人子宮頸表皮癌細(xì)胞；ME-180培養(yǎng)

冷凍保存細(xì)胞之方法：
人子宮頸表皮癌細(xì)胞；ME-180培養(yǎng)冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲(chǔ)存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲(chǔ)存。*-20 ℃不可超過1 小時(shí)， 以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
產(chǎn)品描述：
細(xì)胞名稱 人子宮頸表皮癌細(xì)胞；ME-180培養(yǎng)
形態(tài)特性上皮細(xì)胞

生長特性貼壁生長

特征特性這株細(xì)胞來源于一個(gè)細(xì)胞集落不規(guī)則沒有顯著角質(zhì)化的侵染性鱗狀細(xì)胞癌。單層培養(yǎng)的細(xì)胞間可以觀察到帶狀連接，也注意到有細(xì)胞質(zhì)張力絲。1970年發(fā)現(xiàn)支原體污染并去除。腫瘤壞死因子(TNF)α抑制ME-180的生長。這株細(xì)胞含有人瘤病毒(HPV)DNA，與HPV-39的同源性高于HPV-18。

培養(yǎng)條件McCoy's5AMedia(ModifiedwithTricine)優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%

傳代方法消化3-5分鐘。1:2。3天內(nèi)可長滿。

傳代情況P(126+5)

凍存條件*培養(yǎng)基+8%DMSO

支原體檢測陰性

STRAmelogenin:X；CSF1PO:11；D13S317:11,13；D16S539:12,13；D18S51:12；D19S433:13,15.2；D21S11:30,31；D2S1338:18；D3S1358:16；D5S818:12；D7S820:9,10；D8S1179:14；FGA:23；TH01:8,9.3；TPOX:8,10；vWA:15,17

同工酶

染色體

細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）人子宮頸表皮癌細(xì)胞；ME-180培養(yǎng)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號(hào)21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
注意事項(xiàng)：
?1.一般客戶拿到人子宮頸表皮癌細(xì)胞；ME-180培養(yǎng)后，應(yīng)該注意什么？
客戶收到細(xì)胞先不開蓋，放在培養(yǎng)箱靜置若干小時(shí)后（看細(xì)胞密度而定）在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況，并對細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照（建議受收細(xì)胞時(shí)的培養(yǎng)基拍一張照片，觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況，顯微鏡下拍細(xì)胞100X，200X各一張），排除細(xì)胞本身污染的情況；收到細(xì)胞未開封，出現(xiàn)污染狀況我們負(fù)責(zé)免費(fèi)發(fā)送一株細(xì)胞。
收到細(xì)胞時(shí)如無異常情況，請?jiān)陲@微鏡下觀察細(xì)胞密度，如為貼壁細(xì)胞，未超過80%匯合度時(shí)，將培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)液吸出，留下10ml培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)；超過80%匯合度時(shí)，請按細(xì)胞培養(yǎng)條件傳代培養(yǎng)。如為懸浮細(xì)胞，吸出培養(yǎng)液、1000轉(zhuǎn)/分鐘離心2分鐘，吸出上清，管底細(xì)胞用新鮮培養(yǎng)基懸浮細(xì)胞后移回培養(yǎng)瓶。
細(xì)胞出現(xiàn)問題，不予以重發(fā)的情況有哪些？
（1）客戶造成細(xì)胞污染，不重發(fā)；
（2）客戶不正確操作致細(xì)胞狀態(tài)不好，不重發(fā)；
（3）非推薦細(xì)胞培養(yǎng)體系致的細(xì)胞狀態(tài)不好，不重發(fā)；
（4）細(xì)胞狀態(tài)不好，未提供細(xì)胞培養(yǎng)前3天照片的，不重發(fā)；
（5）細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)經(jīng)其它處理的，不重發(fā)；
（6）細(xì)胞收到2天內(nèi)，未告知，不重發(fā)；
（7）視具體情況而定。
*Anti-CaMK2a/FITC熒光素標(biāo)記鈣/鈣調(diào)素依賴蛋白激酶2α抗體IgG規(guī)格：0.2ml

*Anti-CaMK2b/FITC熒光素標(biāo)記鈣/鈣調(diào)素依賴蛋白激酶2b抗體IgG規(guī)格：0.2ml

*Anti-CANX/FITC熒光素標(biāo)記抗鈣連蛋白抗體IgG規(guī)格：0.2ml

*Anti-ISR-Alpha/RBITC紅色熒光素羅丹明標(biāo)記(RBITC)胰島素受體-α抗體IgG(標(biāo)記抗體)規(guī)格：0.2ml

*Anti-CAP2/FITC熒光素標(biāo)記環(huán)化酶相關(guān)蛋白CAP-2抗體IgG規(guī)格：0.2ml

*Anti-Cap43/NDRG1/FITC熒光素標(biāo)記分化相關(guān)基因Cap43抗體IgG規(guī)格：0.2ml

*Anti-CAS/FITC熒光素標(biāo)記細(xì)胞凋亡敏感性基因抗體IgG規(guī)格：0.2ml

*Anti-Casein/FITC熒光素標(biāo)記抗牛酪蛋白抗體IgG規(guī)格：0.2ml

*Anti-Caspase-1/FITC熒光素標(biāo)記天冬氨酸-胱氨酸特異性蛋白酶家族抗體IgG規(guī)格：0.2ml

*Anti-Caspase-3/RBITC紅色熒光素羅丹明標(biāo)記(RBITC)Caspase-3蛋白抗體(標(biāo)記抗體)規(guī)格：0.2ml
人子宮頸表皮癌細(xì)胞；ME-180培養(yǎng)*Anti-PLCG1/PLCgamma1磷酯酶Cγ1抗體規(guī)格：0.2ml

*Anti-Phospho-PLCgamma1（Tyr771）磷酸化磷酯酶Cγ1抗體規(guī)格：0.1ml

*Anti-Phospho-PLCgamma1（Ser1248）磷酸化磷酯酶Cγ1抗體規(guī)格：0.1ml

*Anti-Phospho-PLCgamma1（Tyr783）磷酸化磷酯酶Cγ1抗體規(guī)格：0.1ml

*Anti-PKCgamma/SCA14蛋白激酶C亞型G抗體規(guī)格：0.2ml

*Anti-Phospho-PKCgamma(Thr514)磷酸化蛋白激酶C亞型G抗體規(guī)格：0.1ml

*Anti-Phospho-PKCgamma(Thr674)磷酸化蛋白激酶C亞型G抗體規(guī)格：0.1ml

*Anti-PKCdelta蛋白激酶C亞性D型抗體規(guī)格：0.2ml

*Anti-phospho-PKCdelta(Tyr52)磷酸化蛋白激酶C亞性D型抗體規(guī)格：0.1ml

*Anti-phospho-PKCdelta(Thr505)磷酸化蛋白激酶C亞性D型抗體規(guī)格：0.1ml
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