水牛源性成分探針法熒光定量PCR試劑盒

實時熒光定量PCR：

實時熒光定量PCR技術有效地解決了傳統(tǒng)定量只能終點檢測的局限，實現(xiàn)了每一輪循環(huán)均檢測一次熒光信號的強度，并記錄在電腦軟件之中，通過對每個樣品Ct值的計算，根據(jù)標準曲線獲得定量結果。因此，實時熒光定量PCR無需內(nèi)標是建立在兩個基礎之上的：
1）Ct值的重現(xiàn)性PCR循環(huán)在到達Ct值所在的循環(huán)數(shù)時，剛剛進入真正的指數(shù)擴增期（對數(shù)期），此時微小誤差尚未放大，因此Ct值的重現(xiàn)性*，即同一模板不同時間擴增或同一時間不同管內(nèi)擴增，得到的Ct值是恒定的。
2）Ct值與起始模板的線性關系由于Ct值與起始模板的對數(shù)存在線性關系，可利用標準曲線對未知樣品進行定量測定，因此，實時熒光定量PCR是一種采用外標準曲線定量的方法。
外標準曲線的定量方法相比內(nèi)標法是一種準確的、值得信賴的科學方法。利用外標準曲線的實時熒光定量PCR是迄今為止定量準確，重現(xiàn)性的定量方法，已得到*的*，廣泛用于基因表達研究、轉基因研究，藥物療效考核、病原體檢測等諸多領域。
熒光化學物質(zhì)：
實時熒光定量PCR所使用的熒光物質(zhì)可分為兩種：熒光探針和熒光染料。現(xiàn)將其原理簡述如下：
1. TaqMan熒光探針：PCR擴增時在加入一對引物的同時加入一個特異性的熒光探針，該探針為一寡核苷酸，兩端分別標記一個報告熒光基團和一個淬滅熒光基團。探針完整時，報告基團發(fā)射的熒光信號被淬滅基團吸收；PCR擴增時，Taq酶的5'－3'外切酶活性將探針酶切降解，使報告熒光基團和淬滅熒光基團分離，從而熒光監(jiān)測系統(tǒng)可接收到熒光信號，即每擴增一條DNA鏈，就有一個熒光分子形成，實現(xiàn)了熒光信號的累積與PCR產(chǎn)物形成*同步。而新型TaqMan-MGB探針使該技術既可進行基因定量分析，又可分析基因突變（SNP），有望成為基因診斷和個體化用藥分析的技術平臺。
2. SYBR熒光染料：在PCR反應體系中，加入過量SYBR熒光染料，SYBR熒光染料非特異性地摻入DNA雙鏈后，發(fā)射熒光信號，而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會發(fā)射任何熒光信號，從而保證熒光信號的增加與PCR產(chǎn)物的增加*同步。SYBR僅與雙鏈DNA進行結合，因此可以通過溶解曲線，確定PCR反應是否特異。
3. 分子信標：是一種在5和3末端自身形成一個8個堿基左右的發(fā)夾結構的莖環(huán)雙標記寡核苷酸探針，兩端的核酸序列互補配對，導致熒光基團與淬滅基團緊緊靠近，不會產(chǎn)生熒光。PCR產(chǎn)物生成后，退火過程中，分子信標中間部分與特定DNA序列配對，熒光基因與淬滅基因分離產(chǎn)生熒光 。

熒光定量PCR服務：
公司推出，該技術不僅實現(xiàn)了PCR從定性到定量的飛躍，而且與常規(guī)PCR相比，它具有特異性更強、有效解決PCR污染問題、自動化程度高等特點，目前該技術已被廣泛用于檢測細胞mRNA表達量的變化；比較不同組織的mRNA表達差異；驗證基因芯片，siRNA干擾的實驗結果等。我公司為您提供全套實時熒光定量PCR技術服務，全部實驗皆使用進口試劑完成，主要定量PCR儀器。
1、熒光定量PCR服務要求：
（01）請您提供新鮮的且盡量多的材料；或直接提供純化好的總RNA（大于 5 ug/樣品）；或直接提供純化好的DNA（大于 5 ug/樣品）。
（02）請?zhí)峁┮阎娜L基因序列。
（03）請?zhí)峁┍M可能詳細的背景資料：DNA/RNA 來源等
2、熒光定量PCR操作程序
（01）引物（探針）設計與合成。
（02）提取DNA/RNA，樣本逆轉錄成cDNA。
（03）進行Real Time PCR實驗，進行實驗結果分析。
（04）實驗完成后，提供完整的實驗報告（含軟件分析結果）及引物等實驗材料。
3、熒光定量PCR的收費標準：
  我公司根據(jù)客戶的樣品數(shù)量進行不同的收費標準。

香豆內(nèi)酯，英文名或英文縮寫：Coumarin，級別：IND，0.04%，規(guī)格：25克  HumanFreei-iodothyronineIndes,Free-T3ELISAKit人游離*狀腺原氨酸(Free-T3)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

1822-00-0基硅甲基(TRImetxYLSILYL)metxYLlitxium  貓α干擾素(IFN-α)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

SUCROSE蔗糖蛋白組學級白色精細結晶RTsigma  人整合素αⅤβ3(ITG αⅤβ3)免疫試劑盒 Human Iegrin αⅤβ3,ITG αⅤβ3 ELISA Kit

α-己基肉桂醛 α-Hexylcinnamaldehyde,≥95% 101-86-0 25ML 通用試劑  連蛋白(zonulin)ELISA試劑盒 ，英文名： zonulin ELISA Kit

二氫鋅/Zinc phosphate monobasic CP，19-25% 500克 國產(chǎn)/進口  Ratcholesterolesteransferprotein,CETPELISA試劑盒大鼠血管緊張素原(aGT)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
免疫血清兔抗人γ鏈shēng huà shì jì容量：500克  大鼠鈣腔蛋白(CALU)免疫試劑盒 Rat Calumenin,CALU ELISA kit

CollagenTypeI 500mg/1g/5g/10g Sigma C9879  CLIAKitforVB12(HumanVitaminB12)ELISAKit人維生素B12規(guī)格：48T/96T

四乙酰核糖500克  明膠載玻片10片

茜速皇R;隊肖基本偶氮水楊醋或內(nèi)鹽 clizcrin yqllow R;clizcrin yqllow RW;clizcrin orcngq;2-xy7noxy-5-[(4-nitnophqnyl)czo]bqnzoic ccid;5-(p-nitnophqnylczo)sclicylic ccid;C.I.Mordcnt orcngq 1、C.I. 14030; 1718-34-9  ELISAKitGS-ANA人粒細胞特異性抗核抗體規(guī)格：48T/96T

環(huán)孢菌速分離度用混合物;環(huán)孢速分離度用混合物 Cyclosporinq Rqsolution Mixturq 29862-13-3  小鼠BMP結合內(nèi)皮調(diào)節(jié)因子(BMPER)ELISA試劑盒 ，英文名： BMPER ELISA Kit
二乙酰基，英文名或英文縮寫：2,4-Pentanedione，級別：BR，規(guī)格：2克  Humanglialfibrillaryacidicprotein,GFAPELISA試劑盒人膽固醇酯轉移蛋白(CETP)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

PEG400 200g Sigma分裝  組織長鏈脂酰輔酶A脫氫酶(ACYLCOADEHYDROGENASE)活性比色法定量檢測試劑盒20次

AMMONIUMSULFATE胺蛋白組學級1KG7783-20-2RT  HumanMyeloidProgenitorInhibitoryFactor1，MPIF-1ELISAKit人骨髓抑制因子1(MPIF-1/CCL23)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

四甘醇 Bis[2-(2-xy7noxyqthoxy)qthyl] qtqr 11-60-7  兔內(nèi)皮素(Endothelin-1)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

3-AminobutanoicacidDL-3-基正100克BR，98%  Human platelet factor 4 (PF-4/CXCL4) ELISA Kit 人血小板因子4(PF-4/CXCL4)ELISA試劑盒
水牛源性成分探針法熒光定量PCR試劑盒Thrombin凝血活素5毫克BR，30u/mg  人1,3-二甘油酸(1,3-DPG)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

118-00-3鳥苷2-Amino-9-beta-D-ribofuranosyl-9H-purine-6-(1H)-one hydrate  山羊前列腺素G/H合酶2(PTGS2)免疫試劑盒 Goat Prostaglandin G/H syhase 2,PTGS2 ELISA kit

40%純度錄化溶液shēng huà shì jì容量：1米  黏著斑激酶(FAK)ELISA試劑盒 ，英文名： FAK ELISA Kit

2-叔丁基 2-tert-Butylphenol,99% 88-18-6 100ML 通用試劑  RabbitTissuefactorpathwayinhibitor,TFPIELISA試劑盒兔組織因子途徑抑制物(TFPI)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

馬脾鐵蛋白/鐵蛋白(馬脾)/ Ferritin from horse spleen/HSF BR 25毫克 國產(chǎn)/進口  HumanB-LymphocyteChemoatacta1,BLC-1ELISA試劑盒人B-淋巴細胞趨化因子1(BLC-1/CXCL13)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

幾種傳統(tǒng)熒光定量PCR方法簡介：

1）內(nèi)參照法：
在不同的PCR反應管中加入已定量的內(nèi)標和引物，內(nèi)標用基因工程方法合成。上游引物用熒光標記，下游引物不標記。在模板擴增的同時，內(nèi)標也被擴增。在PCR產(chǎn)物中，由于內(nèi)標與靶模板的長度不同，二者的擴增產(chǎn)物可用電泳或高效液相分離開來，分別測定其熒光強度，以內(nèi)標為對照定量待檢測模板。
2）競爭法：
選擇由突變克隆產(chǎn)生的含有一個新內(nèi)切位點的外源競爭性模板。在同一反應管中，待測樣品與競爭模板用同一對引物同時擴增（其中一個引物為熒光標記）。擴增后用內(nèi)切酶消化PCR產(chǎn)物，競爭性模板的產(chǎn)物被酶解為兩個片段，而待測模板不被酶切，可通過電泳或高效液相將兩種產(chǎn)物分開，分別測定熒光強度，根據(jù)已知模板推測未知模板的起始拷貝數(shù)。
3）PCR－ELISA法：
利用或生物素等標記引物，擴增產(chǎn)物被固相板上特異的探針所結合，再加入抗或生物素酶標抗體－辣根過氧化物酶結合物，終酶使底物顯色。常規(guī)的PCR－ELISA法只是定性實驗，若加入內(nèi)標，作出標準曲線，也可實現(xiàn)定量檢測目的。