細胞培養操作規程: 一.培養基及培養凍存條件準備: 1)人張氏肝細胞;Chang liver價格準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640:GIBCO,貨號21875-091),90%;優質胎牛血清,10%。 2)培養條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養箱濕度為70%-80%。 3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現用現配,液氮儲存。 二.細胞處理: 1)復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準備好的含有4mL培養基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養基的培養瓶中培養過夜。第二天換液并檢查細胞密度。 2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養。 對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法: 方法一:收集細胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。 產品描述: 細胞名稱 人張氏肝細胞;Chang liver價格 形態特性上皮細胞樣 生長特性貼壁生長 特征特性張氏肝細胞1954年從非惡性的人體組織中建立。廣泛應用于病毒學、生化和惡性腫瘤相關的轉移研究。 培養條件RPMI1640(w/oHepes)胎牛血清,10% 傳代方法消化3-5分鐘。1:2。3天內可長滿。 傳代情況PN5 凍存條件*培養基+8%DMSO 支原體檢測陰性 STR 同工酶 染色體
注意事項: ?1.一般客戶拿到人張氏肝細胞;Chang liver價格后,應該注意什么? 客戶收到細胞先不開蓋,放在培養箱靜置若干小時后(看細胞密度而定)在倒置顯微鏡下觀察細胞生長情況,并對細胞進行不同倍數拍照(建議受收細胞時的培養基拍一張照片,觀察培養基的顏色和是否有漏液情況,顯微鏡下拍細胞100X,200X各一張),排除細胞本身污染的情況;收到細胞未開封,出現污染狀況我們負責免費發送一株細胞。 收到細胞時如無異常情況,請在顯微鏡下觀察細胞密度,如為貼壁細胞,未超過80%匯合度時,將培養瓶中培養液吸出,留下10ml培養液繼續培養;超過80%匯合度時,請按細胞培養條件傳代培養。如為懸浮細胞,吸出培養液、1000轉/分鐘離心2分鐘,吸出上清,管底細胞用新鮮培養基懸浮細胞后移回培養瓶。 細胞出現問題,不予以重發的情況有哪些? (1)客戶造成細胞污染,不重發; (2)客戶不正確操作致細胞狀態不好,不重發; (3)非推薦細胞培養體系致的細胞狀態不好,不重發; (4)細胞狀態不好,未提供細胞培養前3天照片的,不重發; (5)細胞培養時經其它處理的,不重發; (6)細胞收到2天內,未告知,不重發; (7)視具體情況而定。 TF*小鼠組織因子規格48T/96T t-PA*小鼠組織型纖溶酶原激活劑規格48T/96T TPA*小鼠組織多肽抗原規格48T/96T HD*小鼠組織蛋白去乙酰化酶規格48T/96T cath-K*小鼠組織蛋白酶K規格48T/96T histon-H2b*小鼠組蛋白H2b規格48T/96T HIS*小鼠組胺規格48T/96T TFR/CD71*小鼠轉鐵蛋白受體規格48T/96T TGFβ2*小鼠轉化生長因子β2規格48T/96T TGF-β1*小鼠轉化生長因子β1規格48T/96T 人張氏肝細胞;Chang liver價格抗原ATEXPA10peptide植物擴張蛋白ATEXPA10(擬南芥)抗原0.5mgATEXPA10peptide植物擴張蛋白ATEXPA10(擬南芥 活化復制因子1ATF1(ActivatingTranscriptionFactor1)活化復制因子10.5mgATF1(ActivatingTranscriptionFactor1 ATF2(ActivatingTranscriptionFactor2)活化復制因子2(多肽)0.5mgATF2(ActivatingTranscriptionFactor2 活化轉錄因子3抗原ATF3(ActivatingTranscriptionFactor3)活化轉錄因子3抗原0.5mgATF3(ActivatingTranscriptionFactor3 活化轉錄因子6抗原ATF6(activatingtranscriptionfactor6)活化轉錄因子6抗原0.5mgATF6(activatingtranscriptionfactor6 毛細血管擴張性共濟失調癥突變蛋白抗原ATM(ataxiatelangiectasiamutated)毛細血管擴張性共濟失調癥突變蛋白抗原0.5mgATM(ataxiatelangiectasiamutated 鈉鉀ATP酶通道蛋白抗原ATP1b2/Na+K+ATPase(ATPase,Na+/K+transporting,beta2polypeptide)鈉鉀ATP酶通道蛋白抗原0.5mgATP1b2/Na+K+ATPase(ATPase,Na+/K+transporting,beta2polypeptide AU1tagpeptideAU1tag標簽多肽AU1tagpeptideAU1tag標簽多肽0.5mgAU1tagpeptideAU1tag標簽多肽 冷凍保存細胞之方法: 人張氏肝細胞;Chang liver價格冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ (-20 ℃30 分鐘*) → -80 ℃16~18 小時(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 長期儲存。 冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下, 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時, 以防止冰晶過大,造成細胞大量死亡,亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,惟存活率稍微降低一些。 |