細胞培養操作規程: 一.培養基及培養凍存條件準備: 1)人胚胎心臟成纖維樣細胞;HEH2圖片準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640:GIBCO,貨號21875-091),90%;優質胎牛血清,10%。 2)培養條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養箱濕度為70%-80%。 3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現用現配,液氮儲存。 二.細胞處理: 1)復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準備好的含有4mL培養基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養基的培養瓶中培養過夜。第二天換液并檢查細胞密度。 2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養。 對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法: 方法一:收集細胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。 產品描述: 細胞名稱 人胚胎心臟成纖維樣細胞;HEH2圖片 形態特性成纖維細胞樣 生長特性貼壁生長 特征特性該細胞系來源于一男性胎兒的心臟組織,2009年由中科院昆明細胞庫建立。 培養條件DMEM-H:Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)15%FBS 傳代方法1:2傳代;3-4天一次 傳代情況P2 凍存條件基礎培養基+5%DMSO+20%FBS 支原體檢測熒光法(-) STR- 同工酶 染色體
注意事項: ?1.一般客戶拿到人胚胎心臟成纖維樣細胞;HEH2圖片后,應該注意什么? 客戶收到細胞先不開蓋,放在培養箱靜置若干小時后(看細胞密度而定)在倒置顯微鏡下觀察細胞生長情況,并對細胞進行不同倍數拍照(建議受收細胞時的培養基拍一張照片,觀察培養基的顏色和是否有漏液情況,顯微鏡下拍細胞100X,200X各一張),排除細胞本身污染的情況;收到細胞未開封,出現污染狀況我們負責免費發送一株細胞。 收到細胞時如無異常情況,請在顯微鏡下觀察細胞密度,如為貼壁細胞,未超過80%匯合度時,將培養瓶中培養液吸出,留下10ml培養液繼續培養;超過80%匯合度時,請按細胞培養條件傳代培養。如為懸浮細胞,吸出培養液、1000轉/分鐘離心2分鐘,吸出上清,管底細胞用新鮮培養基懸浮細胞后移回培養瓶。 細胞出現問題,不予以重發的情況有哪些? (1)客戶造成細胞污染,不重發; (2)客戶不正確操作致細胞狀態不好,不重發; (3)非推薦細胞培養體系致的細胞狀態不好,不重發; (4)細胞狀態不好,未提供細胞培養前3天照片的,不重發; (5)細胞培養時經其它處理的,不重發; (6)細胞收到2天內,未告知,不重發; (7)視具體情況而定。 CollagenaseII*小鼠膠原酶II規格48T/96T CollagenaseI*小鼠膠原酶I規格48T/96T PCT*小鼠降鈣素原規格48T/96T CGRP*小鼠降鈣素基因相關肽規格48T/96T CT*小鼠降鈣素規格48T/96T ALP*小鼠堿性磷酸酶規格48T/96T bFGF-9*小鼠堿性成纖維細胞生長因子9規格48T/96T bFGF-6*小鼠堿性成纖維細胞生長因子6規格48T/96T bFGF-4*小鼠堿性成纖維細胞生長因子4規格48T/96T bFGF*小鼠堿性成纖維細胞生長因子規格48T/96T 人胚胎心臟成纖維樣細胞;HEH2圖片cyclinD1周期素D1(抗原)0.5mgcyclinD1周期素D1(抗原 CyclinD2周期素D2抗原CyclinD2周期素D2抗原0.5mgCyclinD2周期素D2抗原 周期素D3抗原CyclinD3(C-term)周期素D3抗原0.5mgCyclinD3(C-term CyclinE周期素E/原癌基因抗原CyclinE周期素E/原癌基因抗原0.5mgCyclinE周期素E/原癌基因抗原 細胞球蛋白抗原Cygb(cytoglobin)細胞球蛋白抗原0.5mgCygb(cytoglobin 細胞色素P4503A4抗原CYP3A4(Cytochromep4503A4)細胞色素P4503A4抗原0.5mgCYP3A4(Cytochromep4503A4 CYP450(CytochromeP450monooxygenase)細胞色素P450單氧化酶(多肽抗原)0.5mgCYP450(CytochromeP450monooxygenase 富半胱氨酸肝素結合蛋白61抗原Cyr61/IGFBP10/CCN1(cysteinerich61)富半胱氨酸肝素結合蛋白61抗原0.5mgCyr61/IGFBP10/CCN1(cysteinerich61 冷凍保存細胞之方法: 人胚胎心臟成纖維樣細胞;HEH2圖片冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ (-20 ℃30 分鐘*) → -80 ℃16~18 小時(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 長期儲存。 冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下, 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時, 以防止冰晶過大,造成細胞大量死亡,亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,惟存活率稍微降低一些。 |