產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 貨號(hào) | 水牛源性成分探針法熒光定量PCR試劑盒 | | EY-P7430 |
實(shí)時(shí)熒光定量PCR: 實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)有效地解決了傳統(tǒng)定量只能終點(diǎn)檢測(cè)的局限,實(shí)現(xiàn)了每一輪循環(huán)均檢測(cè)一次熒光信號(hào)的強(qiáng)度,并記錄在電腦軟件之中,通過對(duì)每個(gè)樣品Ct值的計(jì)算,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線獲得定量結(jié)果。因此,實(shí)時(shí)熒光定量PCR無需內(nèi)標(biāo)是建立在兩個(gè)基礎(chǔ)之上的: 1)Ct值的重現(xiàn)性PCR循環(huán)在到達(dá)Ct值所在的循環(huán)數(shù)時(shí),剛剛進(jìn)入真正的指數(shù)擴(kuò)增期(對(duì)數(shù)期),此時(shí)微小誤差尚未放大,因此Ct值的重現(xiàn)性*,即同一模板不同時(shí)間擴(kuò)增或同一時(shí)間不同管內(nèi)擴(kuò)增,得到的Ct值是恒定的。 2)Ct值與起始模板的線性關(guān)系由于Ct值與起始模板的對(duì)數(shù)存在線性關(guān)系,可利用標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知樣品進(jìn)行定量測(cè)定,因此,實(shí)時(shí)熒光定量PCR是一種采用外標(biāo)準(zhǔn)曲線定量的方法。 外標(biāo)準(zhǔn)曲線的定量方法相比內(nèi)標(biāo)法是一種準(zhǔn)確的、值得信賴的科學(xué)方法。利用外標(biāo)準(zhǔn)曲線的實(shí)時(shí)熒光定量PCR是迄今為止定量準(zhǔn)確,重現(xiàn)性的定量方法,已得到*的*,廣泛用于基因表達(dá)研究、轉(zhuǎn)基因研究,藥物療效考核、病原體檢測(cè)等諸多領(lǐng)域。 熒光化學(xué)物質(zhì): 實(shí)時(shí)熒光定量PCR所使用的熒光物質(zhì)可分為兩種:熒光探針和熒光染料?,F(xiàn)將其原理簡述如下: 1. TaqMan熒光探針:PCR擴(kuò)增時(shí)在加入一對(duì)引物的同時(shí)加入一個(gè)特異性的熒光探針,該探針為一寡核苷酸,兩端分別標(biāo)記一個(gè)報(bào)告熒光基團(tuán)和一個(gè)淬滅熒光基團(tuán)。探針完整時(shí),報(bào)告基團(tuán)發(fā)射的熒光信號(hào)被淬滅基團(tuán)吸收;PCR擴(kuò)增時(shí),Taq酶的5'-3'外切酶活性將探針酶切降解,使報(bào)告熒光基團(tuán)和淬滅熒光基團(tuán)分離,從而熒光監(jiān)測(cè)系統(tǒng)可接收到熒光信號(hào),即每擴(kuò)增一條DNA鏈,就有一個(gè)熒光分子形成,實(shí)現(xiàn)了熒光信號(hào)的累積與PCR產(chǎn)物形成*同步。而新型TaqMan-MGB探針使該技術(shù)既可進(jìn)行基因定量分析,又可分析基因突變(SNP),有望成為基因診斷和個(gè)體化用藥分析的技術(shù)平臺(tái)。 2. SYBR熒光染料:在PCR反應(yīng)體系中,加入過量SYBR熒光染料,SYBR熒光染料非特異性地?fù)饺隓NA雙鏈后,發(fā)射熒光信號(hào),而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會(huì)發(fā)射任何熒光信號(hào),從而保證熒光信號(hào)的增加與PCR產(chǎn)物的增加*同步。SYBR僅與雙鏈DNA進(jìn)行結(jié)合,因此可以通過溶解曲線,確定PCR反應(yīng)是否特異。 3. 分子信標(biāo):是一種在5和3末端自身形成一個(gè)8個(gè)堿基左右的發(fā)夾結(jié)構(gòu)的莖環(huán)雙標(biāo)記寡核苷酸探針,兩端的核酸序列互補(bǔ)配對(duì),導(dǎo)致熒光基團(tuán)與淬滅基團(tuán)緊緊靠近,不會(huì)產(chǎn)生熒光。PCR產(chǎn)物生成后,退火過程中,分子信標(biāo)中間部分與特定DNA序列配對(duì),熒光基因與淬滅基因分離產(chǎn)生熒光 。
熒光定量PCR服務(wù): 公司推出,該技術(shù)不僅實(shí)現(xiàn)了PCR從定性到定量的飛躍,而且與常規(guī)PCR相比,它具有特異性更強(qiáng)、有效解決PCR污染問題、自動(dòng)化程度高等特點(diǎn),目前該技術(shù)已被廣泛用于檢測(cè)細(xì)胞mRNA表達(dá)量的變化;比較不同組織的mRNA表達(dá)差異;驗(yàn)證基因芯片,siRNA干擾的實(shí)驗(yàn)結(jié)果等。我公司為您提供全套實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)服務(wù),全部實(shí)驗(yàn)皆使用進(jìn)口試劑完成,主要定量PCR儀器。 1、熒光定量PCR服務(wù)要求: (01)請(qǐng)您提供新鮮的且盡量多的材料;或直接提供純化好的總RNA(大于 5 ug/樣品);或直接提供純化好的DNA(大于 5 ug/樣品)。 (02)請(qǐng)?zhí)峁┮阎娜L基因序列。 (03)請(qǐng)?zhí)峁┍M可能詳細(xì)的背景資料:DNA/RNA 來源等 2、熒光定量PCR操作程序 (01)引物(探針)設(shè)計(jì)與合成。 (02)提取DNA/RNA,樣本逆轉(zhuǎn)錄成cDNA。 (03)進(jìn)行Real Time PCR實(shí)驗(yàn),進(jìn)行實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析。 (04)實(shí)驗(yàn)完成后,提供完整的實(shí)驗(yàn)報(bào)告(含軟件分析結(jié)果)及引物等實(shí)驗(yàn)材料。 3、熒光定量PCR的收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn): 我公司根據(jù)客戶的樣品數(shù)量進(jìn)行不同的收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)。 香豆內(nèi)酯,英文名或英文縮寫:Coumarin,級(jí)別:IND,0.04%,規(guī)格:25克 HumanFreei-iodothyronineIndes,Free-T3ELISAKit人游離*狀腺原氨酸(Free-T3)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 1822-00-0基硅甲基(TRImetxYLSILYL)metxYLlitxium 貓α干擾素(IFN-α)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝 SUCROSE蔗糖蛋白組學(xué)級(jí)白色精細(xì)結(jié)晶RTsigma 人整合素αⅤβ3(ITG αⅤβ3)免疫試劑盒 Human Iegrin αⅤβ3,ITG αⅤβ3 ELISA Kit α-己基肉桂醛 α-Hexylcinnamaldehyde,≥95% 101-86-0 25ML 通用試劑 連蛋白(zonulin)ELISA試劑盒 ,英文名: zonulin ELISA Kit 二氫鋅/Zinc phosphate monobasic CP,19-25% 500克 國產(chǎn)/進(jìn)口 Ratcholesterolesteransferprotein,CETPELISA試劑盒大鼠血管緊張素原(aGT)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 免疫血清兔抗人γ鏈shēng huà shì jì容量:500克 大鼠鈣腔蛋白(CALU)免疫試劑盒 Rat Calumenin,CALU ELISA kit CollagenTypeI 500mg/1g/5g/10g Sigma C9879 CLIAKitforVB12(HumanVitaminB12)ELISAKit人維生素B12規(guī)格:48T/96T 四乙酰核糖500克 明膠載玻片10片 茜速皇R;隊(duì)肖基本偶氮水楊醋或內(nèi)鹽 clizcrin yqllow R;clizcrin yqllow RW;clizcrin orcngq;2-xy7noxy-5-[(4-nitnophqnyl)czo]bqnzoic ccid;5-(p-nitnophqnylczo)sclicylic ccid;C.I.Mordcnt orcngq 1、C.I. 14030; 1718-34-9 ELISAKitGS-ANA人粒細(xì)胞特異性抗核抗體規(guī)格:48T/96T 環(huán)孢菌速分離度用混合物;環(huán)孢速分離度用混合物 Cyclosporinq Rqsolution Mixturq 29862-13-3 小鼠BMP結(jié)合內(nèi)皮調(diào)節(jié)因子(BMPER)ELISA試劑盒 ,英文名: BMPER ELISA Kit 二乙酰基,英文名或英文縮寫:2,4-Pentanedione,級(jí)別:BR,規(guī)格:2克 Humanglialfibrillaryacidicprotein,GFAPELISA試劑盒人膽固醇酯轉(zhuǎn)移蛋白(CETP)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T PEG400 200g Sigma分裝 組織長鏈脂酰輔酶A脫氫酶(ACYLCOADEHYDROGENASE)活性比色法定量檢測(cè)試劑盒20次 AMMONIUMSULFATE胺蛋白組學(xué)級(jí)1KG7783-20-2RT HumanMyeloidProgenitorInhibitoryFactor1,MPIF-1ELISAKit人骨髓抑制因子1(MPIF-1/CCL23)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 四甘醇 Bis[2-(2-xy7noxyqthoxy)qthyl] qtqr 11-60-7 兔內(nèi)皮素(Endothelin-1)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝 3-AminobutanoicacidDL-3-基正100克BR,98% Human platelet factor 4 (PF-4/CXCL4) ELISA Kit 人血小板因子4(PF-4/CXCL4)ELISA試劑盒 水牛源性成分探針法熒光定量PCR試劑盒Thrombin凝血活素5毫克BR,30u/mg 人1,3-二甘油酸(1,3-DPG)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝 118-00-3鳥苷2-Amino-9-beta-D-ribofuranosyl-9H-purine-6-(1H)-one hydrate 山羊前列腺素G/H合酶2(PTGS2)免疫試劑盒 Goat Prostaglandin G/H syhase 2,PTGS2 ELISA kit 40%純度錄化溶液shēng huà shì jì容量:1米 黏著斑激酶(FAK)ELISA試劑盒 ,英文名: FAK ELISA Kit 2-叔丁基 2-tert-Butylphenol,99% 88-18-6 100ML 通用試劑 RabbitTissuefactorpathwayinhibitor,TFPIELISA試劑盒兔組織因子途徑抑制物(TFPI)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 馬脾鐵蛋白/鐵蛋白(馬脾)/ Ferritin from horse spleen/HSF BR 25毫克 國產(chǎn)/進(jìn)口 HumanB-LymphocyteChemoatacta1,BLC-1ELISA試劑盒人B-淋巴細(xì)胞趨化因子1(BLC-1/CXCL13)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 幾種傳統(tǒng)熒光定量PCR方法簡介: 1)內(nèi)參照法: 在不同的PCR反應(yīng)管中加入已定量的內(nèi)標(biāo)和引物,內(nèi)標(biāo)用基因工程方法合成。上游引物用熒光標(biāo)記,下游引物不標(biāo)記。在模板擴(kuò)增的同時(shí),內(nèi)標(biāo)也被擴(kuò)增。在PCR產(chǎn)物中,由于內(nèi)標(biāo)與靶模板的長度不同,二者的擴(kuò)增產(chǎn)物可用電泳或高效液相分離開來,分別測(cè)定其熒光強(qiáng)度,以內(nèi)標(biāo)為對(duì)照定量待檢測(cè)模板。 2)競爭法: 選擇由突變克隆產(chǎn)生的含有一個(gè)新內(nèi)切位點(diǎn)的外源競爭性模板。在同一反應(yīng)管中,待測(cè)樣品與競爭模板用同一對(duì)引物同時(shí)擴(kuò)增(其中一個(gè)引物為熒光標(biāo)記)。擴(kuò)增后用內(nèi)切酶消化PCR產(chǎn)物,競爭性模板的產(chǎn)物被酶解為兩個(gè)片段,而待測(cè)模板不被酶切,可通過電泳或高效液相將兩種產(chǎn)物分開,分別測(cè)定熒光強(qiáng)度,根據(jù)已知模板推測(cè)未知模板的起始拷貝數(shù)。 3)PCR-ELISA法: 利用或生物素等標(biāo)記引物,擴(kuò)增產(chǎn)物被固相板上特異的探針?biāo)Y(jié)合,再加入抗或生物素酶標(biāo)抗體-辣根過氧化物酶結(jié)合物,終酶使底物顯色。常規(guī)的PCR-ELISA法只是定性實(shí)驗(yàn),若加入內(nèi)標(biāo),作出標(biāo)準(zhǔn)曲線,也可實(shí)現(xiàn)定量檢測(cè)目的。 |