人肝癌細(xì)胞；HHCC圖片

細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）人肝癌細(xì)胞；HHCC圖片準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號(hào)21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
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產(chǎn)品描述：
細(xì)胞名稱 人肝癌細(xì)胞；HHCC圖片
形態(tài)特性上皮細(xì)胞樣

生長(zhǎng)特性貼壁生長(zhǎng)

特征特性

培養(yǎng)條件DMEM-H:Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)10%FBS

傳代方法1:3傳代,2-3天傳一代

傳代情況

凍存條件基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS

支原體檢測(cè)培養(yǎng)法（-）

STRAmelogenin:X；CSF1PO:9,10；D13S317:?；D16S539:9,10；D18S51:16,17；D21S11:27,28；D3S1358:15,18；D5S818:11,12；D7S820:8,12；D8S1179:12,13；FGA:18,21；PentaD:8,15；PentaE:7,14；TH01:7；TPOX:8,12；vWA:16,18

同工酶

染色體

注意事項(xiàng)：
?1.一般客戶拿到人肝癌細(xì)胞；HHCC圖片后，應(yīng)該注意什么？
客戶收到細(xì)胞先不開蓋，放在培養(yǎng)箱靜置若干小時(shí)后（看細(xì)胞密度而定）在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況，并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照（建議受收細(xì)胞時(shí)的培養(yǎng)基拍一張照片，觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況，顯微鏡下拍細(xì)胞100X，200X各一張），排除細(xì)胞本身污染的情況；收到細(xì)胞未開封，出現(xiàn)污染狀況我們負(fù)責(zé)免費(fèi)發(fā)送一株細(xì)胞。
收到細(xì)胞時(shí)如無異常情況，請(qǐng)?jiān)陲@微鏡下觀察細(xì)胞密度，如為貼壁細(xì)胞，未超過80%匯合度時(shí)，將培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)液吸出，留下10ml培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)；超過80%匯合度時(shí)，請(qǐng)按細(xì)胞培養(yǎng)條件傳代培養(yǎng)。如為懸浮細(xì)胞，吸出培養(yǎng)液、1000轉(zhuǎn)/分鐘離心2分鐘，吸出上清，管底細(xì)胞用新鮮培養(yǎng)基懸浮細(xì)胞后移回培養(yǎng)瓶。
細(xì)胞出現(xiàn)問題，不予以重發(fā)的情況有哪些？
（1）客戶造成細(xì)胞污染，不重發(fā)；
（2）客戶不正確操作致細(xì)胞狀態(tài)不好，不重發(fā)；
（3）非推薦細(xì)胞培養(yǎng)體系致的細(xì)胞狀態(tài)不好，不重發(fā)；
（4）細(xì)胞狀態(tài)不好，未提供細(xì)胞培養(yǎng)前3天照片的，不重發(fā)；
（5）細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)經(jīng)其它處理的，不重發(fā)；
（6）細(xì)胞收到2天內(nèi)，未告知，不重發(fā)；
（7）視具體情況而定。
*G-CSF(RabbitGranulocyteColonyStimulatingFactor)ELISAKit兔粒細(xì)胞集落刺激因子規(guī)格：96T

*Alpha2-AP(RabbitAlpha2-Antiplasmin)ELISAKit兔子α2抗纖溶酶規(guī)格：96T

*SAA(RabbitSerumamyloidA)ELISAKit兔血清淀粉樣蛋白A規(guī)格：96T

*Hpt/HP(RabbitHaptoglobin)ELISAKit兔結(jié)合珠蛋白/觸珠蛋白規(guī)格：96T

*Plg(RabbitPlasminogen)ELISAKit兔子纖溶酶原規(guī)格：96T

*BMPs(Rabbitbonemorphogeneticproteins)ELISAKit兔骨形成蛋白規(guī)格：96T

*OPG(RabbitOsteoprotegerin)ELISAKit兔骨保護(hù)素規(guī)格：96T

*Amylin(RabbitAmylin)ELISAKit兔胰淀素規(guī)格：96T

*cTn-I(RabbitcardiactroponinI)ELISAKit兔心肌肌鈣蛋白Ⅰ規(guī)格：96T

*RANKL(RabbitreceptoractivatorofnuclearfactorkappaBligand)ELISAKit兔核因子κB受體活化因子配基規(guī)格：96T
人肝癌細(xì)胞；HHCC圖片*Anti-MCP-1/CCL2單核細(xì)胞趨化蛋白1抗體(人)規(guī)格：0.2ml

*Anti-MCP-2/CCL8單核細(xì)胞趨化蛋白2抗體（人）規(guī)格：0.2ml

*Anti-MCP-2/CCL8單核細(xì)胞趨化蛋白2抗體(大、小鼠)規(guī)格：0.2ml

*Anti-MCP-3/CCL7單核細(xì)胞趨化蛋白3抗體規(guī)格：0.2ml

*Anti-MCP-3/CCL7單核細(xì)胞趨化蛋白3抗體規(guī)格：0.2ml

*Anti-CCL9/CCL10巨噬細(xì)胞炎癥蛋白-1γ抗體規(guī)格：0.2ml

*Anti-MastCellTryptase肥大細(xì)胞蛋白酶7抗體規(guī)格：0.2ml

*Anti-TPSB2肥大細(xì)胞類胰蛋白酶β2規(guī)格：0.1ml

*Anti-MC-1R黑皮質(zhì)素-1受體抗體規(guī)格：0.2ml

*Anti-MCSFReceptor巨噬細(xì)胞集落刺激因子受體抗體規(guī)格：0.1ml
冷凍保存細(xì)胞之方法：
人肝癌細(xì)胞；HHCC圖片冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長(zhǎng)期儲(chǔ)存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長(zhǎng)期儲(chǔ)存。*-20 ℃不可超過1 小時(shí)， 以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。