細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程: 一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備: 1)人急性髓性白血病細(xì)胞;KG-1a培養(yǎng)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號(hào)21875-091),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。 2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。 3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲(chǔ)存。 二.細(xì)胞處理: 1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。 2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。 對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法: 方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。 我司常期代理ATCC Acris abcam cst Biorbyt santa Novus sigma lifespan NEB roche ABI R&D millipore BD Qiagen Cayman Jackson Life GeneTex Bio-Rad DSHB tocris peprotech 等品牌;部分產(chǎn)品現(xiàn)貨,超低比價(jià),人急性髓性白血病細(xì)胞;KG-1a培養(yǎng)貨期短,價(jià)格優(yōu),售后齊全。點(diǎn)擊進(jìn)入了解更多腫瘤細(xì)胞。 產(chǎn)品描述: 細(xì)胞名稱(chēng) 人急性髓性白血病細(xì)胞;KG-1a培養(yǎng) 形態(tài)特性骨髓瘤細(xì)胞樣 生長(zhǎng)特性貼壁生長(zhǎng) 特征特性 培養(yǎng)條件IMDM:Iscove'sModiefiedDulbecco'sMedium新生牛血清,20% 傳代方法2x10-5細(xì)胞/ml 傳代情況 凍存條件基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS 支原體檢測(cè)培養(yǎng)法(-) STRAmelogenin:X,Y;CSF1PO:7;D13S317:11,12;D16S539:10,11;D18S51:10.2,18;D21S11:28,29;D3S1358:15,16;D5S818:13;D7S820:8,10;D8S1179:13,14;FGA:22;PentaD:8,9;PentaE:7,13;TH01:7,8;TPOX:7,9;vWA:14,19 同工酶 染色體
注意事項(xiàng): ?1.一般客戶(hù)拿到人急性髓性白血病細(xì)胞;KG-1a培養(yǎng)后,應(yīng)該注意什么? 客戶(hù)收到細(xì)胞先不開(kāi)蓋,放在培養(yǎng)箱靜置若干小時(shí)后(看細(xì)胞密度而定)在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況,并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照(建議受收細(xì)胞時(shí)的培養(yǎng)基拍一張照片,觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況,顯微鏡下拍細(xì)胞100X,200X各一張),排除細(xì)胞本身污染的情況;收到細(xì)胞未開(kāi)封,出現(xiàn)污染狀況我們負(fù)責(zé)免費(fèi)發(fā)送一株細(xì)胞。 收到細(xì)胞時(shí)如無(wú)異常情況,請(qǐng)?jiān)陲@微鏡下觀察細(xì)胞密度,如為貼壁細(xì)胞,未超過(guò)80%匯合度時(shí),將培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)液吸出,留下10ml培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng);超過(guò)80%匯合度時(shí),請(qǐng)按細(xì)胞培養(yǎng)條件傳代培養(yǎng)。如為懸浮細(xì)胞,吸出培養(yǎng)液、1000轉(zhuǎn)/分鐘離心2分鐘,吸出上清,管底細(xì)胞用新鮮培養(yǎng)基懸浮細(xì)胞后移回培養(yǎng)瓶。 細(xì)胞出現(xiàn)問(wèn)題,不予以重發(fā)的情況有哪些? (1)客戶(hù)造成細(xì)胞污染,不重發(fā); (2)客戶(hù)不正確操作致細(xì)胞狀態(tài)不好,不重發(fā); (3)非推薦細(xì)胞培養(yǎng)體系致的細(xì)胞狀態(tài)不好,不重發(fā); (4)細(xì)胞狀態(tài)不好,未提供細(xì)胞培養(yǎng)前3天照片的,不重發(fā); (5)細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)經(jīng)其它處理的,不重發(fā); (6)細(xì)胞收到2天內(nèi),未告知,不重發(fā); (7)視具體情況而定。 TGF-β1*雞轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1規(guī)格48T/96T MHC/B*雞主要組織相容性復(fù)合體規(guī)格48T/96T TRAIL-R3*雞腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體3規(guī)格48T/96T TNF-α*雞腫瘤壞死因子α規(guī)格48T/96T LPS*雞脂多糖/內(nèi)毒素規(guī)格48T/96T ACAC*雞乙酰乙酸檢測(cè)規(guī)格48T/96T IGF-1*雞胰島素樣生長(zhǎng)因子1規(guī)格48T/96T NADPH*雞煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸規(guī)格48T/96T PF-4/CXCL4*雞血小板因子4規(guī)格48T/96T NO*雞血清一氧化氮規(guī)格48T/96T 人急性髓性白血病細(xì)胞;KG-1a培養(yǎng)*Anti-DRD3多巴胺受體D3抗體規(guī)格:0.1ml *Anti-DAT1多巴胺轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白抗體規(guī)格:0.2ml *Anti-DRD4多巴胺受體D4抗體規(guī)格:0.2ml *Anti-DRD5/DopamineReceptorD5多巴胺受體D5抗體規(guī)格:0.2ml *Anti-DBC1膀胱癌缺失基因1規(guī)格:0.2ml *Anti-Phospho-DBC1(Thr454)磷酸化膀胱癌缺失基因1規(guī)格:0.1ml *Anti-DBH多巴胺β羥化酶抗體規(guī)格:0.1ml *Anti-DCC結(jié)腸直腸癌缺失基因抗體規(guī)格:0.1ml *Anti-DCIR/CLEC4AC型凝集素結(jié)構(gòu)域家族4成員A抗體規(guī)格:0.2ml *Anti-DCN/Decorin核心蛋白聚糖抗體規(guī)格:0.1ml 冷凍保存細(xì)胞之方法: 人急性髓性白血病細(xì)胞;KG-1a培養(yǎng)冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ (-20 ℃30 分鐘*) → -80 ℃16~18 小時(shí)(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 長(zhǎng)期儲(chǔ)存。 冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下, 再放入液氮槽vapor phase長(zhǎng)期儲(chǔ)存。*-20 ℃不可超過(guò)1 小時(shí), 以防止冰晶過(guò)大,造成細(xì)胞大量死亡,亦可跳過(guò)此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,惟存活率稍微降低一些。 |