PrimaCell™大鼠主動脈內皮細胞試劑盒

PrimaCell™大鼠主動脈內皮細胞試劑盒

總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進行純化。生物科技提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結果等。
cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA第一鏈，以50ul總反應體系進行逆轉錄，體系中包括MMLV反轉錄酶和隨機引物以及10mg總RNA。68℃反應10min 后終止RT反應。利用1x RT Buffer 運輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應。所有cDNA產品在訂單發(fā)貨之前都經過了嚴格的QA/QC分析，保證了產品的質量。
蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人關節(jié)軟骨組織裂解液，離心去除組織碎片，通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。 

實驗要點及說明；

1．本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細胞培養(yǎng)，懸浮細胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應該為優(yōu)質玻璃，并經過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕；
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率；
5．如果細胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

運輸和保存；

視天氣狀況和運輸距離遠近，公司與客戶協(xié)商后選擇下述方式中的一種進行。
1)1mL凍存細胞懸液裝于1.8ml的凍存管中，置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進行運輸；收到細胞后請盡快解凍復蘇細胞進行培養(yǎng)，如無法立刻進行復蘇操作，凍存細胞可在-80℃的條件下保存1個月。
2)T-25培養(yǎng)瓶充滿*培養(yǎng)基后進行常溫運輸；收到細胞后請鏡下觀察細胞生長狀態(tài)，如鋪瓶率超過85%請立即進行傳代操作，如懸浮的細胞較多，請將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細胞能夠再次貼壁。
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。

操作要點；

1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內，再逐步轉移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內*解凍，使細胞能盡快通過易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內，將管內細胞轉移至準備好的離心管內，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉移至離心管內。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細胞懸液。
5）將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內，補加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內培養(yǎng)。
6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經過2~3次傳代，細胞活力恢復后才能進行后續(xù)的實驗。

RatinhibinB,INH-BELISA試劑盒大鼠抑制素B(INH-B)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  3520-14-7右旋四氫巴馬汀品牌  Glycitein

小鼠粘蛋白1(MUC1)ELISA試劑盒 ，英文名： MUC1 ELISA Kit  545-47-1羽扇豆醇規(guī)格  Lupeol

恒河猴主要組織相容性復合體(MHC/RhLA)ELISA檢測試劑盒Rhesusmajorhistocompatibilitycomplex,MHC/RhLAELISAKit 96T/48T  548-77-6鳶尾黃素  Tectorigenin

犬硫酸雌酮(E1S)試劑盒 Canine Esone Sulphate,E1S ELISA Kit  139-85-5原兒茶醛說明書  protocatechuic aldehyde

英文名稱HumanPlateletFactor4ELISAKit人血小板因子4(PF4)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  20315-25-7原B1品牌  Procyanidin B1
2469-34-3遠志皂苷元  Senegenin  英文名稱RatsubstancePreceptorELISAKit大鼠P物質受體(SP-R)規(guī)格：96T/48T

2468-21-5長春質堿  Catharanthine   英文名稱RatSubstancePELISAKit大鼠P物質(SP)規(guī)格：96T/48T

24512-63-8梔子苷說明書  Geniposide  英文名稱RatSubstancePELISAKit大鼠P物質(SP)規(guī)格：96T/48T

24512-63-8梔子苷  Geniposide  英文名稱RatSPE(IgG,M)ELISAKit大鼠抗抗體(SPE)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

24512-62-7山梔子苷B品牌  Gardenoside  英文名稱RatSPE(IgG,M)ELISAKit大鼠抗抗體(SPE)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
小鼠脂蛋白脂酶(LIPD)ELISA試劑盒 ，英文名： LIPD ELISA Kit  61281-37-6五味子乙素說明書  Schizandrin B

α1微球蛋白(α1-MG)ELISA檢測試劑盒Monkeyα1-microglobulin,α1-MGELISAKit 96T/48T  61301-33-5五味子丙素品牌  schisandrin C

犬皮質醇(Coisol)試劑盒 Canine Coisol ELISA Kit  58546-56-8五味子酯甲規(guī)格  Schisantherin A

英文名稱HumanInsulin-likegrowthfactorbindingprotein4,IGFBP4ELISAkit人胰島素樣生長因子結合蛋白4(IGFBP4)規(guī)格：96T/48T  58546-55-7五味子酯乙  schisantherin B

化人體RUNX3基因重組表達載體(pcDNA-RUNX3)10微克  西貝母素苷說明書  imperialine-e--D-glocoside
PrimaCell™大鼠主動脈內皮細胞試劑盒6024-85-7延胡索乙素說明書  Tetrahydropalmatine   豬脂聯(lián)素受體2(ADIPOR2)試劑盒 Pig adiponectin receptor 2,ADIPOR2 ELISA kit

6024-85-7延胡索乙素規(guī)格   Tetrahydropalmatine  豬脂聯(lián)素受體1(ADIPOR1)試劑盒 Pig adiponectin receptor 1,ADIPOR1 ELISA kit

602-41-5硫秋水仙苷  Thiocolchicoside     豬脂聯(lián)素(ADP)試劑盒 Porcine ADP ELISA Kit

60213-69-65補充中3品牌  Oleanolic acid-3-O-β-D-glucopyranosyl (1→2)-α-L-arabinopyranoside   豬脂聯(lián)素(ADP)ELISA檢測試劑盒Porcineadiponectin,ADPELISAKit 96T/48T

6020-18-4鹽酸黃連堿說明書  Coptisine chloride  豬脂肪酸合成酶(FAS)試劑盒 Pig fatty acid syhase,FAS ELISA kit