細胞培養(yǎng)操作規(guī)程: 一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備: 1)人橫紋肌肉瘤細胞;A-673 [A673]培養(yǎng)準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號21875-091),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。 2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。 3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲存。 二.細胞處理: 1)復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。 2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。 對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法: 方法一:收集細胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。 我司常期代理ATCC Acris abcam cst Biorbyt santa Novus sigma lifespan NEB roche ABI R&D millipore BD Qiagen Cayman Jackson Life GeneTex Bio-Rad DSHB tocris peprotech 等品牌;部分產(chǎn)品現(xiàn)貨,超低比價,人橫紋肌肉瘤細胞;A-673 [A673]培養(yǎng)貨期短,價格優(yōu),售后齊全。點擊進入了解更多腫瘤細胞。 產(chǎn)品描述: 細胞名稱 人橫紋肌肉瘤細胞;A-673 [A673]培養(yǎng) 形態(tài)特性成纖維細胞 生長特性貼壁生長 特征特性A-673是源自15歲女性的橫紋肌肉瘤。它在軟瓊脂上 成克隆,在免疫抑制血清處理的小鼠中成瘤。有四個以上的標志染色體,一個額外的F染色體和兩個異常的B染色體。 培養(yǎng)條件DMEM-H:Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)胎牛血清,10% 傳代方法消化3-5分鐘。1:2。3天內(nèi)可長滿。 傳代情況PN5 凍存條件*培養(yǎng)基+8%DMSO 支原體檢測陰性 STRAmelogenin:X;CSF1PO:11,12;D13S317:8,13;D16S539:11;D18S51:13,16;D19S433:13,14;D21S11:29,30.2;D2S1338:16,21;D3S1358:14;D5S818:11,12;D7S820:10,12;D8S1179:11,13;FGA:19,20;TH01:9.3;TPOX:8;vWA:15,18 同工酶 染色體
注意事項: ?1.一般客戶拿到人橫紋肌肉瘤細胞;A-673 [A673]培養(yǎng)后,應該注意什么? 客戶收到細胞先不開蓋,放在培養(yǎng)箱靜置若干小時后(看細胞密度而定)在倒置顯微鏡下觀察細胞生長情況,并對細胞進行不同倍數(shù)拍照(建議受收細胞時的培養(yǎng)基拍一張照片,觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況,顯微鏡下拍細胞100X,200X各一張),排除細胞本身污染的情況;收到細胞未開封,出現(xiàn)污染狀況我們負責免費發(fā)送一株細胞。 收到細胞時如無異常情況,請在顯微鏡下觀察細胞密度,如為貼壁細胞,未超過80%匯合度時,將培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)液吸出,留下10ml培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng);超過80%匯合度時,請按細胞培養(yǎng)條件傳代培養(yǎng)。如為懸浮細胞,吸出培養(yǎng)液、1000轉(zhuǎn)/分鐘離心2分鐘,吸出上清,管底細胞用新鮮培養(yǎng)基懸浮細胞后移回培養(yǎng)瓶。 細胞出現(xiàn)問題,不予以重發(fā)的情況有哪些? (1)客戶造成細胞污染,不重發(fā); (2)客戶不正確操作致細胞狀態(tài)不好,不重發(fā); (3)非推薦細胞培養(yǎng)體系致的細胞狀態(tài)不好,不重發(fā); (4)細胞狀態(tài)不好,未提供細胞培養(yǎng)前3天照片的,不重發(fā); (5)細胞培養(yǎng)時經(jīng)其它處理的,不重發(fā); (6)細胞收到2天內(nèi),未告知,不重發(fā); (7)視具體情況而定。 *CsA(MouseCyclosporineA)ELISAKit小鼠環(huán)孢素A規(guī)格:48T *C1INH(MouseComplement1inhibitorautoantibody)ELISAKit小鼠補體1抑制物抗體規(guī)格:48T *PABA(Mousepara-aminobenzoicacid)ELISAKit小鼠對氨基苯甲酸規(guī)格:48T *hs-CRP(MousehighsensitivityC-ReactiveProtein)ELISAKit小鼠超敏C反應蛋白規(guī)格:48T *Beta2-GP1IgA/G/M(MouseBeta2-glycoprotein1antibodyIgA/G/M)ELISAKit小鼠β2糖蛋白1抗體IgA/G/M規(guī)格:48T *LAT(MouseLinkerforactivationofTcell)ELISAKit小鼠T細胞活化連接蛋白規(guī)格:48T *EMAb(MouseEndometriumAntibody)ELISAKit小鼠抗子宮內(nèi)膜抗體規(guī)格:48T *LDL-IC(MouseLDL-IC)ELISAKit小鼠低密度脂蛋白免疫復合物規(guī)格:48T *UU-Ab(MouseUreaplasmaurealyticumantibody)ELISAKit小鼠解脲脲原體抗體規(guī)格:48T *GFAP(Mouseglialfibrillaryacidicprotein)ELISAKit小鼠神經(jīng)膠質(zhì)纖維酸性蛋白規(guī)格:48T 人橫紋肌肉瘤細胞;A-673 [A673]培養(yǎng)*Anti-LDH乳酸脫氫酶抗體規(guī)格:0.2ml *Anti-MannanBindingLectin甘露聚糖結(jié)合凝集素抗體規(guī)格:0.2ml *Anti-LEF-1淋巴增強因子-1抗體規(guī)格:0.2ml *Anti-Leptin瘦素抗體規(guī)格:0.2ml *Anti-Leptin瘦素抗體規(guī)格:0.1ml *Anti-Leptinreceptor瘦素受體抗體規(guī)格:0.1ml *Anti-Leptinreceptor(long)瘦素受體抗體(長)規(guī)格:0.2ml *Anti-Leptinreceptor(long)瘦素受體抗體(長)規(guī)格:0.2ml *Anti-Leptinreceptor(L/M/S)瘦素受體抗體(長、中、短型)規(guī)格:0.2ml *Anti-L-enk亮氨酸腦啡肽抗體規(guī)格:0.2ml 冷凍保存細胞之方法: 人橫紋肌肉瘤細胞;A-673 [A673]培養(yǎng)冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ (-20 ℃30 分鐘*) → -80 ℃16~18 小時(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 長期儲存。 冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下, 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時, 以防止冰晶過大,造成細胞大量死亡,亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,惟存活率稍微降低一些。 |