產(chǎn)品描述: 細胞名稱 人胚肺二倍體細胞;HEL-2培養(yǎng) 形態(tài)特性成纖維細胞樣 生長特性貼壁生長 特征特性該細胞系來源于一女性胚胎的肺組織。1986年中國科學(xué)院昆明細胞庫建立。 培養(yǎng)條件DMEM-H:Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)10%FBS 傳代方法1:2傳代;3-4天一次 傳代情況P17 凍存條件基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS 支原體檢測熒光法(-) STR- 同工酶 染色體
冷凍保存細胞之方法: 人胚肺二倍體細胞;HEL-2培養(yǎng)冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ (-20 ℃30 分鐘*) → -80 ℃16~18 小時(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 長期儲存。 冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下, 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時, 以防止冰晶過大,造成細胞大量死亡,亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,惟存活率稍微降低一些。 細胞培養(yǎng)操作規(guī)程: 一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備: 1)人胚肺二倍體細胞;HEL-2培養(yǎng)準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號21875-091),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。 2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。 3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲存。 二.細胞處理: 1)復(fù)蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。 2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。 對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法: 方法一:收集細胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。 MMP-2*小鼠基質(zhì)金屬蛋白酶2/明膠酶A規(guī)格48T/96T MMP-13*小鼠基質(zhì)金屬蛋白酶13規(guī)格48T/96T MMP-10*小鼠基質(zhì)金屬蛋白酶10規(guī)格48T/96T MMP-1*小鼠基質(zhì)金屬蛋白酶1規(guī)格48T/96T Myosin*小鼠肌球蛋白規(guī)格48T/96T MYO/MB*小鼠肌紅蛋白規(guī)格48T/96T MYO/MB*小鼠肌紅蛋白規(guī)格48T/96T Tn-Ⅰ*小鼠肌鈣蛋白Ⅰ規(guī)格48T/96T Activin-A*小鼠活化素A規(guī)格48T/96T APC*小鼠活化蛋白C規(guī)格48T/96T 人胚肺二倍體細胞;HEL-2培養(yǎng)鴨甲型肝炎A病毒抗原DHAV(duckhepatitisAvirus)鴨甲型肝炎A病毒抗原0.5mgDHAV(duckhepatitisAvirus DISC1N端抗原DISC1(disruptedinschizophrenia1)(NT)DISC1N端抗原0.5mgDISC1(disruptedinschizophrenia1 DISC1C端抗原DISC1(disruptedinschizophrenia1)(CT)DISC1C端抗原0.5mgDISC1(disruptedinschizophrenia1 抑癌蛋白DKK1抗原DKK1(Dickkopf1)抑癌蛋白DKK1抗原0.5mgDKK1(Dickkopf1 末梢同源匡基因多肽片段DLX4(Dsital-lesshomebox4isoformAlpha/Beta)末梢同源匡基因多肽片段0.5mgDLX4(Dsital-lesshomebox4isoformAlpha/Beta DMBT1抑癌基因抗原DMBT1(Deletedinmalignantbraintumor1)DMBT1抑癌基因抗原0.5mgDMBT1(Deletedinmalignantbraintumor1 DNA-PKcspeptideDNA依賴蛋白激酶催化亞基多肽抗原DNA-PKcspeptideDNA依賴蛋白激酶催化亞基多肽抗原0.5mgDNA-PKcspeptideDNA依賴蛋白激酶催化亞基多肽抗原 Dnmt3a(cytosine-5)-methyltransferase3A)DNA甲基轉(zhuǎn)移酶-3α(抗原)0.5mgDnmt3a(cytosine-5 注意事項: ?1.一般客戶拿到人胚肺二倍體細胞;HEL-2培養(yǎng)后,應(yīng)該注意什么? 客戶收到細胞先不開蓋,放在培養(yǎng)箱靜置若干小時后(看細胞密度而定)在倒置顯微鏡下觀察細胞生長情況,并對細胞進行不同倍數(shù)拍照(建議受收細胞時的培養(yǎng)基拍一張照片,觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況,顯微鏡下拍細胞100X,200X各一張),排除細胞本身污染的情況;收到細胞未開封,出現(xiàn)污染狀況我們負責(zé)免費發(fā)送一株細胞。 收到細胞時如無異常情況,請在顯微鏡下觀察細胞密度,如為貼壁細胞,未超過80%匯合度時,將培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)液吸出,留下10ml培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng);超過80%匯合度時,請按細胞培養(yǎng)條件傳代培養(yǎng)。如為懸浮細胞,吸出培養(yǎng)液、1000轉(zhuǎn)/分鐘離心2分鐘,吸出上清,管底細胞用新鮮培養(yǎng)基懸浮細胞后移回培養(yǎng)瓶。 細胞出現(xiàn)問題,不予以重發(fā)的情況有哪些? (1)客戶造成細胞污染,不重發(fā); (2)客戶不正確操作致細胞狀態(tài)不好,不重發(fā); (3)非推薦細胞培養(yǎng)體系致的細胞狀態(tài)不好,不重發(fā); (4)細胞狀態(tài)不好,未提供細胞培養(yǎng)前3天照片的,不重發(fā); (5)細胞培養(yǎng)時經(jīng)其它處理的,不重發(fā); (6)細胞收到2天內(nèi),未告知,不重發(fā); (7)視具體情況而定。 |