EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細胞；KMY0922說明書

細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細胞；KMY0922說明書準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。
二．細胞處理：
1）復(fù)蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
產(chǎn)品描述：
細胞名稱 EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細胞；KMY0922說明書
形態(tài)特性淋巴母細胞樣

生長特性懸浮生長

特征特性該細胞系來源于一成年男性的外周血。2009年由中科院昆明細胞庫通過EB病毒轉(zhuǎn)化的方法建立。

培養(yǎng)條件RPMI1640(w/oHepes)15%NBS

傳代方法1:2傳代；5-6天一次

傳代情況P2

凍存條件基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS

支原體檢測熒光法（-）

STR-

同工酶

染色體

注意事項：
?1.一般客戶拿到EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細胞；KMY0922說明書后，應(yīng)該注意什么？
客戶收到細胞先不開蓋，放在培養(yǎng)箱靜置若干小時后（看細胞密度而定）在倒置顯微鏡下觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數(shù)拍照（建議受收細胞時的培養(yǎng)基拍一張照片，觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況，顯微鏡下拍細胞100X，200X各一張），排除細胞本身污染的情況；收到細胞未開封，出現(xiàn)污染狀況我們負責免費發(fā)送一株細胞。
收到細胞時如無異常情況，請在顯微鏡下觀察細胞密度，如為貼壁細胞，未超過80%匯合度時，將培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)液吸出，留下10ml培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)；超過80%匯合度時，請按細胞培養(yǎng)條件傳代培養(yǎng)。如為懸浮細胞，吸出培養(yǎng)液、1000轉(zhuǎn)/分鐘離心2分鐘，吸出上清，管底細胞用新鮮培養(yǎng)基懸浮細胞后移回培養(yǎng)瓶。
細胞出現(xiàn)問題，不予以重發(fā)的情況有哪些？
（1）客戶造成細胞污染，不重發(fā)；
（2）客戶不正確操作致細胞狀態(tài)不好，不重發(fā)；
（3）非推薦細胞培養(yǎng)體系致的細胞狀態(tài)不好，不重發(fā)；
（4）細胞狀態(tài)不好，未提供細胞培養(yǎng)前3天照片的，不重發(fā)；
（5）細胞培養(yǎng)時經(jīng)其它處理的，不重發(fā)；
（6）細胞收到2天內(nèi)，未告知，不重發(fā)；
（7）視具體情況而定。
我司常期代理ATCC

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CK-18*人細胞角蛋白18規(guī)格48T/96T

ICAM-3/CD50*人細胞間粘附分子3規(guī)格48T/96T

ICAM-2/CD102*人細胞間粘附分子2規(guī)格48T/96T

ICAM-1/CD54*人細胞間粘附分子1規(guī)格48T/96T

CDC*人細胞分裂周期基因規(guī)格48T/96T

CDC*人細胞分裂周期基因規(guī)格48T/96T

CTLA-4/CD152*人細胞毒性T淋巴細胞相關(guān)抗原4規(guī)格48T/96T

CagA*人細胞毒素相關(guān)蛋白A規(guī)格48T/96T

CTX*人細胞毒素規(guī)格48T/96T

IAP*人細胞凋亡抑制因子規(guī)格48T/96T
EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細胞；KMY0922說明書Oxytetracycline/BSA土霉素偶聯(lián)牛血清白蛋白Oxytetracycline/BSA土霉素偶聯(lián)牛血清白蛋白2mgOxytetracycline/BSA土霉素偶聯(lián)牛血清白蛋白

Oxytetracycline/OVA土霉素偶聯(lián)雞卵白蛋白Oxytetracycline/OVA土霉素偶聯(lián)雞卵白蛋白2mgOxytetracycline/OVA土霉素偶聯(lián)雞卵白蛋白

磷酸化β-連環(huán)蛋白抗原p-Betacatenin(p-betaCatenin(phosphor-Y142))磷酸化β-連環(huán)蛋白抗原0.5mgp-Betacatenin(p-betaCatenin(phosphor-Y142

P16/CDKN2A(Cyclin-dependentkinaseinhibitor-2A)抑癌基因p16（抗原）0.5mgP16/CDKN2A(Cyclin-dependentkinaseinhibitor-2A

P19ARFp19ARF抑癌基因抗原P19ARFp19ARF抑癌基因抗原0.5mgP19ARFp19ARF抑癌基因抗原

p21/WAF1/CIP1p21核分裂抑制因子之一（抗原）0.5mgp21/WAF1/CIP1p21核分裂抑制因子之一（抗原

p27(cyclin-dependentkinaseinhibitor1B)p27(抗原)0.5mgp27(cyclin-dependentkinaseinhibitor1B

增殖潛能相關(guān)蛋白抗原P2P-R/RBBP6(proliferationpotentialproteinrelated)增殖潛能相關(guān)蛋白抗原0.5mgP2P-R/RBBP6(proliferationpotentialproteinrelated
冷凍保存細胞之方法：
EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細胞；KMY0922說明書冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。