抗素樣分子α抗體規(guī)格：0.2ml

*Anti-RelB核轉(zhuǎn)錄因子NFKB-RelB蛋白抗體規(guī)格：0.2ml

*Anti-Phospho-RelB(Ser552)磷酸化核轉(zhuǎn)錄因子NFKB-RelB蛋白抗體規(guī)格：0.1ml
冷凍保存細(xì)胞之方法：
人惡性黑色素瘤細(xì)胞；A-375 [A375]說(shuō)明書冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長(zhǎng)期儲(chǔ)存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長(zhǎng)期儲(chǔ)存。*-20 ℃不可超過(guò)1 小時(shí)， 以防止冰晶過(guò)大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過(guò)此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。