冷凍保存細胞之方法: 人腎皮質近曲小管上皮細胞;HK-2圖片冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ (-20 ℃30 分鐘*) → -80 ℃16~18 小時(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 長期儲存。 冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下, 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時, 以防止冰晶過大,造成細胞大量死亡,亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,惟存活率稍微降低一些。 產品描述: 細胞名稱 人腎皮質近曲小管上皮細胞;HK-2圖片 形態特性上皮細胞樣 生長特性貼壁生長 特征特性該細胞屬源于正常腎的近曲小管細胞,通過導入HPV-16E6/E7基因而獲得永生化。將含有HPV-16E6/E7基因的重組的逆轉錄病毒載體pLXSN16E6/E7轉染外生包裝細胞Psi-2,Psi-2細胞產生的病毒再去感染兼嗜性包裝細胞系PA317,后將PA317產生的病毒顆粒導入正常的腎皮質近曲小管細胞。盡管pLXSN16E6/E7中含有新霉素抗性,但未用G418篩選轉導克隆。Southern和FISH分析顯示HK-2細胞來源于單克隆。PCR檢測證實HK-2細胞基因組中含有E6/E7基因。 培養條件DMEM/F12(1:1):Ham'sF12/DMEMedium(DMEH-16/F-1250%Mixturew/oHEPES,withNEAAMedium)10%FBS 傳代方法1:4傳代;2~3天換液1次。 傳代情況P9 凍存條件基礎培養基+5%DMSO+20%FBS 支原體檢測培養法(-) STRAmelogenin:X;CSF1PO:13;D13S317:9;D16S539:11,12;D18S51:12;D19S433:15,15.2;D21S11:28,30;D2S1338:17,25;D3S1358:16,17;D5S818:12;D7S820:10,11;D8S1179:10,14;FGA:20,22;TH01:9;TPOX:8,9;vWA:17,18; 同工酶 染色體57~60
細胞培養操作規程: 一.培養基及培養凍存條件準備: 1)人腎皮質近曲小管上皮細胞;HK-2圖片準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640:GIBCO,貨號21875-091),90%;優質胎牛血清,10%。 2)培養條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養箱濕度為70%-80%。 3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現用現配,液氮儲存。 二.細胞處理: 1)復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準備好的含有4mL培養基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養基的培養瓶中培養過夜。第二天換液并檢查細胞密度。 2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養。 對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法: 方法一:收集細胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。 注意事項: ?1.一般客戶拿到人腎皮質近曲小管上皮細胞;HK-2圖片后,應該注意什么? 客戶收到細胞先不開蓋,放在培養箱靜置若干小時后(看細胞密度而定)在倒置顯微鏡下觀察細胞生長情況,并對細胞進行不同倍數拍照(建議受收細胞時的培養基拍一張照片,觀察培養基的顏色和是否有漏液情況,顯微鏡下拍細胞100X,200X各一張),排除細胞本身污染的情況;收到細胞未開封,出現污染狀況我們負責免費發送一株細胞。 收到細胞時如無異常情況,請在顯微鏡下觀察細胞密度,如為貼壁細胞,未超過80%匯合度時,將培養瓶中培養液吸出,留下10ml培養液繼續培養;超過80%匯合度時,請按細胞培養條件傳代培養。如為懸浮細胞,吸出培養液、1000轉/分鐘離心2分鐘,吸出上清,管底細胞用新鮮培養基懸浮細胞后移回培養瓶。 細胞出現問題,不予以重發的情況有哪些? (1)客戶造成細胞污染,不重發; (2)客戶不正確操作致細胞狀態不好,不重發; (3)非推薦細胞培養體系致的細胞狀態不好,不重發; (4)細胞狀態不好,未提供細胞培養前3天照片的,不重發; (5)細胞培養時經其它處理的,不重發; (6)細胞收到2天內,未告知,不重發; (7)視具體情況而定。 OVAsIgE*小鼠卵清蛋白特異性IgE規格48T/96T 小鼠卵巢癌標志物CA125ELISAKit,48T/96T*小鼠卵巢癌標志物CA125ELISAKit,48T/96T規格48T/96T TrxR*小鼠硫氧還蛋白還原酶規格48T/96T Trx*小鼠硫氧化還原蛋白規格48T/96T PIAb-IgG/IgM*小鼠磷脂酰肌醇抗體IgG/IgM規格48T/96T PL-A2*小鼠磷脂酶A2規格48T/96T PI3K*小鼠磷酸肌醇3激酶規格48T/96T pERK*小鼠磷酸化細胞外信號調節激酶規格48T/96T P-PKC*小鼠磷酸化蛋白激酶C規格48T/96T 小鼠淋巴細胞因子ELISAKit,48T/96T*小鼠淋巴細胞因子ELISAKit,48T/96T規格48T/96T 人腎皮質近曲小管上皮細胞;HK-2圖片細胞角蛋白5抗原CK5(Cytokeratin5)細胞角蛋白5抗原0.5mgCK5(Cytokeratin5 CK7細胞角蛋白7CK7細胞角蛋白70.5mgCK7細胞角蛋白7 human細胞角蛋白7抗原CK7(Cytokeratin7)human細胞角蛋白7抗原0.5mgCK7(Cytokeratin7 CK8(Cytokeratin8)細胞角蛋白8(多肽)0.5mgCK8(Cytokeratin8 酪蛋白激酶2相互作用蛋白1抗原CKIP-1(caseinkinase2interactionprotein1)酪蛋白激酶2相互作用蛋白1抗原0.5mgCKIP-1(caseinkinase2interactionprotein1 CKLF1趨化素樣蛋白CKLF1趨化素樣蛋白0.5mgCKLF1趨化素樣蛋白 CKR-L2(Gprotein-coupledreceptor-2)G蛋白偶聯受體-2(抗原)0.5mgCKR-L2(Gprotein-coupledreceptor-2 Claudin-11peptide少突膠質細胞跨膜蛋白抗原Claudin-11peptide少突膠質細胞跨膜蛋白抗原0.5mgClaudin-11peptide少突膠質細胞跨膜蛋白抗原 |