人結腸組織提取物培養(yǎng)

人結腸組織提取物【Colon: Normal Human Colon Derivatives】

結腸圍繞在小腸周圍，始于盲腸終于直腸，分為升結腸、橫結腸、降結腸和乙狀結腸四部分。公司科技提供來自新鮮或冷凍人結腸組織中高質量的總RNA，PCR準備的第一條cDNA鏈，蛋白質及其亞組分。這些臨床定義的正常人體組織標本采集自各地方醫(yī)院，采集工作根據(jù)IRB和HIPAA批準的方案進行。所有的產品在發(fā)貨之前均經過嚴格的QA/QC流程以確保其質量。這些產品可以直接用于基因克隆，表達圖譜分析以及各種分子生物學實驗的研究。

總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進行純化。生物科技提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結果等。
cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA第一鏈，以50ul總反應體系進行逆轉錄，體系中包括MMLV反轉錄酶和隨機引物以及10mg總RNA。68℃反應10min 后終止RT反應。利用1x RT Buffer 運輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應。所有cDNA產品在訂單發(fā)貨之前都經過了嚴格的QA/QC分析，保證了產品的質量。
蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人關節(jié)軟骨組織裂解液，離心去除組織碎片，通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。

 實驗要點及說明：

1．本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細胞培養(yǎng)，懸浮細胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應該為優(yōu)質玻璃，并經過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕；
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率；
5．如果細胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

操作要點：

1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內，再逐步轉移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內*解凍，使細胞能盡快通過易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內，將管內細胞轉移至準備好的離心管內，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉移至離心管內。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細胞懸液。
5）將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內，補加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內培養(yǎng)。
6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經過2~3次傳代，細胞活力恢復后才能進行后續(xù)的實驗。

八連管光學蓋1條/包Bis[4-(dimethylamino)phenyl]methane11雙[4-(二甲氨基)苯基]甲烷

玻璃三角瓶 帶擾流擋板2ml/0ml/00ml4,4'-Bis(chloromethyl)biphenyl1664,4'-雙(氯甲基)

玻片鑷子把2,2-Bis(hydroxymethyl)butyric acid09722,2-二羥甲基丁酸

不銹鋼酒精燈0ml3',6'-Bis(diethylamino)-(4-nitrophenyl)spiro[isoindole,9'-xanthene]-one2919993',6'-雙(二乙氨基)-(4-基)螺[異吲哚,9'-氧雜蒽]-酮

不銹鋼涂布棒1,3-Bis(4,5-dihydro-oxazolyl)benzene351,3-雙(4,5-二氫-惡唑)苯
Ethyl 2-(4-hydroxyphenyl)-4-methylthiazole-5-carboxylate  中文名：  分子式：C13H13NO3S    豬可溶性細胞粘附分子1(sVCAM-1)ELISAKit  

Ethyl 2-(3-formyl-4-hydroxyphenyl)-4-methylthiazole-5-carboxylate  中文名：  分子式：C14H13NO4S    豬巨噬細胞炎性蛋白1α(MIP-1α/CCL3)ELISAKit               

Ethyl 2-(3-cyano-4-isobutoxyphenyl)-4-methyl-5-thiazolecarboxylate  中文名：  分子式：C18H20N2O3S    豬球蛋白Gelisa試劑盒   豬球蛋白G試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   豬球蛋白G試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產品別名：豬球蛋白G試劑盒、豬球蛋白Geisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質期：6個月。

Ethyl 2-(3-cyano-4-hydroxyphenyl)-4-methyl-1,3-thiazole-5-carboxylate  中文名：  分子式：C14H12N2O3S    豬球蛋白Eelisa試劑盒   豬球蛋白E試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   豬球蛋白E試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產品別名：豬球蛋白E試劑盒、豬球蛋白Eeisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質期：6個月。

Ethyl 2-(((2'-cyano-[1,1'-biphenyl]-4-yl)methyl)amino)-3-nitrobenzoate  中文名：  分子式：C23H19N3O4    豬流行性腹瀉病毒抗體elisa試劑盒   豬流行性腹瀉病毒抗體試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   豬流行性腹瀉病毒抗體試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產品別名：豬流行性腹瀉病毒抗體試劑盒、豬流行性腹瀉病毒抗體eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質期：6個月。
神經肽Y（2-36），人，大鼠  Neuropeptide Y (2-36) (human,rat)  質量規(guī)格：>95%,BR 小鼠戊糖素(Peosidine)ELISA試劑盒 ，英文名： Peosidine ELISA Kit

神經肽Y（22-36）  Neuropeptide Y (22-36)  質量規(guī)格：>95%,BR 小鼠硒蛋白M(SELM)ELISA試劑盒 ，英文名： SELM ELISA Kit

神經肽Y（3-36），豬  Neuropeptide Y (3-36)(porcine)  質量規(guī)格：>95%,BR 小鼠硒蛋白P1(SEPP1)ELISA試劑盒 ，英文名： SEPP1 ELISA Kit

骨鈣素（7-19），人  Osteocalcin (7-19) (human)  質量規(guī)格：>95%,BR 小鼠細胞程序性死亡蛋白1配體1(PDCD1LG1)ELISA試劑盒 ，英文名： PDCD1LG1 ELISA Kit

成骨生長肽  Osteogenic Growth Peptide  質量規(guī)格：>95%,BR 小鼠細胞毒性T細胞相關抗原4(CTLA-4/CD152)ELISA試劑盒 ，英文名： CTLA-4/CD152 ELISA Kit

骨抑制素，人  Osteostatin (human)  質量規(guī)格：>95%,BR 小鼠細胞分裂周期因子25(CDC25)ELISA試劑盒 ，英文名： CDC25 ELISA Kit

骨抑制素（1-5）酰胺，人，牛，狗，大鼠，小鼠，兔，馬  Osteostatin (1-5) amide(human, bovine, dog, horse,mouse, rabbit, rat)  質量規(guī)格：>95%,BR 小鼠細胞骨架活性調節(jié)蛋白(ARC)ELISA試劑盒 ，英文名： ARC ELISA Kit

骨抑制素酰胺，人  Osteostatin amide (human)  質量規(guī)格：>95%,BR 小鼠細胞間粘附分子1(ICAM1)ELISA試劑盒 ，英文名： ICAM1 ELISA Kit

p60 v-結構域（137-157）  p60 v-src (137-157)  質量規(guī)格：>95%,BR 小鼠細胞間粘附分子1(ICAM-1/CD54)ELISA檢測試劑盒Mouseiercellularadhesionmolecule1,ICAM-1ELISAKIT 96T/48T

p60 C-結構域底物ⅠLys(生物素)  p60c-src Substrate ILys(Biotin)  質量規(guī)格：>95%,BR 小鼠細胞間粘附分子1(ICAM-1/CD54)ELISA試劑盒 ，英文名： ICAM-1/CD54 ELISA Kit
人結腸組織提取物培養(yǎng)兔補體蛋白3elisa試劑盒   兔補體蛋白3試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   兔補體蛋白3試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產品別名：兔補體蛋白3試劑盒、兔補體蛋白3 elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質期：6個月。  4-Bromomethyl-2-cyanobiphenyl  114772-54-2  中文名：  分子式：C14H10BrN  度：98.0%  關鍵詞： 

兔補體蛋白3(C3)ELISAKit     5-Chloro-4-methoxy-2-oxo-1,2-dihydropyridine-3-carbonitrile  中文名：  分子式：C7H5ClN2O2  度：98.0%

兔半胱酸蛋白酶抑制劑elisa試劑盒   兔半胱酸蛋白酶抑制劑試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   兔半胱酸蛋白酶抑制劑試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產品別名：兔半胱酸蛋白酶抑制劑試劑盒、兔半胱酸蛋白酶抑制劑elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質期：6個月。  4-Bromomethyl-2-cyanobiphenyl  114772-54-2  中文名：  分子式：C14H10BrN 

兔半胱酸蛋白酶抑制劑C   英文名稱：   Rabbit Cystatin C   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   CSTC  4-Oxododecanedioic acid  中文名：  分子式：C12H20O5 

兔半胱酸蛋白酶抑制劑/胱抑素C(Cys-C)ELISA試劑盒     5-(1-Piperazinyl)benzofuran-2-carboxamide  183288-46-2  中文名：  分子式：C13H15N3O2

運輸和保存：
視天氣狀況和運輸距離遠近，公司與客戶協(xié)商后選擇下述方式中的一種進行。
1)1mL凍存細胞懸液裝于1.8ml的凍存管中，置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進行運輸；收到細胞后請盡快解凍復蘇細胞進行培養(yǎng)，如無法立刻進行復蘇操作，凍存細胞可在-80℃的條件下保存1個月。
2)T-25培養(yǎng)瓶充滿*培養(yǎng)基后進行常溫運輸；收到細胞后請鏡下觀察細胞生長狀態(tài)，如鋪瓶率超過85%請立即進行傳代操作，如懸浮的細胞較多，請將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細胞能夠再次貼壁。
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。