細胞培養操作規程: 一.培養基及培養凍存條件準備: 1)人肝永生化細胞;THLE-3說明書準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640:GIBCO,貨號21875-091),90%;優質胎牛血清,10%。 2)培養條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養箱濕度為70%-80%。 3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現用現配,液氮儲存。 二.細胞處理: 1)復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準備好的含有4mL培養基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養基的培養瓶中培養過夜。第二天換液并檢查細胞密度。 2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養。 對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法: 方法一:收集細胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。 產品描述: 細胞名稱 人肝永生化細胞;THLE-3說明書 形態特性上皮細胞 生長特性貼壁生長 特征特性THLE-2(ATCCCRL-10149和THLE-3(ATCCCRL-11233)細胞系是正常肝細胞用SV40大T抗原轉染得到。將含有SV40T抗原的BglI-HpaI片段的逆轉錄病毒載體導入兼嗜性包裝細胞株PA317中病毒。THLE-2andTHLE-3表達正常肝上皮細胞特征性的表型。當注射到無胸腺裸鼠中時,它們不成瘤,具有接近二倍體的核型,不表達甲胎蛋白。THLE-2andTHLE-3將benzo[a]pyrene,N-nitrosodimet 培養條件CloneticsCorporation,Walkersville,MD21793的BEGM培養基(目錄號CC3170)。套裝包含了500毫升基本培養基及分別凍存的添加劑,我們不用其中的GA和Epinephrine但另外添加了5ng/mlEGF,70ng/mlPhosphoethanolamine。 傳代方法消化3-5分鐘。1:2。3天內可長滿。 傳代情況PN5 凍存條件*培養基+8%DMSO 支原體檢測陰性 STR 同工酶 染色體
注意事項: ?1.一般客戶拿到人肝永生化細胞;THLE-3說明書后,應該注意什么? 客戶收到細胞先不開蓋,放在培養箱靜置若干小時后(看細胞密度而定)在倒置顯微鏡下觀察細胞生長情況,并對細胞進行不同倍數拍照(建議受收細胞時的培養基拍一張照片,觀察培養基的顏色和是否有漏液情況,顯微鏡下拍細胞100X,200X各一張),排除細胞本身污染的情況;收到細胞未開封,出現污染狀況我們負責免費發送一株細胞。 收到細胞時如無異常情況,請在顯微鏡下觀察細胞密度,如為貼壁細胞,未超過80%匯合度時,將培養瓶中培養液吸出,留下10ml培養液繼續培養;超過80%匯合度時,請按細胞培養條件傳代培養。如為懸浮細胞,吸出培養液、1000轉/分鐘離心2分鐘,吸出上清,管底細胞用新鮮培養基懸浮細胞后移回培養瓶。 細胞出現問題,不予以重發的情況有哪些? (1)客戶造成細胞污染,不重發; (2)客戶不正確操作致細胞狀態不好,不重發; (3)非推薦細胞培養體系致的細胞狀態不好,不重發; (4)細胞狀態不好,未提供細胞培養前3天照片的,不重發; (5)細胞培養時經其它處理的,不重發; (6)細胞收到2天內,未告知,不重發; (7)視具體情況而定。 我司常期代理ATCC Acris abcam cst Biorbyt santa Novus sigma lifespan NEB roche ABI R&D millipore BD Qiagen Cayman Jackson Life GeneTex Bio-Rad DSHB tocris peprotech 等品牌;部分產品現貨,超低比價,人肝永生化細胞;THLE-3說明書貨期短,價格優,售后齊全。點擊進入了解更多轉化細胞。 hs-CRP*兔超敏C反應蛋白規格48T/96T C3*兔補體蛋白3規格48T/96T PY*兔吡啶交聯物規格48T/96T Cys-C*兔半胱氨酸蛋白酶抑制劑/胱抑素C規格48T/96T IL-17*兔白介素17規格48T/96T ADR*兔阿霉素規格48T/96T Aβ1-40*兔β淀粉樣蛋白1-40規格48T/96T p53*兔p53規格48T/96T BAX*兔Bcl-2相關X蛋白規格48T/96T 8-epi-PGF2α*兔8-異構前列腺素規格48T/96T 人肝永生化細胞;THLE-3說明書IntegrinalphaV巨噬細胞來源的趨化因子αV多肽IntegrinalphaV巨噬細胞來源的趨化因子αV多肽0.5mgIntegrinalphaV巨噬細胞來源的趨化因子αV多肽 IntegrinalphaV/CD51peptide整合素αV抗原IntegrinalphaV/CD51peptide整合素αV抗原0.5mgIntegrinalphaV/CD51peptide整合素αV抗原 IntegrinAlpha3整合素α3抗原IntegrinAlpha3整合素α3抗原0.5mgIntegrinAlpha3整合素α3抗原 整合素α4β7抗原IntegrinAlpha4Beta7/LPAM-1(LymphocytePeyer’spatchAdhesionMolecule1/Integrinalpha4,beta7)整合素α4β7抗原0.5mgIntegrinAlpha4Beta7/LPAM-1(LymphocytePeyer’spatchAdhesionMolecule1/Integrinalpha4,beta7 粘附分子整合素α5抗原IntegrinAlpha5(ITG-AlphaV/CD49e)粘附分子整合素α5抗原0.5mgIntegrinAlpha5(ITG-AlphaV/CD49e IntegrinAlphaE2/CD103整合素αE2抗原IntegrinAlphaE2/CD103整合素αE2抗原0.2mlIntegrinAlphaE2/CD103整合素αE2抗原 IntegrinBetachain(ITG-Beta3/ITGB3)整合素-β3(抗原)0.5mgIntegrinBetachain(ITG-Beta3/ITGB3 粘附分子整合素β1抗原integrinBeta1(ITG-Beta1/CD29)粘附分子整合素β1抗原0.5mgintegrinBeta1(ITG-Beta1/CD29 冷凍保存細胞之方法: 人肝永生化細胞;THLE-3說明書冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ (-20 ℃30 分鐘*) → -80 ℃16~18 小時(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 長期儲存。 冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下, 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時, 以防止冰晶過大,造成細胞大量死亡,亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,惟存活率稍微降低一些。 |