SV40轉(zhuǎn)染人成骨細胞；hFOB 1.19培養(yǎng)

細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）SV40轉(zhuǎn)染人成骨細胞；hFOB 1.19培養(yǎng)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。
二．細胞處理：
1）復(fù)蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
產(chǎn)品描述：
細胞名稱 SV40轉(zhuǎn)染人成骨細胞；hFOB 1.19培養(yǎng)
形態(tài)特性多角

生長特性貼壁生長

特征特性在0.6mg/ml新霉素G418存在下，用溫度敏感的表達載體pUCSVisA58轉(zhuǎn)染自然的胎兒四肢組織，建立了此細胞系。在許可溫度33.5oC下細胞分裂很快，而在限制溫度39.5oC下細胞極少分裂或不分裂。這些細胞具有分化為表達造骨細胞表型的成熟造骨細胞的能力。這些細胞提供了一個同質(zhì)化的快速增殖模型系統(tǒng)，用于研究正常人造骨細胞的分化，造骨細胞生理和激素，生長因子，和對造骨細胞的功能及分化有影響的細胞因子。

培養(yǎng)條件DMEM/F12(1:1):Ham'sF12/DMEMedium(DMEH-16/F-1250%Mixturew/oHEPES,withNEAAMedium)10%FBS+300ng/mlG418

傳代方法1:2傳代，3天傳代一次

傳代情況

凍存條件基礎(chǔ)培養(yǎng)基+8%DMSO+39%FBS

支原體檢測培養(yǎng)法（-）

STRAmelogenin：X；CSF1PO:10,13；D12S391:20,23；D13S317:11,12；D16S539:9,13；D18S51:10,17；D19S433:13,15；D21S11:29,32.2；D2S1338:23,24；D3S1358:17,18；D5S818:11,12；D6S1043:13,16；D7S820:8,10；D8S1179:10,14；FGA:19,22；PentaE:8,11；TH01:7,9.3；TPOX:11；vWA:16,18；

同工酶

染色體

注意事項：
?1.一般客戶拿到SV40轉(zhuǎn)染人成骨細胞；hFOB 1.19培養(yǎng)后，應(yīng)該注意什么？
客戶收到細胞先不開蓋，放在培養(yǎng)箱靜置若干小時后（看細胞密度而定）在倒置顯微鏡下觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數(shù)拍照（建議受收細胞時的培養(yǎng)基拍一張照片，觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況，顯微鏡下拍細胞100X，200X各一張），排除細胞本身污染的情況；收到細胞未開封，出現(xiàn)污染狀況我們負責(zé)免費發(fā)送一株細胞。
收到細胞時如無異常情況，請在顯微鏡下觀察細胞密度，如為貼壁細胞，未超過80%匯合度時，將培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)液吸出，留下10ml培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)；超過80%匯合度時，請按細胞培養(yǎng)條件傳代培養(yǎng)。如為懸浮細胞，吸出培養(yǎng)液、1000轉(zhuǎn)/分鐘離心2分鐘，吸出上清，管底細胞用新鮮培養(yǎng)基懸浮細胞后移回培養(yǎng)瓶。
細胞出現(xiàn)問題，不予以重發(fā)的情況有哪些？
（1）客戶造成細胞污染，不重發(fā)；
（2）客戶不正確操作致細胞狀態(tài)不好，不重發(fā)；
（3）非推薦細胞培養(yǎng)體系致的細胞狀態(tài)不好，不重發(fā)；
（4）細胞狀態(tài)不好，未提供細胞培養(yǎng)前3天照片的，不重發(fā)；
（5）細胞培養(yǎng)時經(jīng)其它處理的，不重發(fā)；
（6）細胞收到2天內(nèi)，未告知，不重發(fā)；
（7）視具體情況而定。
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RAG-2*人重組激活基因2規(guī)格48T/96T

RAG-1*人重組激活基因1規(guī)格48T/96T

NE-B*人重酒石酸去甲腎上腺素規(guī)格48T/96T

TAF*人腫瘤血管生長因子規(guī)格48T/96T

TAA*人腫瘤相關(guān)抗原規(guī)格48T/96T

TSA*人腫瘤特異性抗原規(guī)格48T/96T

TSGF*人腫瘤特異生長因子/腫瘤相關(guān)因子規(guī)格48T/96T

TRANCE*人腫瘤壞死因子相關(guān)激活誘導(dǎo)因子規(guī)格48T/96T

TRAIL-R4*人腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體4規(guī)格48T/96T

TRAIL-R3*人腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體3規(guī)格48T/96T
SV40轉(zhuǎn)染人成骨細胞；hFOB 1.19培養(yǎng)肝臟型脂肪酸結(jié)合蛋白抗原LFABP/FABP-1(LiverFattyacidbindingprotein)肝臟型脂肪酸結(jié)合蛋白抗原0.5mgLFABP/FABP-1(LiverFattyacidbindingprotein

肝臟型脂肪酸結(jié)合蛋白抗原LFABP/FABP-2(LiverFattyacidbindingprotein)肝臟型脂肪酸結(jié)合蛋白抗原0.5mgLFABP/FABP-2(LiverFattyacidbindingprotein

Lgr5/GPR49腸上皮干細胞蛋白（多肽）0.5mgLgr5/GPR49腸上皮干細胞蛋白（多肽

LH(LuteinizingHormone)人促黃體生成素(多肽)0.5mgLH(LuteinizingHormone

促黃體生成素抗原LH(LuteinizingHormone)促黃體生成素抗原0.5mgLH(LuteinizingHormone

人促黃體生成素受體抗原LH/CGReceptor(LuteinizingHormone/ChoriogonadotropinReceptor)人促黃體生成素受體抗原0.5mgLH/CGReceptor(LuteinizingHormone/ChoriogonadotropinReceptor

L-組氨酸脫羧酶抗原L-HDC(L-Histidinedecarboxylase)L-組氨酸脫羧酶抗原0.5mgL-HDC(L-Histidinedecarboxylase

肝腸鈣粘連蛋白抗原LI-cadherin(liver-intestinecadherin)肝腸鈣粘連蛋白抗原0.5mgLI-cadherin(liver-intestinecadherin
冷凍保存細胞之方法：
SV40轉(zhuǎn)染人成骨細胞；hFOB 1.19培養(yǎng)冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。