冷凍保存細胞之方法: 人B淋巴細胞母細胞;NTCC721.221培養(yǎng)冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ (-20 ℃30 分鐘*) → -80 ℃16~18 小時(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 長期儲存。 冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下, 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時, 以防止冰晶過大,造成細胞大量死亡,亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,惟存活率稍微降低一些。 產品描述: 細胞名稱 人B淋巴細胞母細胞;NTCC721.221培養(yǎng) 形態(tài)特性圓 生長特性懸浮生長 特征特性 培養(yǎng)條件RPMI1640(w/oHepes)10%FBS 傳代方法 傳代情況 凍存條件基礎培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS 支原體檢測培養(yǎng)法(-) STRAmelogenin:X,X;CSF1PO:11,12;D12S391:20,24;D13S317:11,12;D16S539:12,12;D18S51:12,13;D19S433:12,14;D21S11:28,28;D2S1338:19,24;D3S1358:14,16;D5S818:12,12;D6S1043:11,14;D7S820:10,11;D8S1179:10,14;FGA:23,23;PentaE:5,12;TH01:9.3,9.3;TPOX:8,12;vWA:14,17; 同工酶 染色體
細胞培養(yǎng)操作規(guī)程: 一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備: 1)人B淋巴細胞母細胞;NTCC721.221培養(yǎng)準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號21875-091),90%;優(yōu)質胎牛血清,10%。 2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。 3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲存。 二.細胞處理: 1)復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。 2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。 對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法: 方法一:收集細胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。 注意事項: ?1.一般客戶拿到人B淋巴細胞母細胞;NTCC721.221培養(yǎng)后,應該注意什么? 客戶收到細胞先不開蓋,放在培養(yǎng)箱靜置若干小時后(看細胞密度而定)在倒置顯微鏡下觀察細胞生長情況,并對細胞進行不同倍數(shù)拍照(建議受收細胞時的培養(yǎng)基拍一張照片,觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況,顯微鏡下拍細胞100X,200X各一張),排除細胞本身污染的情況;收到細胞未開封,出現(xiàn)污染狀況我們負責免費發(fā)送一株細胞。 收到細胞時如無異常情況,請在顯微鏡下觀察細胞密度,如為貼壁細胞,未超過80%匯合度時,將培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)液吸出,留下10ml培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng);超過80%匯合度時,請按細胞培養(yǎng)條件傳代培養(yǎng)。如為懸浮細胞,吸出培養(yǎng)液、1000轉/分鐘離心2分鐘,吸出上清,管底細胞用新鮮培養(yǎng)基懸浮細胞后移回培養(yǎng)瓶。 細胞出現(xiàn)問題,不予以重發(fā)的情況有哪些? (1)客戶造成細胞污染,不重發(fā); (2)客戶不正確操作致細胞狀態(tài)不好,不重發(fā); (3)非推薦細胞培養(yǎng)體系致的細胞狀態(tài)不好,不重發(fā); (4)細胞狀態(tài)不好,未提供細胞培養(yǎng)前3天照片的,不重發(fā); (5)細胞培養(yǎng)時經其它處理的,不重發(fā); (6)細胞收到2天內,未告知,不重發(fā); (7)視具體情況而定。 ANG-1*小鼠血管生成素1規(guī)格48T/96T ANG*小鼠血管生長素規(guī)格48T/96T VCAM-1/CD106*小鼠血管內皮細胞粘附分子1規(guī)格48T/96T VEGFR-3*小鼠血管內皮細胞生長因子受體-3規(guī)格48T/96T VEGFR-2*小鼠血管內皮細胞生長因子受體2規(guī)格48T/96T VEGFR-1*小鼠血管內皮細胞生長因子受體1規(guī)格48T/96T VEGF-D*小鼠血管內皮細胞生長因子D規(guī)格48T/96T VEGF-C*小鼠血管內皮細胞生長因子C規(guī)格48T/96T VEGF-B*小鼠血管內皮細胞生長因子B規(guī)格48T/96T VEGF*小鼠血管內皮細胞生長因子規(guī)格48T/96T 人B淋巴細胞母細胞;NTCC721.221培養(yǎng)半胱胺酸蛋白酶蛋白-4抗原CASP4(Caspase-4)半胱胺酸蛋白酶蛋白-4抗原0.5mgCASP4(Caspase-4 Caspase-1(ICE;CASP-1;P45)天冬氨酸-胱氨酸特異性蛋白酶家族(抗原)0.5mgCaspase-1(ICE;CASP-1;P45 Caspase-10半胱胺酸蛋白酶-10(抗原)0.5mgCaspase-10半胱胺酸蛋白酶-10(抗原 Caspase-12半胱胺酸蛋白酶蛋白-12(多肽)0.5mgCaspase-12半胱胺酸蛋白酶蛋白-12(多肽 Caspase-12(hunman)半胱胺酸蛋白酶蛋白-12抗原(人)0.5mgCaspase-12(hunman Caspase-13半胱胺酸蛋白酶蛋白-13(抗原)0.5mgCaspase-13半胱胺酸蛋白酶蛋白-13(抗原 Caspase-3(CPP32)半胱胺酸蛋白酶蛋白-3(抗原)0.5mgCaspase-3(CPP32 Caspase-6(CT)半胱胺酸蛋白酶蛋白-6(抗原)0.5mgCaspase-6(CT |