我司常期代理ATCC Acris abcam cst Biorbyt santa Novus sigma lifespan NEB roche ABI R&D millipore BD Qiagen Cayman Jackson Life GeneTex Bio-Rad DSHB tocris peprotech 等品牌;部分產品現貨,超低比價,產品貨期短,價格優,售后齊全。 產品名稱 | PrimaCell™大鼠冠狀動脈內皮細胞試劑盒價格 | 英文名稱 | | 貨號 | EYX99651 |
PrimaCell™大鼠冠狀動脈內皮細胞試劑盒 總RNA制備:利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA,然后用Qiagen RNA Clean Kit進行純化。生物科技提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結果等。 cDNA制備:純化后的總RNA來合成cDNA第一鏈,以50ul總反應體系進行逆轉錄,體系中包括MMLV反轉錄酶和隨機引物以及10mg總RNA。68℃反應10min 后終止RT反應。利用1x RT Buffer 運輸cDNA,1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應。所有cDNA產品在訂單發貨之前都經過了嚴格的QA/QC分析,保證了產品的質量。 蛋白制備:利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人關節軟骨組織裂解液,離心去除組織碎片,通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度,組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF,-80度保存。 細胞培養方法; 1、細胞傳代:細胞密度達到80-90%時即可傳代 ①棄去培養上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次; ②加入2ml0.25%胰酶(T25瓶),使胰酶覆蓋整個瓶或皿,蓋好放入培養箱消化; ③1-2min后,顯微鏡下觀察細胞,若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養基終止消化;若細胞還是貼壁,放回培養箱繼續消化至可以輕輕吹打下為止; ④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清; ⑤用新鮮培養基重懸后加入培養瓶或皿中,T25培養瓶加6-8ml培養基; ⑥懸浮細胞直接離心收集,細胞沉淀重懸后分到新培養瓶中。 2、細胞復蘇: ①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,時間1min左右,加入4-5ml培養基混勻。 ②在1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1-2ml培養基吹勻,將細胞懸液加入培養瓶中,補加適量培養基。 3、細胞凍存:待細胞生長狀態良好時進行細胞凍存保種 ①棄去培養上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次,加入1mL 0.25%胰蛋白酶(T25瓶) ②1-2min后,顯微鏡下觀察細胞,大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養基終止消化; ③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1ml凍存液重懸細胞; ④將凍存管放入程序降溫盒,放入-80℃冰箱,4小時后將凍存管轉入液氮罐儲存。
實驗事項; 1. 試劑準備:所有試劑都必須在使用前達到室溫,使用后請立即按照說明書要求保存試劑。 實驗操作中請使用一次性的吸頭,避免交叉污染。 2. 加樣:加樣或加試劑時,請注意在吸取標本 / 標準品,酶結合物或底物時,前一個孔與后一個孔加樣之間的時間間隔如果太大,將會導致不同的“預孵育"時間,從而明顯地影響到測量值的準確性及重復性。一次加樣時間(包括標準品及所有樣品)好控制在10分鐘內,如標本數量多,推薦使用多道移液器加樣。 3. 孵育:為防止樣品蒸發,試驗時將反應板放于鋪有濕布的密閉盒內,酶標板加上蓋或覆膜,以避免液體蒸發;洗板后應盡快進行下步操作,任何時侯都應避免酶標板處于干燥狀態;同時應嚴格遵守給定的孵育時間和溫度。 4. 洗滌:洗滌過程中反應孔中殘留的洗滌液應在濾紙上充分拍干,勿將濾紙直接放入反應孔中吸水,同時要消除板底殘留的液體和手指印,避免影響后的酶標儀讀數。 5. 試劑配制:Detection A及Detection B在使用前請手甩幾下或少時離心處理,以使管壁或瓶蓋的液體沉積到管底。標準品、檢測溶液A工作液、檢測溶液B工作液請依據所需的量配置使用,并使用相應的稀釋液配制,不能混淆。請確配置標準品及工作液,盡量不要微量配置(如吸取檢測溶液A時,一次不要小于10μl),以避免由于不準確稀釋而造成的濃度誤差;請勿重復使用已稀釋過的標準品、檢測溶液A工作液或檢測溶液B工作液。 6. 反應時間的控制:加入底物后請定時觀察反應孔的顏色變化(比如,每隔10分鐘),如顏色較深,請提前加入終止液終止反應,避免反應過強從而影響酶標儀光密度讀數。 7. 底物:底物請避光保存,在儲存和溫育時避免強光直接照射。 建議檢測樣品時均設雙孔測定,以保證檢測結果的準確性。 如標本中待測物質含量過高,請先稀釋后再測定,計算時請后乘以稀釋倍數。 化細胞色素C氧化酶活性測定試劑盒20 29106-49-8原B2規格 Procyanidin B2 RatInhibinbindingprotein,INHBPELISA試劑盒大鼠抑制素結合蛋白(INHBP)ELISA試劑盒規格:96T/48T 4852-22-6原 proanthocyanidins 小鼠粘蛋白/粘液素7(MUC7)ELISA試劑盒 ,英文名: MUC7 ELISA Kit 1453-93-6原人參三醇說明書 Protopanaxatriol 小鼠β2糖蛋白1抗體IgA/G/M(β2-GP1IgA/G/M)ELISA檢測試劑盒Mouseβ2-glycoprotein1aibodyIgA/G/M,β2-GP1IgA/G/MELISAKit 96T/48T 55056-80-9原薯蕷皂苷品牌 Protodioscin 人巨噬細胞刺激蛋白(MSP)試劑盒 Human MSP ELISA Kit 162857-78-5遠志山酮III規格 Polygalaxanthone III 2450-53-5異綠原酸A說明書 Isochlorogenic acid A 英文名稱RatSomatostatinELISAKit大鼠生長抑素(SS)規格:96T/48T 24502-78-1乙酰紫草素說明書 Acetylshikonin 英文名稱RatSomatostatinELISAKit大鼠生長抑素(SS)規格:96T/48T 24211-30-1杜鵑素說明書 Farrerol 英文名稱RatSODELISAKit大鼠超氧化物歧化酶(SOD)規格:96T/48T 24063-71-6異莪術烯醇品牌 Isocurcumenol 英文名稱RatSODELISAKit大鼠超氧化物歧化酶(SOD)規格:96T/48T 2385-63-9蓮心堿高氯酸鹽說明書 Liensinine Perchlorate 英文名稱RatSHBGELISAKit大鼠性激素結合球蛋白(SHBG)規格:96T/48T 小鼠脂蛋白脂酶(LPL)ELISA檢測試劑盒Mouselipoproteinlipase,LPLELISAKit 96T/48T 548-04-9金絲桃素品牌 Hypericin 人抗sp100抗體(sp100)試劑盒 Human ai-sp100-aibody ELISA Kit 521-34-6金松雙黃酮規格 Sciadopitysin Rat17-Hydroxycoicosteroids,17-OHCSELISAKit大鼠17羥皮質類(17-OHCS)ELISA試劑盒規格:96T/48T 6902-77-8京尼平 Genipin 載玻片細胞JNK/SAPK蛋白表達NBT顯色光學顯微鏡檢測試劑盒10/20 27741-01-1京尼平苷酸說明書 Geniposidic acid IL-1αELISA試劑盒魚類白介素1α規格:96T/48T 29307-60-6京尼平龍膽雙糖苷品牌 genipin-1-b-D-gentiobioside PrimaCell™大鼠冠狀動脈內皮細胞試劑盒價格6080-33-7鹽酸青藤堿品牌 Sinomenine 豬主要組織相容性復合體Ⅲ類(MHCⅢ)試劑盒 Porcine MHC Ⅲ ELISA Kit 6078-17-7鹽酸小檗胺品牌 Berbamine 豬主要組織相容性復合體Ⅱ類(MHCⅡ/SLAⅡ)ELISA檢測試劑盒swinemajorhistocompatibilitycomplexⅡ,MHCⅡ/SLAⅡELISAKit 96T/48T 607-80-7芝麻素 Sesamin 豬主要組織相容性復合體Ⅱ類(MHCⅡ)試劑盒 Porcine MHC Ⅱ ELISA Kit 604-80-8水仙苷規格 Narcissoside 豬主要急性期蛋白(MAP)試劑盒 Pig major ace phase protein,MAP ELISA Kit 6035-49-0白蠟樹素說明書 Dimethylfraxetin 豬中性粒細胞明膠酶相關脂質運載蛋白(NGAL)試劑盒 Pig neuophil gelatinase-associated lipocalin,NGAL ELISA Kit 注意事項; 1. 接收到,肉眼觀察細胞培養基顏色,顯微鏡觀察細胞生長情況,并對細胞進行不同倍數拍照(建議收到時的培養瓶拍一張照片,顯微鏡拍收到時的細胞100X,200X各一張)。 2.用75%的酒精消毒(建議配置75%的酒精的水是滅菌過的)。 3.嚴格無菌操作,打開細胞培養瓶。 4.將細胞培養瓶內的培養基用吸管*吸出(嚴禁直接傾倒),放入另一無菌容器中(建議換新的培養基培養細胞)。 5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細胞表面,洗3-4次遍,加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細胞變圓,輕輕拍打培養瓶直到細胞脫落,加入終止液終止。 6.1000rpm,5min離心,重懸細胞。 7.換新的細胞培養瓶,37℃,5%CO2培養。 |