細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程: 一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備: 1)人胚胎肺成纖維細(xì)胞;WI-38說明書準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號21875-091),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。 2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。 3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲存。 二.細(xì)胞處理: 1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。 2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。 對于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法: 方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。 產(chǎn)品描述: 細(xì)胞名稱 人胚胎肺成纖維細(xì)胞;WI-38說明書 形態(tài)特性成纖維細(xì)胞 生長特性貼壁生長 特征特性WI-38人二倍體細(xì)胞系來自3個月的正常胚胎肺組織。該細(xì)胞系是首株用于人類疫苗制備的人二倍體細(xì)胞系。培液中添加TNFalpha可以促進(jìn)細(xì)胞生長。 培養(yǎng)條件MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10% 傳代方法消化3-5分鐘。1:2。3天內(nèi)可長滿。 傳代情況P(15+5) 凍存條件*培養(yǎng)基+8%DMSO 支原體檢測陰性 STR 同工酶 染色體
注意事項: ?1.一般客戶拿到人胚胎肺成纖維細(xì)胞;WI-38說明書后,應(yīng)該注意什么? 客戶收到細(xì)胞先不開蓋,放在培養(yǎng)箱靜置若干小時后(看細(xì)胞密度而定)在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況,并對細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照(建議受收細(xì)胞時的培養(yǎng)基拍一張照片,觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況,顯微鏡下拍細(xì)胞100X,200X各一張),排除細(xì)胞本身污染的情況;收到細(xì)胞未開封,出現(xiàn)污染狀況我們負(fù)責(zé)免費發(fā)送一株細(xì)胞。 收到細(xì)胞時如無異常情況,請在顯微鏡下觀察細(xì)胞密度,如為貼壁細(xì)胞,未超過80%匯合度時,將培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)液吸出,留下10ml培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng);超過80%匯合度時,請按細(xì)胞培養(yǎng)條件傳代培養(yǎng)。如為懸浮細(xì)胞,吸出培養(yǎng)液、1000轉(zhuǎn)/分鐘離心2分鐘,吸出上清,管底細(xì)胞用新鮮培養(yǎng)基懸浮細(xì)胞后移回培養(yǎng)瓶。 細(xì)胞出現(xiàn)問題,不予以重發(fā)的情況有哪些? (1)客戶造成細(xì)胞污染,不重發(fā); (2)客戶不正確操作致細(xì)胞狀態(tài)不好,不重發(fā); (3)非推薦細(xì)胞培養(yǎng)體系致的細(xì)胞狀態(tài)不好,不重發(fā); (4)細(xì)胞狀態(tài)不好,未提供細(xì)胞培養(yǎng)前3天照片的,不重發(fā); (5)細(xì)胞培養(yǎng)時經(jīng)其它處理的,不重發(fā); (6)細(xì)胞收到2天內(nèi),未告知,不重發(fā); (7)視具體情況而定。 HSP-20*豬熱休克蛋白20規(guī)格48T/96T NE*豬去甲腎上腺素規(guī)格48T/96T GLUT2*豬葡萄糖轉(zhuǎn)運蛋白2規(guī)格48T/96T Prednisolone*豬潑尼松龍規(guī)格48T/96T CORT*豬皮質(zhì)酮/腎上腺酮規(guī)格48T/96T Cortisol*豬皮質(zhì)醇規(guī)格48T/96T BNP*豬腦鈉素/腦鈉尿肽規(guī)格48T/96T SGLT1*豬鈉-葡萄糖共轉(zhuǎn)運載體1規(guī)格48T/96T eNOS-3*豬內(nèi)皮型一氧化氮合成酶3規(guī)格48T/96T eNOS*豬內(nèi)皮型一氧化氮合成酶規(guī)格48T/96T 人胚胎肺成纖維細(xì)胞;WI-38說明書腺苷酸激酶-1AdenylateKinase1(AK-1)腺苷酸激酶-10.5mgAdenylateKinase1(AK-1 ADFP/ADRP/adipophilin脂肪組織分化相關(guān)蛋白抗原ADFP/ADRP/adipophilin脂肪組織分化相關(guān)蛋白抗原0.5mgADFP/ADRP/adipophilin脂肪組織分化相關(guān)蛋白抗原 ADH/AVPpeptide抗利尿激素/血管升壓素抗原(和肽素)1mgADH/AVPpeptide抗利尿激素/血管升壓素抗原(和肽素 AdipoR1(adiponectinreceptor1)脂聯(lián)素受體-1(抗原)0.5mgAdipoR1(adiponectinreceptor1 AdipoR2(adiponectinreceptor2)脂聯(lián)素受體-2(抗原)0.5mgAdipoR2(adiponectinreceptor2 Adiponectin脂聯(lián)素(多肽抗原)0.5mgAdiponectin脂聯(lián)素(多肽抗原 ADM(Adrenomedullin)ProAM-N20Rat,human,mo,pig,dog,bov腎上腺髓質(zhì)素蛋白(N端20肽)0.5mgADM(Adrenomedullin ADM(Adrenomedullin)(22-52)腎上腺髓質(zhì)素(22-52)0.1mgADM(Adrenomedullin 冷凍保存細(xì)胞之方法: 人胚胎肺成纖維細(xì)胞;WI-38說明書冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ (-20 ℃30 分鐘*) → -80 ℃16~18 小時(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 長期儲存。 冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下, 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時, 以防止冰晶過大,造成細(xì)胞大量死亡,亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,惟存活率稍微降低一些。 |