EB病毒轉化的人B淋巴細胞；KMY0907培養

細胞培養操作規程：
一．培養基及培養凍存條件準備：
1）EB病毒轉化的人B淋巴細胞；KMY0907培養準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優質胎牛血清，10%。
2）培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配，液氮儲存。
二．細胞處理：
1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養基的培養瓶中培養過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。
對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
產品描述：
細胞名稱 EB病毒轉化的人B淋巴細胞；KMY0907培養
形態特性淋巴母細胞樣

生長特性懸浮生長

特征特性該細胞系來源于一無精癥男性患者的外周血。2009年由中科院昆明細胞庫通過EB病毒轉化的方法建立。

培養條件RPMI1640(w/oHepes)15%NBS

傳代方法1:2傳代；5-6天一次

傳代情況P2

凍存條件基礎培養基+5%DMSO+20%FBS

支原體檢測熒光法（-）

STR-

同工酶

染色體

注意事項：
?1.一般客戶拿到EB病毒轉化的人B淋巴細胞；KMY0907培養后，應該注意什么？
客戶收到細胞先不開蓋，放在培養箱靜置若干小時后（看細胞密度而定）在倒置顯微鏡下觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數拍照（建議受收細胞時的培養基拍一張照片，觀察培養基的顏色和是否有漏液情況，顯微鏡下拍細胞100X，200X各一張），排除細胞本身污染的情況；收到細胞未開封，出現污染狀況我們負責免費發送一株細胞。
收到細胞時如無異常情況，請在顯微鏡下觀察細胞密度，如為貼壁細胞，未超過80%匯合度時，將培養瓶中培養液吸出，留下10ml培養液繼續培養；超過80%匯合度時，請按細胞培養條件傳代培養。如為懸浮細胞，吸出培養液、1000轉/分鐘離心2分鐘，吸出上清，管底細胞用新鮮培養基懸浮細胞后移回培養瓶。
細胞出現問題，不予以重發的情況有哪些？
（1）客戶造成細胞污染，不重發；
（2）客戶不正確操作致細胞狀態不好，不重發；
（3）非推薦細胞培養體系致的細胞狀態不好，不重發；
（4）細胞狀態不好，未提供細胞培養前3天照片的，不重發；
（5）細胞培養時經其它處理的，不重發；
（6）細胞收到2天內，未告知，不重發；
（7）視具體情況而定。
我司常期代理ATCC

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DPD*人脫氧膠原吡啶交聯規格48T/96T

DNase-Ⅰ*人脫氧核糖核酸酶Ⅰ規格48T/96T

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DHEA-S*人脫氫表雄酮硫酸酯規格48T/96T

MT*人褪黑素規格48T/96T

HAase*人透明質酸酶規格48T/96T

HABP*人透明質酸結合蛋白規格48T/96T

HA*人透明質酸規格48T/96T

CP/CER*人銅藍蛋白規格48T/96T

HOXB2*人同源框B2規格48T/96T
EB病毒轉化的人B淋巴細胞；KMY0907培養P-鈣粘附分子抗原P-cadherin(placental)P-鈣粘附分子抗原0.5mgP-cadherin(placental

磷酸化鈣介質素抗原p-Caldesmon(phosphor-Ser789)磷酸化鈣介質素抗原0.5mgp-Caldesmon(phosphor-Ser789

peptide磷酸化增殖細胞核多肽抗原PCNA(phosphosDyr211)peptide磷酸化增殖細胞核多肽抗原0.5mgPCNA(phosphosDyr211

足細胞特異蛋白抗原PCX/PODXL(Podocalyxin)足細胞特異蛋白抗原0.5mgPCX/PODXL(Podocalyxin

凋亡相關蛋白4抗原PDCD4(programmedcelldeath4)凋亡相關蛋白4抗原0.5mgPDCD4(programmedcelldeath4

PDGF-A血小板源性生長因子-1（抗原）0.5mgPDGF-A血小板源性生長因子-1（抗原

PDGF-B血小板源性生長因子-B（抗原）0.5mgPDGF-B血小板源性生長因子-B（抗原

PDGF-BBpeptide血小板源性生長因子-BB抗原PDGF-BBpeptide血小板源性生長因子-BB抗原0.5mgPDGF-BBpeptide血小板源性生長因子-BB抗原
冷凍保存細胞之方法：
EB病毒轉化的人B淋巴細胞；KMY0907培養冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。