人急性早幼粒白血病細胞；HL-60培養

細胞培養操作規程：
一．培養基及培養凍存條件準備：
1）人急性早幼粒白血病細胞；HL-60培養準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優質胎牛血清，10%。
2）培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配，液氮儲存。
二．細胞處理：
1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養基的培養瓶中培養過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。
對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
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產品描述：
細胞名稱 人急性早幼粒白血病細胞；HL-60培養
形態特性原粒細胞

生長特性懸浮生長

特征特性HL-60是一株早幼粒細胞。外周血白細胞來自一位患有急性粒-單核細胞白血病的36歲白人女性。HL-60自發分化，丁酸鹽、次、佛波醇肉豆蔻酸(PMA,TPA)、DMSO(1%to1.5%)、放線菌素D和視黃酸可以促進分化。細胞表現出吞噬活性，并對趨化刺激有響應。致癌基因myc表達陽性。

培養條件IMDM:Iscove'sModiefiedDulbecco'sMedium優質胎牛血清，20%

傳代方法1:2。3天內可長滿。

傳代情況PN5

凍存條件*培養基+8%DMSO

支原體檢測陰性

STRAmelogenin:X；CSF1PO:13,14；D13S317:8,11；D16S539:11；D18S51:14,15；D19S433:14；D21S11:29,30；D2S1338:17；D3S1358:16；D5S818:12；D7S820:11,12；D8S1179:12,13；FGA:22,24；TH01:7,8；TPOX:8,11；vWA:16

同工酶

染色體

注意事項：
?1.一般客戶拿到人急性早幼粒白血病細胞；HL-60培養后，應該注意什么？
客戶收到細胞先不開蓋，放在培養箱靜置若干小時后（看細胞密度而定）在倒置顯微鏡下觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數拍照（建議受收細胞時的培養基拍一張照片，觀察培養基的顏色和是否有漏液情況，顯微鏡下拍細胞100X，200X各一張），排除細胞本身污染的情況；收到細胞未開封，出現污染狀況我們負責免費發送一株細胞。
收到細胞時如無異常情況，請在顯微鏡下觀察細胞密度，如為貼壁細胞，未超過80%匯合度時，將培養瓶中培養液吸出，留下10ml培養液繼續培養；超過80%匯合度時，請按細胞培養條件傳代培養。如為懸浮細胞，吸出培養液、1000轉/分鐘離心2分鐘，吸出上清，管底細胞用新鮮培養基懸浮細胞后移回培養瓶。
細胞出現問題，不予以重發的情況有哪些？
（1）客戶造成細胞污染，不重發；
（2）客戶不正確操作致細胞狀態不好，不重發；
（3）非推薦細胞培養體系致的細胞狀態不好，不重發；
（4）細胞狀態不好，未提供細胞培養前3天照片的，不重發；
（5）細胞培養時經其它處理的，不重發；
（6）細胞收到2天內，未告知，不重發；
（7）視具體情況而定。
*HSP-70(MouseHeatShockProtein70)ELISAKit小鼠熱休克蛋白70規格：48T

*ADP(Mouseadiponectin)ELISAKit小鼠脂聯素規格：48T

*Hsp-40(MouseHeatShockProtein40)ELISAKit小鼠熱休克蛋白40規格：48T

*ABeta1-40(Mouseamyloidbetapeptide1-40)ELISAKit小鼠β淀粉樣蛋白規格：48T

*IL-8/CXCL8(Mouseinterleukin8)ELISAKit小鼠白介素8規格：48T

*Cyclin-D3(MouseCyclin-D3)ELISAKit小鼠細胞周期素D3規格：48T

*Cyclin-D2(MouseCyclin-D2)ELISAKit小鼠細胞周期素D2規格：48T

*E(Mouseestrogen)ELISAKit小鼠雌激素規格：48T

*Cyclin-D1(MouseCyclin-D1)ELISAKit小鼠細胞周期素D1規格：48T

*MBP(Mousemyelinbasicprotein)ELISAKit小鼠髓磷脂堿性蛋白規格：48T
人急性早幼粒白血病細胞；HL-60培養*Anti-IRF-1干擾素調節因子1抗體規格：0.2ml

*Anti-IRAK白介素-1受體相關激酶1/2抗體規格：0.2ml

*Anti-Phospho-IRAK1(Ser376)磷酸化白介素-1受體相關激酶1抗體規格：0.1ml

*Anti-Phospho-IRAK1(Thr209)磷酸化白介素-1受體相關激酶1抗體規格：0.1ml

*Anti-Phospho-IRAK1(Thr387)磷酸化白介素-1受體相關激酶1抗體規格：0.1ml

*Anti-IRF3干擾素調節因子3規格：0.2ml

*Anti-Phospho-IRF3(Ser396)磷酸化干擾素調節因子3規格：0.1ml

*Anti-IRAK4白介素-1受體相關激酶4抗體規格：0.2ml

*Anti-IL-1RA白介素-1受體拮抗劑抗體規格：0.2ml

*Anti-IL-1R1白介素1受體1抗體規格：0.1ml
冷凍保存細胞之方法：
人急性早幼粒白血病細胞；HL-60培養冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。