人高轉移肝癌細胞；HCCLM3培養

細胞培養操作規程：
一．培養基及培養凍存條件準備：
1）人高轉移肝癌細胞；HCCLM3培養準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優質胎牛血清，10%。
2）培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配，液氮儲存。
二．細胞處理：
1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養基的培養瓶中培養過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。
對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
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產品描述：
細胞名稱 人高轉移肝癌細胞；HCCLM3培養
形態特性上皮細胞樣；胞質內有顆粒

生長特性貼壁生長

特征特性用人肝癌細胞株MHCC97-H接種裸鼠，進行3次肺轉移篩選，取肺轉移瘤建成皮下接種后高度自發性肺轉移的肝癌細胞系。

培養條件

傳代方法

傳代情況PN

凍存條件基礎培養基+5%DMSO+20%FBS

支原體檢測陰性

STR

同工酶

染色體

注意事項：
?1.一般客戶拿到人高轉移肝癌細胞；HCCLM3培養后，應該注意什么？
客戶收到細胞先不開蓋，放在培養箱靜置若干小時后（看細胞密度而定）在倒置顯微鏡下觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數拍照（建議受收細胞時的培養基拍一張照片，觀察培養基的顏色和是否有漏液情況，顯微鏡下拍細胞100X，200X各一張），排除細胞本身污染的情況；收到細胞未開封，出現污染狀況我們負責免費發送一株細胞。
收到細胞時如無異常情況，請在顯微鏡下觀察細胞密度，如為貼壁細胞，未超過80%匯合度時，將培養瓶中培養液吸出，留下10ml培養液繼續培養；超過80%匯合度時，請按細胞培養條件傳代培養。如為懸浮細胞，吸出培養液、1000轉/分鐘離心2分鐘，吸出上清，管底細胞用新鮮培養基懸浮細胞后移回培養瓶。
細胞出現問題，不予以重發的情況有哪些？
（1）客戶造成細胞污染，不重發；
（2）客戶不正確操作致細胞狀態不好，不重發；
（3）非推薦細胞培養體系致的細胞狀態不好，不重發；
（4）細胞狀態不好，未提供細胞培養前3天照片的，不重發；
（5）細胞培養時經其它處理的，不重發；
（6）細胞收到2天內，未告知，不重發；
（7）視具體情況而定。
*Anti-Phospho-AcetylCoACarboxylase(Ser79)/FITC熒光素標記兔抗人、大、小鼠、猴、牛磷酸化乙酰輔酶A羧化酶抗體IgG規格：0.2ml

*Anti-AchE/FITC熒光素標記乙酰膽堿酶抗體IgG規格：0.2ml

*Anti-CHRNA2/FITC熒光素標記煙堿型乙酰膽堿受體A2(神經型)抗體IgG規格：0.2ml

*Anti-Beta-Actin/Gold金標記β-肌動蛋白抗體IgG規格：0.2ml

*Anti-AcinusL/S/FITC熒光素標記腺泡AcinusL/S抗體IgG規格：0.2ml

*Anti-Acinus(phosphoS1180)/FITC熒光素標記腺泡磷酸化Acinus抗體IgG規格：0.2ml

*Anti-Ack1/FITC熒光素標記Ack1抗體IgG規格：0.2ml

*Anti-Ack1(Phospho-Tyr284)/FITC熒光素標記兔抗人、大、小鼠磷酸化Ack1抗體IgG規格：0.2ml

*Anti-Phospho-Ack1(Tyr857/858)/FITC熒光素標記兔抗人、小鼠磷酸化Ack1抗體IgG規格：0.2ml

*Anti-Phospho-Ack1(Tyr326)/FITC熒光素標記兔抗人、大、小鼠磷酸化Ack1抗體IgG規格：0.2ml
人高轉移肝癌細胞；HCCLM3培養*Anti-Phospho-NF-κB2p100(Ser866/870)細胞核因子/k基因結合核因子p100抗體規格：0.1ml

*Anti-NFKBp65細胞核因子/k基因結合核因子抗體規格：0.1ml

*Anti-Phospho-NFKBp65(Ser276)磷酸化細胞核因子NF-κBp65抗體規格：0.1ml

*Anti-Phospho-NFKBp65(Ser468)磷酸化細胞核因子NF-κBp65抗體規格：0.1ml

*Anti-phospho-NFKBp65(Ser536)磷酸化細胞核因子抗體規格：0.1ml

*Anti-NF-66α-中連蛋白抗體規格：0.2ml

*Anti-NF-L/68kDaneurofilament低分子量神經絲蛋白抗體規格：0.2ml

*Anti-NF-M中分子量神經絲蛋白抗體規格：0.1ml

*Anti-NGAL/Lipocalin2脂質運載蛋白抗體規格：0.2ml

*Anti-NF-KappaBp105細胞核因子p50/k基因結合核因子抗體規格：0.1ml
冷凍保存細胞之方法：
人高轉移肝癌細胞；HCCLM3培養冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。