細胞培養操作規程: 一.培養基及培養凍存條件準備: 1)人支氣管細胞系;HBE-TT培養準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640:GIBCO,貨號21875-091),90%;優質胎牛血清,10%。 2)培養條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養箱濕度為70%-80%。 3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現用現配,液氮儲存。 二.細胞處理: 1)復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準備好的含有4mL培養基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養基的培養瓶中培養過夜。第二天換液并檢查細胞密度。 2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養。 對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法: 方法一:收集細胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。 產品描述: 細胞名稱 人支氣管細胞系;HBE-TT培養 形態特性上皮樣 生長特性貼壁生長 特征特性該細胞屬保藏,其特征特性尚未公開。 培養條件MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)10%FBS 傳代方法1:3傳代,3-4天傳1次 傳代情況C5 凍存條件基礎培養基+5%DMSO+20%FBS 支原體檢測陰性 STR 同工酶 染色體
注意事項: ?1.一般客戶拿到人支氣管細胞系;HBE-TT培養后,應該注意什么? 客戶收到細胞先不開蓋,放在培養箱靜置若干小時后(看細胞密度而定)在倒置顯微鏡下觀察細胞生長情況,并對細胞進行不同倍數拍照(建議受收細胞時的培養基拍一張照片,觀察培養基的顏色和是否有漏液情況,顯微鏡下拍細胞100X,200X各一張),排除細胞本身污染的情況;收到細胞未開封,出現污染狀況我們負責免費發送一株細胞。 收到細胞時如無異常情況,請在顯微鏡下觀察細胞密度,如為貼壁細胞,未超過80%匯合度時,將培養瓶中培養液吸出,留下10ml培養液繼續培養;超過80%匯合度時,請按細胞培養條件傳代培養。如為懸浮細胞,吸出培養液、1000轉/分鐘離心2分鐘,吸出上清,管底細胞用新鮮培養基懸浮細胞后移回培養瓶。 細胞出現問題,不予以重發的情況有哪些? (1)客戶造成細胞污染,不重發; (2)客戶不正確操作致細胞狀態不好,不重發; (3)非推薦細胞培養體系致的細胞狀態不好,不重發; (4)細胞狀態不好,未提供細胞培養前3天照片的,不重發; (5)細胞培養時經其它處理的,不重發; (6)細胞收到2天內,未告知,不重發; (7)視具體情況而定。 OFQ/N*小鼠孤腓肽規格48T/96T Lebtospira*小鼠鉤端螺旋體IgG規格48T/96T T*小鼠睪酮規格48T/96T u-T4*小鼠高敏甲狀腺素規格48T/96T U-TSH*小鼠高靈敏度促甲狀腺激素規格48T/96T HGF*小鼠肝細胞生長因子規格48T/96T SCFR*小鼠干細胞因子受體規格48T/96T SCF/MGF*小鼠干細胞因子/肥大細胞生長因子規格48T/96T IP-10/CXCL10*小鼠干擾素誘導蛋白10規格48T/96T CCB*小鼠鈣通道阻滯劑規格48T/96T 人支氣管細胞系;HBE-TT培養內皮素轉化酶1抗原ECE1(EndothelinConvertingEnzyme1)內皮素轉化酶1抗原0.5mgECE1(EndothelinConvertingEnzyme1 內皮素轉化酶2抗原ECE2(EndothelinConvertingEnzyme2)內皮素轉化酶2抗原0.5mgECE2(EndothelinConvertingEnzyme2 ECG2(sophaguscancer-relatedgene-2)食道癌相關基因(抗原)0.5mgECG2(sophaguscancer-relatedgene-2 ECG2(sophaguscancer-relatedgene-2)食道癌相關基因(抗原)0.5mgECG2(sophaguscancer-relatedgene-2 mouserat嗜酸性粒細胞陽離子蛋白抗原ECP(eosinophilcationicprotein)mouserat嗜酸性粒細胞陽離子蛋白抗原0.5mgECP(eosinophilcationicprotein 外胚層發育不良抗原ED-1(EctodermalDysplasia1)外胚層發育不良抗原0.5mgED-1(EctodermalDysplasia1 EGF(Epidermalgrowthfactor)rat重組表皮生長因子抗原(大鼠)0.5mgEGF(Epidermalgrowthfactor 類表皮生長因子域7抗原EGFL7(EGF-likedomaincontainingprotein7)類表皮生長因子域7抗原0.5mgEGFL7(EGF-likedomaincontainingprotein7 冷凍保存細胞之方法: 人支氣管細胞系;HBE-TT培養冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ (-20 ℃30 分鐘*) → -80 ℃16~18 小時(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 長期儲存。 冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下, 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時, 以防止冰晶過大,造成細胞大量死亡,亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,惟存活率稍微降低一些。 |