細胞培養(yǎng)操作規(guī)程: 一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備: 1)EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細胞;KMYM價格準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號21875-091),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。 2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。 3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲存。 二.細胞處理: 1)復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。 2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。 對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法: 方法一:收集細胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。 產(chǎn)品描述: 細胞名稱 EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細胞;KMYM價格 形態(tài)特性淋巴母細胞樣 生長特性懸浮生長 特征特性該細胞系來源于一成年女性的外周血。2009年由中科院昆明細胞庫通過EB病毒轉(zhuǎn)化的方法建立。 培養(yǎng)條件RPMI1640(w/oHepes)15%NBS 傳代方法1:2傳代;5-6天一次 傳代情況P2 凍存條件基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS 支原體檢測熒光法(-) STR- 同工酶 染色體
注意事項: ?1.一般客戶拿到EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細胞;KMYM價格后,應該注意什么? 客戶收到細胞先不開蓋,放在培養(yǎng)箱靜置若干小時后(看細胞密度而定)在倒置顯微鏡下觀察細胞生長情況,并對細胞進行不同倍數(shù)拍照(建議受收細胞時的培養(yǎng)基拍一張照片,觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況,顯微鏡下拍細胞100X,200X各一張),排除細胞本身污染的情況;收到細胞未開封,出現(xiàn)污染狀況我們負責免費發(fā)送一株細胞。 收到細胞時如無異常情況,請在顯微鏡下觀察細胞密度,如為貼壁細胞,未超過80%匯合度時,將培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)液吸出,留下10ml培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng);超過80%匯合度時,請按細胞培養(yǎng)條件傳代培養(yǎng)。如為懸浮細胞,吸出培養(yǎng)液、1000轉(zhuǎn)/分鐘離心2分鐘,吸出上清,管底細胞用新鮮培養(yǎng)基懸浮細胞后移回培養(yǎng)瓶。 細胞出現(xiàn)問題,不予以重發(fā)的情況有哪些? (1)客戶造成細胞污染,不重發(fā); (2)客戶不正確操作致細胞狀態(tài)不好,不重發(fā); (3)非推薦細胞培養(yǎng)體系致的細胞狀態(tài)不好,不重發(fā); (4)細胞狀態(tài)不好,未提供細胞培養(yǎng)前3天照片的,不重發(fā); (5)細胞培養(yǎng)時經(jīng)其它處理的,不重發(fā); (6)細胞收到2天內(nèi),未告知,不重發(fā); (7)視具體情況而定。 15-LO/LOX*小鼠15脂加氧酶規(guī)格48T/96T 1,3-βDglu*小鼠1,3-βD葡葡糖苷酶規(guī)格48T/96T PSA*豌豆凝集素規(guī)格48T/96T HIS*豚鼠組胺規(guī)格48T/96T TGF-β1*豚鼠轉(zhuǎn)化生長因子β1規(guī)格48T/96T MHC/GPLA*豚鼠主要組織相容性復合體規(guī)格48T/96T TNF-α*豚鼠腫瘤壞死因子α規(guī)格48T/96T CH50*豚鼠血清總補體規(guī)格48T/96T NO*豚鼠血清一氧化氮規(guī)格48T/96T PAP*豚鼠纖溶酶抗纖溶酶復合物規(guī)格48T/96T EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細胞;KMYM價格葡萄糖轉(zhuǎn)運蛋白3抗原GLUT3(Glucosetransporter3)葡萄糖轉(zhuǎn)運蛋白3抗原0.5mgGLUT3(Glucosetransporter3 GLUT4(Glucosetransportertype4)葡萄糖轉(zhuǎn)運蛋白4(抗原)0.5mgGLUT4(Glucosetransportertype4 [Rubellavirus]風疹病毒糖蛋白多肽片段glycoprotein(E1glycoprotein)[Rubellavirus]風疹病毒糖蛋白多肽片段0.5mgglycoprotein(E1glycoprotein glypican1磷脂酰基醇蛋白聚糖-1抗原glypican1磷脂酰基醇蛋白聚糖-1抗原0.5mgglypican1磷脂酰基醇蛋白聚糖-1抗原 磷脂酰基醇蛋白聚糖-4抗原Glypican4(Glypicanproteoglycan4)磷脂酰基醇蛋白聚糖-4抗原0.5mgGlypican4(Glypicanproteoglycan4 粒細胞-巨噬細胞克隆刺激因子抗原GM-CSF(Granulocyte-MacrophageColonyStimulatingFactors)粒細胞-巨噬細胞克隆刺激因子抗原0.5mgGM-CSF(Granulocyte-MacrophageColonyStimulatingFactors GnRHRpeptide促性腺激素釋放激素受體抗原GnRHRpeptide促性腺激素釋放激素受體抗原0.5mgGnRHRpeptide促性腺激素釋放激素受體抗原 gp130/IL-6R白介素-6受體抗原gp130/IL-6R白介素-6受體抗原0.5mggp130/IL-6R白介素-6受體抗原 冷凍保存細胞之方法: EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細胞;KMYM價格冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ (-20 ℃30 分鐘*) → -80 ℃16~18 小時(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 長期儲存。 冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下, 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時, 以防止冰晶過大,造成細胞大量死亡,亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,惟存活率稍微降低一些。 |