細胞培養操作規程: 一.培養基及培養凍存條件準備: 1)EB病毒轉化的人B淋巴細胞;KM9803說明書準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640:GIBCO,貨號21875-091),90%;優質胎牛血清,10%。 2)培養條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養箱濕度為70%-80%。 3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現用現配,液氮儲存。 二.細胞處理: 1)復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準備好的含有4mL培養基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養基的培養瓶中培養過夜。第二天換液并檢查細胞密度。 2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養。 對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法: 方法一:收集細胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。 產品描述: 細胞名稱 EB病毒轉化的人B淋巴細胞;KM9803說明書 形態特性淋巴母細胞樣 生長特性懸浮生長 特征特性該細胞來源于一正常男性的外周血。1998年由中國科學院昆明細胞庫通過EB病毒轉化的方法建立。 培養條件RPMI1640(w/oHepes)15%NBS 傳代方法1:2傳代;5-6天一次 傳代情況P8 凍存條件基礎培養基+5%DMSO+20%FBS 支原體檢測熒光法(-) STR- 同工酶 染色體
注意事項: ?1.一般客戶拿到EB病毒轉化的人B淋巴細胞;KM9803說明書后,應該注意什么? 客戶收到細胞先不開蓋,放在培養箱靜置若干小時后(看細胞密度而定)在倒置顯微鏡下觀察細胞生長情況,并對細胞進行不同倍數拍照(建議受收細胞時的培養基拍一張照片,觀察培養基的顏色和是否有漏液情況,顯微鏡下拍細胞100X,200X各一張),排除細胞本身污染的情況;收到細胞未開封,出現污染狀況我們負責免費發送一株細胞。 收到細胞時如無異常情況,請在顯微鏡下觀察細胞密度,如為貼壁細胞,未超過80%匯合度時,將培養瓶中培養液吸出,留下10ml培養液繼續培養;超過80%匯合度時,請按細胞培養條件傳代培養。如為懸浮細胞,吸出培養液、1000轉/分鐘離心2分鐘,吸出上清,管底細胞用新鮮培養基懸浮細胞后移回培養瓶。 細胞出現問題,不予以重發的情況有哪些? (1)客戶造成細胞污染,不重發; (2)客戶不正確操作致細胞狀態不好,不重發; (3)非推薦細胞培養體系致的細胞狀態不好,不重發; (4)細胞狀態不好,未提供細胞培養前3天照片的,不重發; (5)細胞培養時經其它處理的,不重發; (6)細胞收到2天內,未告知,不重發; (7)視具體情況而定。 我司常期代理ATCC Acris abcam cst Biorbyt santa Novus sigma lifespan NEB roche ABI R&D millipore BD Qiagen Cayman Jackson Life GeneTex Bio-Rad DSHB tocris peprotech 等品牌;部分產品現貨,超低比價,EB病毒轉化的人B淋巴細胞;KM9803說明書貨期短,價格優,售后齊全。點擊進入了解更多轉化細胞。 IGF-2*兔子胰島素樣生長因子2規格48T/96T IGF-1*兔子胰島素樣生長因子1規格48T/96T INS*兔子胰島素規格48T/96T OxLDL*兔子氧化低密度脂蛋白規格48T/96T PF-4/CXCL4*兔子血小板因子4規格48T/96T PDGF*兔子血小板衍生生長因子規格48T/96T PAF*兔子血小板活化因子規格48T/96T FDP*兔子血纖蛋白原降解產物規格48T/96T TM*兔子血栓調節蛋白規格48T/96T PAI-1*兔子纖溶酶原激活物抑制因子1規格48T/96T EB病毒轉化的人B淋巴細胞;KM9803說明書HCLS1造血干細胞特異性蛋白HCLS1造血干細胞特異性蛋白0.5mgHCLS1造血干細胞特異性蛋白 人巨細胞病毒UL23抗原HCMVUL23/HHV5UL23(HumanCytomegalovirusUL23Gene)人巨細胞病毒UL23抗原0.5mgHCMVUL23/HHV5UL23(HumanCytomegalovirusUL23Gene 人巨細胞病毒UL49抗原HCMVUL49(HumanCytomegalovirusUL49Gene)人巨細胞病毒UL49抗原0.5mgHCMVUL49(HumanCytomegalovirusUL49Gene HCV-Core丙型肝炎病毒-C區(多肽)1mgHCV-Core丙型肝炎病毒-C區(多肽 HCV-HCBP1/ACY-3(HepatitisCviruscore-bindingprotein1)丙型肝炎病毒核心蛋白結合蛋白-1(抗原)0.5mgHCV-HCBP1/ACY-3(HepatitisCviruscore-bindingprotein1 HCV-NS1丙型肝炎病毒-NS1(抗原)0.5mgHCV-NS1丙型肝炎病毒-NS1(抗原 HCV-NS3丙型肝炎病毒-NS3(抗原)0.5mgHCV-NS3丙型肝炎病毒-NS3(抗原 HCV-NS4a丙型肝炎病毒-NS4a(抗原)0.5mgHCV-NS4a丙型肝炎病毒-NS4a(抗原 冷凍保存細胞之方法: EB病毒轉化的人B淋巴細胞;KM9803說明書冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ (-20 ℃30 分鐘*) → -80 ℃16~18 小時(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 長期儲存。 冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下, 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時, 以防止冰晶過大,造成細胞大量死亡,亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,惟存活率稍微降低一些。 |