人結腸組織提取物培養

人結腸組織提取物【Colon: Normal Human Colon Derivatives】

結腸圍繞在小腸周圍，始于盲腸終于直腸，分為升結腸、橫結腸、降結腸和乙狀結腸四部分。公司科技提供來自新鮮或冷凍人結腸組織中高質量的總RNA，PCR準備的第一條cDNA鏈，蛋白質及其亞組分。這些臨床定義的正常人體組織標本采集自各地方醫院，采集工作根據IRB和HIPAA批準的方案進行。所有的產品在發貨之前均經過嚴格的QA/QC流程以確保其質量。這些產品可以直接用于基因克隆，表達圖譜分析以及各種分子生物學實驗的研究。

總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進行純化。生物科技提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結果等。
cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA第一鏈，以50ul總反應體系進行逆轉錄，體系中包括MMLV反轉錄酶和隨機引物以及10mg總RNA。68℃反應10min 后終止RT反應。利用1x RT Buffer 運輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應。所有cDNA產品在訂單發貨之前都經過了嚴格的QA/QC分析，保證了產品的質量。
蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人關節軟骨組織裂解液，離心去除組織碎片，通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。

 實驗要點及說明：

1．本方法適用于貼壁細胞培養，而不適用于懸浮細胞培養，懸浮細胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應該為優質玻璃，并經過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕；
4．如果需要更多生長狀態一致的細胞，可以使用較大的培養皿，但不宜過大，以避免培養液的浪費和增加污染機率；
5．如果細胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

操作要點：

1）將培養基在37℃水浴鍋預熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預熱培養基。
2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內，再逐步轉移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內*解凍，使細胞能盡快通過易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內，將管內細胞轉移至準備好的離心管內，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產生氣泡。用新鮮培養基洗管壁2次，均轉移至離心管內。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養基，吹打制成細胞懸液。
5）將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內，補加適量的培養基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內培養。
6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養基以去除死細胞。繼續培養，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經過2~3次傳代，細胞活力恢復后才能進行后續的實驗。

八連管光學蓋1條/包Bis[4-(dimethylamino)phenyl]methane11雙[4-(二甲氨基)苯基]甲烷

玻璃三角瓶 帶擾流擋板2ml/0ml/00ml4,4'-Bis(chloromethyl)biphenyl1664,4'-雙(氯甲基)

玻片鑷子把2,2-Bis(hydroxymethyl)butyric acid09722,2-二羥甲基丁酸

不銹鋼酒精燈0ml3',6'-Bis(diethylamino)-(4-nitrophenyl)spiro[isoindole,9'-xanthene]-one2919993',6'-雙(二乙氨基)-(4-基)螺[異吲哚,9'-氧雜蒽]-酮

不銹鋼涂布棒1,3-Bis(4,5-dihydro-oxazolyl)benzene351,3-雙(4,5-二氫-惡唑)苯
Ethyl 2-(4-hydroxyphenyl)-4-methylthiazole-5-carboxylate  中文名：  分子式：C13H13NO3S    豬可溶性細胞粘附分子1(sVCAM-1)ELISAKit  

Ethyl 2-(3-formyl-4-hydroxyphenyl)-4-methylthiazole-5-carboxylate  中文名：  分子式：C14H13NO4S    豬巨噬細胞炎性蛋白1α(MIP-1α/CCL3)ELISAKit               

Ethyl 2-(3-cyano-4-isobutoxyphenyl)-4-methyl-5-thiazolecarboxylate  中文名：  分子式：C18H20N2O3S    豬球蛋白Gelisa試劑盒   豬球蛋白G試劑盒   規格型號：96T/48T   豬球蛋白G試劑盒，規格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產品別名：豬球蛋白G試劑盒、豬球蛋白Geisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質期：6個月。

Ethyl 2-(3-cyano-4-hydroxyphenyl)-4-methyl-1,3-thiazole-5-carboxylate  中文名：  分子式：C14H12N2O3S    豬球蛋白Eelisa試劑盒   豬球蛋白E試劑盒   規格型號：96T/48T   豬球蛋白E試劑盒，規格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產品別名：豬球蛋白E試劑盒、豬球蛋白Eeisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質期：6個月。

Ethyl 2-(((2'-cyano-[1,1'-biphenyl]-4-yl)methyl)amino)-3-nitrobenzoate  中文名：  分子式：C23H19N3O4    豬流行性腹瀉病毒抗體elisa試劑盒   豬流行性腹瀉病毒抗體試劑盒   規格型號：96T/48T   豬流行性腹瀉病毒抗體試劑盒，規格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產品別名：豬流行性腹瀉病毒抗體試劑盒、豬流行性腹瀉病毒抗體eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質期：6個月。
神經肽Y（2-36），人，大鼠  Neuropeptide Y (2-36) (human,rat)  質量規格：>95%,BR 小鼠戊糖素(Peosidine)ELISA試劑盒 ，英文名： Peosidine ELISA Kit

神經肽Y（22-36）  Neuropeptide Y (22-36)  質量規格：>95%,BR 小鼠硒蛋白M(SELM)ELISA試劑盒 ，英文名： SELM ELISA Kit

神經肽Y（3-36），豬  Neuropeptide Y (3-36)(porcine)  質量規格：>95%,BR 小鼠硒蛋白P1(SEPP1)ELISA試劑盒 ，英文名： SEPP1 ELISA Kit

骨鈣素（7-19），人  Osteocalcin (7-19) (human)  質量規格：>95%,BR 小鼠細胞程序性死亡蛋白1配體1(PDCD1LG1)ELISA試劑盒 ，英文名： PDCD1LG1 ELISA Kit

成骨生長肽  Osteogenic Growth Peptide  質量規格：>95%,BR 小鼠細胞毒性T細胞相關抗原4(CTLA-4/CD152)ELISA試劑盒 ，英文名： CTLA-4/CD152 ELISA Kit

骨抑制素，人  Osteostatin (human)  質量規格：>95%,BR 小鼠細胞分裂周期因子25(CDC25)ELISA試劑盒 ，英文名： CDC25 ELISA Kit

骨抑制素（1-5）酰胺，人，牛，狗，大鼠，小鼠，兔，馬  Osteostatin (1-5) amide(human, bovine, dog, horse,mouse, rabbit, rat)  質量規格：>95%,BR 小鼠細胞骨架活性調節蛋白(ARC)ELISA試劑盒 ，英文名： ARC ELISA Kit

骨抑制素酰胺，人  Osteostatin amide (human)  質量規格：>95%,BR 小鼠細胞間粘附分子1(ICAM1)ELISA試劑盒 ，英文名： ICAM1 ELISA Kit

p60 v-結構域（137-157）  p60 v-src (137-157)  質量規格：>95%,BR 小鼠細胞間粘附分子1(ICAM-1/CD54)ELISA檢測試劑盒Mouseiercellularadhesionmolecule1,ICAM-1ELISAKIT 96T/48T

p60 C-結構域底物ⅠLys(生物素)  p60c-src Substrate ILys(Biotin)  質量規格：>95%,BR 小鼠細胞間粘附分子1(ICAM-1/CD54)ELISA試劑盒 ，英文名： ICAM-1/CD54 ELISA Kit
人結腸組織提取物培養兔補體蛋白3elisa試劑盒   兔補體蛋白3試劑盒   規格型號：96T/48T   兔補體蛋白3試劑盒，規格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產品別名：兔補體蛋白3試劑盒、兔補體蛋白3 elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質期：6個月。  4-Bromomethyl-2-cyanobiphenyl  114772-54-2  中文名：  分子式：C14H10BrN  度：98.0%  關鍵詞： 

兔補體蛋白3(C3)ELISAKit     5-Chloro-4-methoxy-2-oxo-1,2-dihydropyridine-3-carbonitrile  中文名：  分子式：C7H5ClN2O2  度：98.0%

兔半胱酸蛋白酶抑制劑elisa試劑盒   兔半胱酸蛋白酶抑制劑試劑盒   規格型號：96T/48T   兔半胱酸蛋白酶抑制劑試劑盒，規格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產品別名：兔半胱酸蛋白酶抑制劑試劑盒、兔半胱酸蛋白酶抑制劑elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質期：6個月。  4-Bromomethyl-2-cyanobiphenyl  114772-54-2  中文名：  分子式：C14H10BrN 

兔半胱酸蛋白酶抑制劑C   英文名稱：   Rabbit Cystatin C   規格：   48T/96T   英文縮寫：   CSTC  4-Oxododecanedioic acid  中文名：  分子式：C12H20O5 

兔半胱酸蛋白酶抑制劑/胱抑素C(Cys-C)ELISA試劑盒     5-(1-Piperazinyl)benzofuran-2-carboxamide  183288-46-2  中文名：  分子式：C13H15N3O2

運輸和保存：
視天氣狀況和運輸距離遠近，公司與客戶協商后選擇下述方式中的一種進行。
1)1mL凍存細胞懸液裝于1.8ml的凍存管中，置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進行運輸；收到細胞后請盡快解凍復蘇細胞進行培養，如無法立刻進行復蘇操作，凍存細胞可在-80℃的條件下保存1個月。
2)T-25培養瓶充滿*培養基后進行常溫運輸；收到細胞后請鏡下觀察細胞生長狀態，如鋪瓶率超過85%請立即進行傳代操作，如懸浮的細胞較多，請將培養瓶至于培養箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細胞能夠再次貼壁。
一．培養基及培養凍存條件準備：
1）準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優質胎牛血清，10%。
2）培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配，液氮儲存。